应用蛋白质芯片技术筛选人舌鳞癌细胞株差异性炎症因子的初步研究

目的研究应用蛋白质芯片(抗体芯片)技术筛选、分析人舌鳞状细胞癌细胞株中差异性炎症因子的效果,为进一步探讨口腔癌与炎症的关系奠定基础。方法体外培养人舌鳞癌细胞株UM-1、CAL-27、Tca-8113和人正常口腔黏膜上皮细胞,消化后分别提取胞内、胞外蛋白,上芯片孵育,封闭,清洗。采用激光扫描仪扫描芯片,Axon GenePix Pro6.0软件提取芯片数据,对获得的80种炎症因子表达数据采用AAH-CYT-G5软件分析,上调因子信号值以大于200、比值大于2.0为纳入标准;下调因子信号值以大于200、比值小于0.66为纳入标准,分别对3种人舌鳞癌细胞株(UM-1、CAL-27、Tca-8113)与人正常口腔黏膜上皮细胞,以及高侵袭性细胞株(UM-1、CAL-27)与低侵袭性细胞株(Tca-8113)进行两两比较,筛选出差异性炎症因子。挑选3种显著差异性炎症因子,用酶联免疫吸附法再次检测其蛋白表达,所得结果用单因素方差分析进行统计学分析,进一步验证芯片法所获得的结果。结果根据纳入标准,从检测的80种因子中筛选出有表达的炎症因子9个,包括干扰素诱导蛋白10(inter-feron inducible protein10,IP-10)、巨噬细胞炎症蛋白-1β(macrophage inflammatory protein1β,MIP-1β)、巨噬细胞炎症蛋白-3α(macrophage inflammatory protein-3α,MIP-3α)、骨保护素蛋白(osteoprotegerin,OPG)、调节活化蛋白(regulated upon activation normal T-cell expressed and secreted,RANTES)、白细胞介素1β(interleukin1β,IL-1β)6种舌鳞癌细胞株中高表达的细胞因子,及单核细胞趋化因子4(monocyte chemoattractant protein4,MCP-4)、胰岛素样生长因子结合蛋白4(insulin-like growth factor binding protein-4,IGFBP-4)、转化生长因子-β3(transforminggrowth factor-β3,TGF-β3)3种舌鳞癌细胞株中低表达的细胞因子。鳞状细胞癌细胞和正常口腔鳞状上皮细胞之间比较,胞内IL-1β呈高表达,MCP-4呈低表达,胞外OPG呈高表达;高、低侵袭性细胞株之间比较,胞内RANTES呈高表达,IGFBP-4、TGF-β3呈低表达,胞外IP-10、MIP-1β、MIP-3α呈高表达。酶联免疫吸附法检测发现UM-1和CAL-27胞外IP-10、MIP-1β、MIP-3α的表达量和Tca-8113相比呈高表达,差异有统计学意义(P<0.05)。其结果与芯片筛选结果一致。结论蛋白质芯片技术能够较为准确地筛选出不同舌鳞癌细胞株之间差异性炎症因子,这些差异性炎症因子可能与肿瘤细胞的生物学行为有一定的联系。     

MMP12和TIMP2mRNA在大鼠舌黏膜癌变过程中的表达

目的 观察基质金属蛋白酶-12(MMP12)及基质金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP2) mRNA在4-亚基硝氧喹啉(4NQO)诱发大鼠舌黏膜癌变过程中的动态变化,探讨其在实验性大鼠舌黏膜癌变中的作用.方法 60只雌性SD大鼠随机分为3组,分别给予正常饮水、25 ppm(mg/L)的4NQO水溶液16、24周.舌部病变组织分成两等分,分别进行组织病理学分析和荧光定量PCR检测.结果 (1)4NQO诱发大鼠舌黏膜癌变过程中,正常饮水组无组织病理学改变,4NQO诱癌大鼠16周舌黏膜出现上皮中-重度异常增生,诱癌24周后主要病理学变化为舌鳞状细胞癌.(2)与正常组织相比,MMP12 mRNA表达水平在癌前病变中升高1.51倍,在舌癌中升高4.86倍(P＜0.01),MMP12 mRNA表达随病理程度增加呈现递增趋势;与正常组织相比,TIMP2 mRNA在癌前病变中表达升高2.62倍(P＜0.01),在舌癌中表达升高2.06倍(P＜0.05),TIMP2 mRNA表达随病理程度增加呈现先增加后下降的趋势;舌黏膜癌变过程中MMP12与TIMP2 mRNA表达比例失调.结论 MMP12、TIMP2 mRNA的高表达参与4NQO诱发的大鼠舌黏膜癌变过程,两者表达的比例失调与舌黏膜癌变密切相关.     

量子点标记人舌癌细胞survivin siRNA的研究

目的　研究量子点标记人舌癌Tca8113细胞survivin siRNA的方法,为后期以量子点为载体转染siRNA进行基因沉默的研究提供理论依据及技术支持。方法 表面带正电荷的水溶性量子点,通过正负电荷的吸引力与表面带负电荷的survivin siRNA结合, 在siRNA定量的基础上改变量子点的量,取三种比例进行试验,并设立阳性对照组、阴性对照组,通过琼脂糖凝胶电泳观察siRNA条带的亮度分析量子点标记siRNA的最佳比例。结果 实验组的siRNA条带亮度均比阳性对照组小,其中实验组3的siRNA条带亮度最小且与阴性对照组接近,说明该组中量子点与siRNA结合最佳。结论 量子点标记人舌癌Tca8113细胞survivin siRNA的最佳比例为1:2,且该比例在量子点的安全使用范围内。     

