新的肿瘤相关抗原(OVA66)的研制和临床初步应用

目的　制备OVA6 6蛋白和其抗体,探讨其检测肿瘤的应用价值。方法　应用原核表达技术和Ni2 亲和层析法,制备纯化的OVA6 6蛋白,经SDS- PAGE电泳鉴定,将纯化蛋白加佐剂免疫家兔,获得抗OVA6 6蛋白抗血清,并应用WesternBlot测定其滴度和特异性。利用OVA6 6蛋白和其抗体分别建立ELISA和免疫组化法,测定正常人和肿瘤患者的血清OVA6 6抗体水平和肿瘤组织标本中OVA6 6蛋白表达量。结果　获得的高纯度OVA6 6蛋白和高滴度、特异性抗OVA6 6抗血清。ELISA检测显示,正常人和肿瘤患者血清抗体水平存在显著性差异(P <0 .0 0 1)。正常人组OD均值为0 . 2 0±0 0 5 ,肿瘤患者组OD均值为0 . 36±0. 12 ,肿瘤患者中阳性率为4 0 % (46 / 116 )。免疫组化法结果表明,肿瘤组织标本阳性率达81% (34/ 4 2 ) ,而正常组织均为阴性。结论　应用OVA6 6蛋白和其抗血清建立的检测方法,为临床肿瘤辅助诊断的应用奠定基础。     

CD4+CD25+调节性T细胞与克罗恩病发病关系

目的研究克罗恩病（CD）患者外周血白细胞介素（IL）-6水平与外周CD4＋CD25^＋调节性T细胞（Treg细胞）频率及体外抑制功能的变化在CD发病中的作用。方法应用流式细胞术检测CD患者与正常对照者外周CD4^＋CD25^＋Treg细胞的频率及表型以及特征性标志叉状头／翅膀状螺旋转录因子（Foxp3）的表达，同时通过MACS缓冲液分选出外周血CD4^＋CD25^＋T细胞和CD4＋CD25^-T细胞，应用[^3H]-胸腺嘧啶渗入法研究CD4^＋CD25^＋T细胞对自体CD4^＋CD25^-效应T细胞增殖的抑制能力。酶联免疫吸附法（ELISA）检测外周血IL-6水平。结果活动性CD患者外周血IL-6水平显著高于非活动性患者及正常对照者。活动性CD患者外周CD4^＋T细胞中CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞的频率显著低于非活动性CD患者，差异有统计学意义。体外抑制功能试验同样提示活动性CD患者的CD4^＋CD25^＋Treg细胞抑制功能减弱。结论CD4^＋CD25^＋Treg细胞抑制功能减弱与CD发病可能有关，可初步解释CD患者出现的免疫耐受缺失现象。     

癌胚抗原放免分析(单克隆抗体)及其初步临床应用

本文报导在进行八株CEA-MAb免疫学性状研究的基础上建立的CEA-MAb合剂RIA;测定正常人、恶性肿瘤和良性疾病病人血清标本的初步结果以及CEA多克隆抗体(PAb)RIA法的对比研究.     

紫杉醇和顺铂诱导下的凋亡卵巢癌细胞对树突细胞提呈功能影响

目的:本研究旨在探索紫杉醇、顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡后能否具有较强的免疫原性,并可以被抗原提呈细胞交叉提呈并促进免疫应答.方法:用巨噬细胞-集落刺激因子(GM-CSF)和白介素-4(IL-4)刺激人外周血单核细胞分化诱导为树突状细胞(DC),6d后将DC和经紫杉醇联合顺铂在体外诱导发生凋亡的人卵巢癌细胞株共同培养,并以冻融细胞共培养DC组和单独DC组作对照,共培养4 h后,进行激光扫描共聚焦显微镜观察DC细胞对凋亡细胞的吞噬作用,同时以流式细胞术(FCM)检测不同培养组DC的分化和成熟程度.结果:紫杉醇、顺铂诱导的凋亡卵巢癌细胞可被DC有效吞噬,与对照组相比,凋亡组DCs的表达及成熟度均明显增高,并具有统计学意义(P＜0.05).结论:紫杉醇、顺铂诱导的凋亡卵巢癌细胞具有较强的免疫原性,可以促进DC的分化和成熟.     

肿瘤细胞HLA分子的表达及IFN—γ的调控作用

目的 研究肿瘤细胞表达HLA分子及IFN－γ的调控作用。检测TIL细胞中T细胞亚群的变化,并与PBMC比较。方法 采用FACS检测细胞表达的CD抗原,采用ABC免疫组化染色检测肿瘤细胞HLA－Ⅰ,Ⅱ类分子的表达。以IFN－γ诱导建系的卵巢癌细胞表达HLA分子。结果 明细胞癌患者TIL细胞中的T细胞明显多于大肠癌患者。肿瘤患者PBMC中的T细胞数少于正常对照;肿瘤组织HLA－Ⅰ类抗原的表达明显低于正常组织,HLA－Ⅱ类抗原泊表达高于正常组织。与正常组织相比较,大肠癌患者比肾细胞癌患者HLAⅠ类抗原的表达更低。IFN－γ可诱导建系卵巢癌细胞表达HLA－Ⅰ类抗原,但不能诱导HLA－Ⅱ类抗原的表达。结论 肿瘤组织HLA表达的变化与肿瘤组织中TIL的数有关;IFN－γ能选择性地诱导卵巢癌细胞表达HLA－Ⅰ类分子,在抗肿瘤免疫中具有重要的意义。     

