小鼠出生前后角膜神经分布的变化

目的了解小鼠出生前后角膜神经纤维密度与总长度的变化。方法 20只C57/BL6小鼠根据出生前后不同时期分为4组,分别为胚胎期17d(E17d)组、胚胎期20d(E20d)组、出生当天(P0d)组、出生后3d(P3d)组,每组5只鼠10只角膜。采用β-微管蛋白Ⅲ抗体对不同组别的小鼠角膜进行整铺片免疫荧光染色。使用荧光显微镜显示各年龄组的角膜神经分布;使用DeltaVisionCore拍摄角膜背鼻侧、背颞侧、腹鼻侧和腹颞侧的神经纤维图像,分别计算并比较不同组别小鼠的角膜表面积、角膜神经纤维密度与总长度以及角膜各分区的神经纤维密度。结果 E17d组、E20d组、P0d组和P3d组小鼠的角膜表面积分别为(0.34±0.03)mm2、(0.39±0.03)mm2、(0.46±0.06)mm2和(0.51±0.01)mm2,角膜表面积随年龄的增长而逐渐增大,但是相邻年龄组间差异均无统计学意义(均为P>0.05)。E17d组、E20d组、P0d组和P3d组的角膜神经纤维密度分别为(9.11±0.65)mm·mm-2、(13.04±1.83)mm·mm-2、(9.02±0.45)mm·mm-2和(12.87±1.04)mm·mm-2;E17d组、E20d组、P0d组和P3d组的角膜神经纤维总长度分别为(3.10±0.59)mm、(5.09±1.03)mm、(4.15±0.46)mm和(6.56±1.11)mm。除了E20d组到P0d组,其余相邻年龄组间的角膜神经纤维密度和总长度都随年龄的增长而增加(P<0.05)。角膜4个分区的神经纤维密度变化趋势与整个角膜的神经纤维密度变化趋势一致。结论小鼠出生前后角膜神经纤维有变化,出生当天小鼠的角膜神经纤维密度与总长度低于出生前,随后出现追赶性增长。     

扰乱昼夜节律对小鼠角膜创伤修复的影响

目的:本研究旨在观察昼夜节律对角膜创伤修复的影响。方法:选用C57BL/6雄性小鼠,在小鼠角膜中央直径为2 mm的圆形区域,用高尔夫样刀机械性去除其上皮层,使用荧光素钠显色创伤面积,动态观察上皮层修复的动力学,并观察白细胞、血小板和分裂细胞的动态变化。结果:全昼(12 h light/12 h light,LL)和全夜(12 h dark/12 h dark,DD)组角膜创伤修复速率小于对照组(12 h light/12 h dark,LD),表现为再上皮化延迟、上皮细胞数量降低、血管扩张直径增大、白细胞和血小板募集的发生延迟,但白细胞和血小板数目显著增多。结论:扰乱昼夜节律延迟炎症反应的发生,但加剧炎症反应;延迟再上皮化过程,最终显著抑制角膜创伤修复过程。     

