应用酵母双杂交系统筛选E2F1相互作用蛋白

目的:应用酵母双杂交系统从人正常胃黏膜细胞的cDNA文库中筛选E2F1转录因子的相互作用蛋白。方法:以pGBKT7-E2F1为诱饵质粒筛选人正常胃黏膜细胞的cDNA文库,得到阳性克隆,反复验证,并对验证后的阳性克隆进行测序及同源性分析。结果:从人正常胃黏膜细胞的cDNA文库中筛选得到20个阳性克隆,经测序和同源性分析,筛除假阳性克隆,最终得到18个不同的候选基因序列。其中,17个为可知基因序列,它们分别是:组织蛋白酶B、SIVA1、干扰素调节因子7、鸟苷酸激酶1、ATP酶抑制因子1、核糖体蛋白SA、纤溶酶原激活物抑制剂1 mRNA结合蛋白、精氨琥珀酸合酶1、卵泡抑素类似物3、金属硫蛋白2A、内质网钙结合蛋白1、WNT1可诱导信号通路蛋白2、CDC42 效应蛋白1、可溶性半乳糖凝集素结合蛋白1、中胚层发育候选2、外切酶体成分7和含EGF腓骨蛋白样胞外基质蛋白 1,尚有一未知基因片段。结论:应用酵母双杂交系统成功筛选出18种E2F1相互作用蛋白,为进一步探讨E2F1影响胃癌细胞生物学行为的分子机制奠定了基础。     

一种鼻综合术后用镜框式塑形鼻托的设计与应用

随着现代生活水平的提高,求美者对自身形象及外观要求越来越高,鼻综合整形人数逐年增多。由于鼻整形手术位置特殊,位于颜面正中,且术后不宜包扎固定,稍不留意很容易导致假体或填充物发生移位,一旦发生,极易引起鼻部出血、坏死、畸形等不良并发症。目前市面上多使用塑形鼻贴固定,虽可在一定程度上对手术区域形成保护,但由于贴合后多不美观,多数求美者对其存在心理排斥,以致出行不便。本研究设计了一种适用于鼻综合术后佩戴的既美观时尚又安全实用的塑形鼻托。现介绍如下。     

Cdx2过表达对裸鼠人胃癌移植瘤生长和转移的影响

目的观察Cdx2基因过表达对裸鼠人胃癌移植瘤生长和转移的影响。方法利用脂质体将pCMV-Cdx2-HA质粒或pCMV-HA质粒分别转染人胃癌MGC-803细胞,命名为MGC-803/Cdx2细胞或MGC-803/EV细胞。将两种细胞分别注射入裸鼠近腋右背侧皮下,待皮下成瘤后将瘤组织接种于胃,建立裸鼠人胃癌移植瘤模型：接种MGC-803/Cdx2皮下瘤的裸鼠为实验组,接种MGC-803/EV皮下瘤的裸鼠为对照组;30 d后处死裸鼠,观察移植瘤生长、转移情况,并应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR）和Western blot技术检测移植瘤中Cdx2 mRNA和蛋白的表达。结果实验组肿瘤体积为(13.42±2.34）mm3,明显低于对照组的肿瘤体积(17.59±2.80）mm3(P<0.05）;实验组成瘤率(73.3%）低于对照组成瘤率(86.7%）;两组肿瘤转移情况比较,差异无统计学意义(P>0.05）;实验组肿瘤组织Cdx2 mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.05）。结论 Cdx2过表达抑制裸鼠人胃癌移植瘤的生长,但对肿瘤转移无明显影响。     

正交试验优选藏茴香挥发油的提取与包合工艺

目的:优选藏茴香挥发油的提取与包合工艺。方法:以加水量、提取时间、浸泡时间为因素,挥发油提取量为指标,通过正交试验优选挥发油提取工艺;以挥发油与β-环糊精(β-CD)的比例、包合温度、包合时间为因素,挥发油利用率、包合率、综合评分为指标,通过正交试验优选挥发油包合工艺。结果:最佳挥发油提取工艺为加6倍量水浸泡0.5 h,提取挥发油4 h;最佳挥发油包合工艺为挥发油与β-CD的比例为1∶8(V∶m),30℃下搅拌包合2 h。结论:优选的挥发油提取与包合工艺合理、可行,可用于藏茴香挥发油的提取与包合。     

六味明目丸治疗目赤肿痛110例临床疗效观察

目的：观察六味明目丸治疗肝火上炎所致目赤肿痛的临床疗效。方法：选取肝火上炎所致目赤肿痛患者210例作为研究对象。随机分为治疗组110例,对照组1130例;治疗组给予六味明目丸治疗,对照组给予龙胆泻肝丸治疗。对两组患者疗效进行比较。结果：治疗组总有效率97．27％,明显优于对照组的72．00％,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论：六味明目丸治疗肝火上炎所致目赤肿痛疗效显著,值得临床推广应用。     