子宫内膜异位症患者γδ＋T细胞及NK细胞的功能分析

目的 分析子宫内膜异位症患者γδ＋T细胞和天然杀作细胞（NK）功能的变化,以及探讨患者腹腔液对正常人γδ＋T细胞细胞和自然杀伤细胞（NK）功能的影响。方法 采用免疫荧光细胞检测及细胞毒活性检测法,分析22例子宫内膜异位症患者外周血、腹腔液中γδ＋T细胞细胞及NK细胞的表型与功能。结果 子宫内膜异位症（疾病组）患者外周血、腹腔液中CD56^ 细胞与正常对照组相比较无明显差异,而疾病组腹腔液中的γδ＋T细胞及NK细胞的功能低于外周血及正常对照组。疾病组的腹腔液对正常人外周血γδ＋T细胞及NK细胞的功能具有负调节作用。结论 子宫内膜异位症患者的γδ＋T细胞及NK细胞的功能低下,处于被抑制状态,提示患者的腹腔液中,可能在γδ＋T细胞细胞及NK细胞的功能抑制因子。     

MHC-I类分子在诱导异体肾癌特异性 CTL中的作用

目的探讨MHC-I类分子匹配的异体人肾癌细胞诱导肾癌细胞特异性CTL的作用。方法用经照射的HLA-I类分子匹配的异体人肾癌细胞作为刺激细胞,诱导外周血CTL,并分析其表型及杀伤效应。结果11例肾癌患者外周血淋巴细胞经HLA匹配的肾癌细胞刺激后,诱导的CTL细胞主要以TCRαβ＋、CD8＋为主,具有明显的杀伤效应。结论用MHC-I类分子匹配的异体肾癌细胞可诱导肿瘤特异性、并具有明显杀伤活性的的CTL。     

子宫内膜异位症患者NK细胞和γδT淋巴细胞分析

目的：探讨子宫内膜异位症患者外周血、腹腔液中NK细胞和γδT淋巴细胞的数量和杀伤功能。方法：取15例子宫内膜异位症患者的外周血和腹腔液,用荧光染色法、流式细胞术和酶标法等测定NK和γδT细胞的数量和杀伤功能。取10例非内异症者外周血和腹腔液作为对照。结果：1．与对照组相比,病例组外周血和腹腔液中的NK细胞数量无明显改变,γδT细胞数量在外周血中无明显差异,但在腹腔液中明显增加（P＜0．05）。病例组中外周血和腹腔液之间NK和γδT细胞数量均有差异,表现为腹腔液中两种细胞所占的百分比明显增高（P＜0．05）。2．病例组与对照组相比,除外周血的γδT细胞外,外周血的NK细胞及腹腔液的NK和γδT细胞的功能均明显下降（P＜0．05）。同一个体中,病例组腹腔液中的NK和γδT细胞的功能比外周血中的明显降低（P均＜0．05）。结论：内异症患者NK和γδT细胞杀伤功能的下降可导致机体清除异位子宫内膜细胞的功能下降,其改变可能在子宫内膜异位症发病过程中起一定的作用。     

MHCⅡ类抗原的诱导性表达和同种异体软骨细胞移植的免疫排斥

本研究将不同年龄香猪的软骨细胞和可注射性材料复合物Pluronic混合在一起,以50×106/ml浓度接种到版纳猪的腹部皮下,在第1、2、4周取材作组织学检查,并进行软骨细胞表面标志的分析和测定淋巴细胞软骨细胞混合反应(MLChR)的强度.结果显示猪的软骨细胞仅表达MHCI类分子,分别来自胎猪、幼猪和成年猪的软骨细胞刺激MLChR的能力无显著差别,均表现抗原性较弱.经IFN-γ诱导后,软骨细胞表达MHC Ⅱ类抗原,能明显地刺激淋巴细胞增殖.免疫病理学检测发现,在组织化的软骨中,第1周出现大量淋巴细胞浸润,第4周组织化软骨消失.上述结果提示,体内同种异体软骨细胞被迅速排异,可能与MHCⅡ类抗原诱导性表达有关.     

从卵巢癌cDNA文库中筛选新的肿瘤标志物

采用SEREX法筛选了自行构建的中国人卵巢癌cDNA表达文库 ,得到 2 7个阳性克隆 ,其中 3个为全长cDNA。序列分析和同源性比对结果表明所获得的 2 7个克隆分属于分化抗原、细胞结构蛋白及功能未知三类。选择其中一个全长cDNAMY OVA 13(该基因编码的蛋白是MAD2 ) ,利用基因工程方法克隆、表达和纯化得到目的蛋白 ,采用点杂交方法检测了MY OVA 13目的蛋白与正常人和肿瘤患者中的血清学反应。MY OVA 13抗体只在肿瘤组中检测到 (5 / 74 ) ,在正常组中均为阴性 ;间接ELISA测定结果显示 ,MY OVA 13抗体的水平在肿瘤组中均高于正常组 ,其中肝癌和前列腺癌组与正常组相比 ,在统计学上有显著差异 ,P值分别 <0 0 1和 <0 0 5。我们的初步结果表明MY OVA 13及其抗体具有一定的肿瘤特异性 ,有可能作为肿瘤诊断的标志物