草分支杆菌疫苗治疗哮喘模型小鼠的实验研究

目的　研究草分支杆菌疫苗对哮喘模型小鼠的疗效及其作用机制。方法　将 18只BALB/c小鼠分为3组 ,每组各 6只 ,其中卵蛋白致敏哮喘组 (OVA组 )和草分支杆菌疫苗治疗组 (Utilin组 )皮下注射卵蛋白致敏制作哮喘模型 ,然后用卵蛋白激发 2次 ;阴性对照组 (NS组 )皮下注射生理盐水 (NS) ,然后NS激发 2次。Utilin组在激发前后分别给予草分支杆菌疫苗 0 .5 μg腹腔注射 3次 ,其他两组不作干预。 3组分别在第 2次激发后第 1、2、3、4周眼眶后静脉丛采血测OVA特异性免疫球蛋白IgE ,并于激发后第 4周处死小鼠测肺泡灌洗液 (BALF)中的细胞总数及嗜酸性粒细胞 (EOS)计数 ,肺组织病理切片观察形态学改变 ,并测定脾细胞培养上清液中OVA特异性IFN γ。结果　Utilin组BALF中细胞总数为 (2 9.5 1± 5 .81)× 10 4 /mL、EOS为 (2 .88± 0 .96 )× 10 4 /mL ,明显低于OVA组 [分别为 (4 0 .15± 6 .12 )× 10 4 /mL和 (6 .91± 1.92 )× 10 4 /mL],P <0 .0 5 ;Utilin组肺组织炎症反应较OVA组明显减轻 ;Utilin组脾细胞培养上清液中OVA特异性IFN γ的浓度为 (4 6 9± 86 )pg/mL ,明显高于OVA组 (193± 80 ) pg/mL ,P <0 .0 5 ;Utilin组激发后第 3周和第 4周OVA特异性IgE分别为 (0 .2 99± 0 .0 92 )(OD值 ) ,(0 .2 6 7± 0 .0     

CpG DNA预防小鼠哮喘模型的形成

目的　研究含胞嘧啶鸟嘌呤核苷酸的免疫刺激元件 (CpGDNA)能否预防卵蛋白致敏小鼠哮喘模型的形成。方法　将 18只BALB/c小鼠均分为 3组 ,其中卵蛋白致敏哮喘组 (OVA组 )和CpG预防组 (CpG组 )皮下注射卵蛋白致敏制作哮喘模型 ,然后用卵蛋白激发 2次 ;阴性对照组 (NS组 )皮下注射生理盐水 ,然后生理盐水激发 2次。CpG组在致敏前腹腔注射CpGDNA 10 0 μg/ 10 0 μL ,其他两组不作干预。 3组分别在第 2次激发后 2 4h测外周血OVA特异性IgE、IgG1、IgG2a,并处死小鼠测肺泡灌洗液 (BALF)中的细胞总数及嗜酸性粒细胞 (EOS)计数 ,肺组织病理切片观察形态学改变 ,并测定脾细胞培养上清液中OVA特异性IFN γ。结果　CpG组BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞明显低于OVA组 ,P <0 .0 5 ;CpG组肺组织炎症反应较OVA组明显减轻 ;CpG组脾细胞培养上清液中OVA特异性IFN γ的浓度明显高于OVA组 ,P <0 .0 5 ;CpG组外周血OVA特异性IgE和IgG1均低于OVA组 ,P <0 .0 5 ;CpG组IgG2a较OVA组为高 ,P <0 .0 5。结论　CpGDNA能预防卵蛋白致敏小鼠哮喘模型的形成     

免疫途径及载体对乙肝病毒DNA疫苗免疫效果影响的研究

目的探讨ＤＮＡ载体结构及接种途径对ＤＮＡ疫苗免疫效果的影响。方法分别构建插入ＨＢＶ表面抗原编码基因的表达载体ｐｃＤＮＡ１．１／ＳＡ（无抗性基因）和ｐｃＤＮＡＩ／Ａｍｐ／ＳＡ（含氨苄青霉素抗性基因）,肌注小鼠后比较其诱生特异性免疫应答的能力;同时比较不同接种途径（肌内、皮内、皮肤划痕）及ＣｐＧ免疫刺激元件（ＩＳＳ）对ＤＮＡ疫苗诱生免疫效果的影响。结果ｐｃＤＮＡＩ／Ａｍｐ／ＳＡ的免疫效果优于ｐｃＤＮＡ１．１／ＳＡ。ｐｃＤＮＡ１．１／ＳＡ的免疫效果可被ＩＳＳ增强,而ｐｃＤＮＡＩ／Ａｍｐ／ＳＡ诱生特异性免疫应答的能力则可被ＩＳＳ抑制;诱生免疫应答的能力以肌内注射最强,皮内注射免疫其次,皮下划痕法较弱。结论不同ＨＢｓＡｇ表达载体诱生免疫应答的能力不尽相同;ＣｐＧ免疫刺激元件在决定ＤＮＡ疫苗免疫原性中起重要作用,可增强不含相应结构ＤＮＡ疫苗的免疫效果;皮内注射可诱发与肌内接种相似的免疫应答,是一种简便、有效的免疫接种途径     