联合毛果芸香碱滴眼液治疗眼外伤房角后退继发性青光眼

目的探讨联合毛果芸香碱滴眼液治疗外伤引起房角后退继发性青光眼的临床疗效。方法回顾性分析山东省眼科医院2007年8至2012年7收治12例(12只眼)眼外伤房角后退继发性青光眼患者的临床资料,患者均有眼球钝挫伤史且超生生物显微镜(UBM)和前房角镜检查可见外伤眼有不同程度的房角后退,入院眼压为(48.50±3.10)mm Hg,瞳孔直径为(5.15±0.70)mm。治疗:积极治疗原发性损伤,控制炎症,口服及静脉给予降眼压药物联合局部应用0.5%马来酸噻吗洛尔滴眼液、1%布林佐胺滴眼液、酒石酸溴莫尼定滴眼液降眼压治疗3～5 d,眼压不再下降,记录眼压为(35.00±3.55)mm Hg,此时加用0.5%毛果芸香碱滴眼液每日4次。详细记录患者治疗转归,观察眼压变化。结果加用毛果芸香碱眼滴眼液24 h后眼压为(21.90±3.87)mm Hg,平均下降(13.10±1.10)mm Hg。治疗前后瞳孔直径缩小(2.10±0.31)mm。4例患者最终逐渐减量药物致停,眼压正常;8例患者眼压降低后行小梁切除术控制眼压。结论毛果芸香碱滴眼液可以应用于眼外伤房角后退继发性青光眼患者,在减轻炎症的的基础上,联合应用毛果芸香碱滴眼液能够有效的降低眼压。     

尾型同源盒基因2沉默对人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP多药耐药性的逆转

目的探讨尾型同源盒基因2（Cdx2）沉默对逆转人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP多药耐药性的影响。方法将对数生长期的人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP接种于培养板中,分为3组：感染RNA干扰Cdx2基因沉默重组慢病毒载体（pLL—Cdx2-shRNA）作为实验组;感染慢病毒空载体作为阴性对照组;空白对照组不做任何处理。Westernblot及RT—PCR检测Cdx2及凋亡相关基因C—myc、cyclinD1、survivin等蛋白及mRNA表达水平;MTT法检测3组细胞对化疗药物阿霉素、5．氟尿嘧啶、顺铂的敏感性;流式细胞技术检测3组细胞阿霉素的泵出率、细胞周期分布及细胞凋亡情况。计量资料用面±s表示,多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用SNK—q检验,计数资料采用,检验。结果实验组、阴性对照组、空白对照组人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP中各蛋白相对表达量：Cdx2分别为0．187±0．060、0．535±0．033、0．567±0．014,C—myc分别为0．086±0．004、0．379±0．006、0．354±0．004,cyclin D1分别为0．016±±0．005、0．141±0．003、0．162±0．008,survivin分别为0．276±0．012、0．672±0．009、0．517±0．313,与阴性对照组和空白对照组比较,实验组上述蛋白表达量明显下降,差异有统计学意义（F=247．385,3．353,597．882,98．628,P〈0．05）。实验组、阴性对照组、空白对照组mRNA相对表达量：cdx2分别为0．184±0．010、0．894±0．056、0．837±0．049,c—myc分别为0．212±0．022、0．538±0．021、0．545±0．032,cyclinD1分别为0．045±0．009、0．163±0．009、0．157±0．010,survivin分另4为0．401±0．027、0．824±0．016、0．782±0．056,与阴性对照组和空白对照组比较,实验组上述基因mRNA表达量明显下降,差异有统计学意义（F=243．776,161．793,138．523,118．426,P〈0．05）。MTT法检测实验组、阴性对照组和空白对照组人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP阿霉素Ic50值分别为（0．12±0．05）mg／L、（0．33±0．08）mg／L、（0．39±0．15）mg／L,5-氟尿嘧啶Ic50值分别为（0．52±0．13）mg／L、（4．10±1．25）mg／L、（4．05±1．44）mg／L,顺铂Ic50值分别为（0．82±0．13）mg／L、（2．81±0．50）mg／L、（3．28±1．03）mg／L。实验组、阴性对照组、空白对照组中人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP对阿霉素泵出率分别为0．21％、0．37％和0．35％。与阴性对照组和空白对照组比较,实验组人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP对阿霉素、5一氟尿嘧啶和顺铂的Ic。值及对阿霉素的泵出率显著降低,差异均有统计学意义（F=8．101,13．854,15．159,X2=7．106,P〈0．05）。实验组、阴性对照组与空白对照组人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDPG0／G1期细胞比例分别为17．87％、34．71％、37．20％,与阴性对照组和空白对照组比较,实验组G0／G1期细胞减少,差异有统计学意义（X^2=1．055,P〈0．05）;实验组G1／M期的细胞比例为11．93％,细胞凋亡率为31．13％,均明显高于阴性对照组的0．26％、16．58％和空白对照组的0．35％、13．18％,差异有统计学意K（X^2=2．249,11．030,P〈0．05）。结论Cdx2基因沉默可有效提高人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP对化疗药物的敏感性,增加化疗药物在胃癌细胞内的蓄积浓度,逆转人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP的耐药性。