量子点为载体转染survivin siRNA至人舌鳞癌Tca8113细胞的研究

目的靶向survivin基因的siRNA通过量子点为载体转染至人舌鳞癌Tca8113细胞中,研究其对survivin基因表达的影响,为量子点在肿瘤的基因治疗方面提供实验依据。方法 Survivin siRNA通过量子点转染至人舌鳞癌Tca8113细胞中,同时设立LIPOFECTTAMINE2000脂质体为转染载体的对照组以及未转染的空白组,采用实时定量RT-PCR检测各组Tca8113细胞中survivin mRNA表达的改变情况。结果实验组用50pmolQD转染100pmol survivin siRNA入Tca8113细胞48h后,检测到survivin siRNA mRNA表达量相对于空白组下降64%,QD与siRNA的使用比例为1∶2;对照组中用100pmol lipofectamine2000脂质体转染100pmol survivin siRNA入Tca8113细胞48h后,检测到survivin siRNA mRNA表达量相对于空白组下降90%,QD与siRNA的使用比例为1∶1。结论量子点为载体转染survivin siRNA能够有效的抑制Tca8113细胞survivin mRNA的表达,量子点有望作为RNA干扰技术的新型载体。     

广州市东山区2002年登革热流行病学特征分析

目的 明确东山区登革热流行因素，探讨预防控制措施。方法 对各医院收治病例的报告进行流行病学个案调查。结果 2002年5～11月东山区发生了Ⅰ型登革热疫情暴发流行，本区常住人口发病共314例，发病率51．43／10万，无死亡病例。疫情波及10条行政街，有多个暴发点，其发病年龄最大87岁，最小2岁，男性143例，女性17l例，血清学检查登革热抗体阳性277例。结论 本次登革热流行是继1995年以来发病率最高、暴发点多、夹杂家庭聚集、流行时间长的一次发病，且传染源未明，预防控制是一项长期、复杂的工程，要持之以恒。     

广州市东山区传染性非典型肺炎流行病学调查分析

目的 了解广州市东山区传染性非典型肺炎(SARS)病例分布情况及其流行特征。方法 对东山区传染性非典型肺炎病倒进行流行病学调查及分析。结果 2003年1月17日东山区出现首例传染性非典型肺炎病例，最后一例发病时间为4月30日。共发生病例122例，死亡8例，病死率为6．56％。2月份为发病高峰，其发病人数占总发病人数的51．64％，3、4月份发病人数逐步下降；21～30岁年龄组和31～40岁年龄组发病例数分别占总数的25．41％和20．49％；医务人员发病在职业人群中发病最高，占总数的28．68％。结论 在采取了有效的预防控制措施后传染性非典型肺炎的流行在东山区内已受到遏制。     

东山区5间小学学生乙肝表面抗体阳性率分析

目的了解东山区小学生乙肝表面抗体阳性率情况,为乙肝疫苗加强免疫提供依据。方法选取东山区五间具代表性学校共3059名学生,抽血检验乙肝表面抗原、表面抗体。结果HBsAg阳性13名,阳性率0.42%,HBsAg阴性3046名儿童中,HBsAb阳性2027名,阳性率68.02%。为进一步了解不同年龄组、不同性别儿童抗体阳性率情况,随机抽取304名儿童,经χ2检验,男女儿童抗体阳性率差异对比χ2=1.19,P>0.05,差异无统计学意义。6～9岁组与10～11岁组儿童抗体阳性率差异对比χ2=17.59,P<0.005,差异有统计学意义。结论在9岁组(则四年级组)开展乙肝加强免疫接种是必要的。     

广州市O157∶H7大肠杆菌的监测

1996年在日本发生了Ｏ157∶Ｈ7大肠杆菌引起的暴发流行 ,引起了全世界的关注。我国自 1986年以来已在徐州[1] 、山东[2 ] 等地发现了Ｏ157∶Ｈ7大肠杆菌的散发病例 ,为了了解Ｏ157∶Ｈ7大肠杆菌在我市的感染情况 ,我站于 1997年起参加全国Ｏ157∶Ｈ7监测网络工作 ,现将结果报告如下。1　材料和方法1 1　监测点1 1 1　病人监测点　选择广州市儿童医院、广州市东山区人民医院、东山区红会医院肠道门诊作为监测点。1 1 2　食品监测点　选择广州市 8个海水产品、生肉 (猪、牛、羊、家禽 )冷库和供应全市麦当劳肉饼冷库以及 10家奶牛场与 1家收奶…     

显微根尖手术联合MTA治疗难治性慢性根尖周炎的研究

目的:研究在显微根尖手术治疗难治性慢性根尖周炎时应用MTA的可行性、特点、成功率及相关影响因素。方法:分析2013年1月~2015年12月间本院牙体牙髓科完成的显微根尖外科手术106例计146颗难治性慢性根尖周炎患牙的临床资料,其中上颌前牙75例、下颌前牙13例、上颌前磨牙6例、下颌前磨牙4例、上颌磨牙4例、下颌磨牙4例。手术包括根尖切除、根尖倒预备、根尖倒充填主要步骤,术后1年回访,通过临床症状和放射学检查评估疗效,并对预后影响因素进行卡方检验分析。结果:显微根尖外科手术联合MTA应用的1年成功率达95.9％(140/146),根据患者性别、年龄、牙位、根尖病灶范围分别统计手术疗效,组间差异均无统计学意义。失败5例6颗患牙,主要原因为根折及合并重度牙周炎。结论:在治疗难治性慢性根尖周炎时采用显微根尖手术联合MTA应用可取得满意效果;显微根尖手术是治疗慢性根尖周炎的有效手段。