用Calcein释放实验检测HBs DNA疫苗诱生的特异性CTL活性

Ｃａｌｃｅｉｎ释放实验的基本原理为用荧光染料ＣａｌｃｅｉｎＡＭ标记靶细胞。脂溶性的ＣａｌｃｅｉｎＡＭ进入细胞后转变为水溶性 ,从而可潴留在细胞内而使细胞质染色 ,细胞杀伤后水溶性的Ｃａｌｃｅｉｎ可从细胞内释放出来 ,因此可用靶细胞释出的Ｃａｌｃｅｉｎ荧光值反映杀伤率。ＬｉｃｈｔｅｎｆｅｌｓＲ等报道该方法安全简易 ,与51 Ｃｒ释放法比较符合 ,可能替代51 Ｃｒ释放实验的方法。我们建立了用ＣａｌｃｅｉｎＡＭ标记靶细胞检测ＣＴＬ活性的方法 ,并对经不同途径接种ＨＢｓＤＮＡ疫苗的ＢＡＬＢ ｃ小鼠针对ＨＢｓ的特异性ＣＴ…     

免疫刺激DNA序列与过敏原联用对哮喘小鼠模型气道过敏性炎症的作用

目的　观察免疫刺激DNA序列 (ISS DNA)单用和与过敏原卵白蛋白 (OVA)合用 ,对支气管哮喘 (简称哮喘 )小鼠模型气道过敏性炎症的作用及作用维持时间。方法　BALB/c小鼠 36只 ,分ISS组 (A组 ) 12只、ISS +OVA组 (B组 ) 12只、OVA组 (C组 ) 6只和生理盐水 (NS)组 (D组 ) 6只。A、B、C组用OVA致敏及激发。A组和B组根据注射次数再分A1、B11次注射组 (1次腹腔注射ISS DNA 10 0μg或ISS DNA 10 0 μg +OVA 10 μg)和A2 、B2 2次注射组 (2次腹腔注射ISS DNA或ISS DNA +OVA)。各组在第 1次激发后 6周中 ,每周采血 1次测特异性IgE ,最后处死小鼠测支气管肺泡灌洗液 (BALF)中细胞计数及分类 ,肺组织病理检查 ,检测脾细胞分泌γ干扰素 (IFN γ)的水平。结果　BALF中嗜酸细胞 (EOS)数A1组为 (2 39± 0 81)× 10 4/ml;A2 组为 (2 .6 2± 0 .77)× 10 4/ml;B1组为 (1.80± 0 .12 )× 10 4/ml;B2 组为 (1.84± 0 .6 7)× 10 4/ml,与C组 [(12 .4 3± 2 .13)× 10 4/ml]比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。脾细胞分泌的IFN γA1组为 (5 10± 10 2 )pg/ml;A2 组为 (492± 98)pg/ml;B1组为 (5 32± 12 0 )pg/ml;B2组为 (46 9± 132 )pg/ml,与C组 [(194± 80 )pg/ml]比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。血清IgE前 4周B组与C组比较     

巨噬细胞对转染粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的胰腺癌细胞株PC-3的杀伤作用

目的 研究巨噬细胞对转染粒细胞-巨噬细胞细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因后的胰腺癌细胞系PC-3的杀伤作用。方法 巨噬细胞由小鼠腹腔注射ConA刺激后分离培养而获得。通过脂质体转染法,将含GM-CSF基因的质粒及空质粒转染至PC-3细胞。以上基因的表达由Western blot免疫印迹法鉴定。采用Cal-cein-AM释放法行巨噬细胞杀伤试验以评估GM-CSF对肿瘤免疫调节作用。结果 巨噬细胞对转染GM-CSF基因后的PC-3细胞杀伤率较空质粒组显著增高(P<0.001)。结论 GM-CSF能增强巨噬细胞杀伤PC-3细胞的能力,提示GM-CSF对于胰腺癌的免疫治疗有潜在价值。