基于流式细胞术快速定量分析小鼠角膜组织中嗜中性粒细胞方法的建立

目的建立一种基于流式细胞术快速定量分析小鼠角膜组织中嗜中性粒细胞的技术和方法。方法选取6~8周龄SPF级雌性C57BL/6小鼠15只,使用高尔夫样刀机械性刮除小鼠角膜上皮细胞层,生成直径2 mm的创面,在创伤后18 h切除带有完整角膜缘的小鼠角膜,采用胶原酶I和DNA酶联合消化法获得单细胞悬液,采用FACSCanto流式细胞分析仪画门技术分选角膜细胞中嗜中性粒细胞的数量。另取6只小鼠,应用随机数字表法分为创伤组和正常组,每组3只,使用抗CD45、Ly6G和CD11b荧光抗体进行角膜细胞染色,计数并比较未创伤和创伤角膜中嗜中性粒细胞的数量变化。结果建立流式细胞仪检测角膜组织中嗜中性粒细胞的分析流程。CD45+细胞占角膜组织所有细胞的比例为(20.93±1.72)%,在角膜CD45+细胞群中可分选出Ly6G+CD11b+双阳性嗜中性粒细胞群,Ly6G+和CD11b+细胞在CD45+细胞中所占比例分别为(75.50±3.25)%和(93.40±4.53)%,Ly6G+和CD11b+共阳性细胞占角膜组织CD45+细胞的比例为(67.33±2.80)%。创伤后18 h,角膜中角膜缘募集嗜中性粒细胞数量为(151.47±10.82)%,多于正常角膜的(15.36±1.02)%,差异有统计学意义(t=21.689,P<0.01)。结论流式细胞检测方法可快速、准确地定量分析创伤角膜中嗜中性粒细胞群,为进一步评价不同原因造成角膜炎症反应中嗜中性粒细胞的数量变化提供了一种快速定量分析方法。     

昼夜节律变化对RORs表达及RORs激动剂SR1078对角膜上皮创伤修复的影响

目的:探讨昼夜节律变化对视黄酸相关孤儿受体(RORs)表达量及RORs激动剂SR1078对角膜上皮创伤修复的影响。方法:选取SPF级6~8周龄C57BL/6雌性小鼠228只,采用随机数表法将其中180只小鼠分为昼夜节律正常组、全昼组、全夜组、昼夜颠倒12 h组和昼夜颠倒3周组,每组36只。将剩余48只小鼠采用随机数表法...     

鸡胚发育过程中角膜神经的分布和变化

背景 了解动物或人的角膜神经分布和发育过程对于角膜疾病的临床和基础研究具有重要意义,目前关于动物角膜神经发育和特异性定位的研究结果已有发表,但是有关胚胎发育阶段角膜神经纤维的分布规律和角膜神经纤维的定量研究结果尚少见. 目的 了解鸡胚发育过程中角膜神经纤维的分布,并定量评价随着鸡胚龄增长其角膜神经纤维长度和密度的变化规律. 方法 选取胚胎期6 ～20 d(E6～E20)的鸡胚作为角膜胚胎发育模型,获取相应胚期的带有角膜缘的完整鸡角膜,使用β-tubulinⅢ抗体进行角膜免疫荧光染色,以标记角膜神经,将角膜上皮面朝上做角膜上皮的放射状切开,制备全角膜铺片,用含DAPI抗荧光淬灭缓冲甘油封片.利用正置荧光显微镜拍摄获取整个角膜的神经纤维图像,使用Photoshop CS4测量不同胚龄的鸡胚角膜表面积和神经纤维束数量,采用Imaris x64 7.4.2软件测量不同胚龄的鸡胚角膜神经纤维总长度和密度.结果 全角膜铺片显示,鸡胚E6 ～ E8可见神经束从颞侧巩膜进入角膜缘,E9 ～ E10时神经纤维在角膜缘呈环状分布,E11～ E15时延伸进入角膜中央,E16 ～ E20时角膜形成神经纤维丛.E6～E20期间,鸡胚角膜表面积、角膜神经纤维长度、角膜神经纤维密度均随着胚龄的增长而逐渐增加,总体比较差异均有统计学意义(F=127.007、227.051、67.748,均P＜0.01),鸡胚角膜表面积与角膜神经纤维长度间呈强正相关(r=0.863,P＜0.01).鸡胚角膜神经纤维束从E13开始出现,为(59.00±1.14)/mm2,此后缓慢增加,至E18达到高峰,数量为(576.75±29.16)/mm2,至E20时角膜神经纤维束数量减少,为(299.67±25.46)/mm2,不同胚龄期鸡胚角膜神经纤维束数量的总体比较差异有统计学意义(F=13.759,P=0.000).结论 鸡胚角膜神经发育从E9开始,随着发育鸡胚角膜表面积、角膜神经纤维总长度及密度均快速增加.