新型纳米羟基磷灰石(n-HA)糊剂封闭根尖性能及其对病原菌抗菌活性的体外实验

目的：研究新型纳米羟基磷灰石根管充填糊剂（n-HA）、AH-Plus根管封闭剂的根尖封闭性能以及二者对感染根管优势菌牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,Pg）、具核梭杆菌（Fusobacteria nu-cleatum,Fn）、中间普氏菌（Prevotalla intermedius,Pi）生长的影响。方法：实验一34个离体单根管牙随机分为4组,用镍钛旋转器械Protaper预备根管,阳性对照（2个）、阴性对照（2个）、2个实验组（各15个）,分别用新型n-HA、AH-plus根充糊剂加牙胶尖以冷侧压法根充恰填,染料渗入法检查根尖微渗漏。实验二选用Pg、Fn、Pi作为实验菌株,常规打孔法测定新型纳米羟基磷灰石根管充填料、AH-Plus根管封闭剂的抑菌效果。结果：所有根充糊剂充填后根尖部位均有微渗漏,AH-plus组的微渗漏值低于n-HA组,2组结果间无统计学意义（P〉0.05）。n-HA与AH-Plus糊剂对Pg、Fn、Pi均有一定的抑菌作用,但n-HA的抑菌作用明显强于AH-Plus。结论：2种根充糊剂充填后都不能完全封闭根尖孔,AH-plus根充糊剂的根尖封闭性优于n-HA组。n-HA根充糊剂具有较理想的抑菌效果。     

口腔微生物组与疾病

人类微生物组计划I期已经结束,作为该项目子项目之一的口腔微生物组项目,已经获得了海量的测序数据。本文综述了口腔微生物组（包括细菌、真菌、病毒和古细菌）的组成及多样性;通过分析患有特定疾病如龋病、牙周病、伞身系统性疾病志愿者的VI腔微生物组成,解析口腔微生物群落结构变化与疾病之间的相互联系。     

shRNA慢病毒对人口腔鳞状细胞癌细胞端粒酶卡侯体蛋白1基因的沉默效应

目的：探讨shRNA慢病毒对人口腔鳞状细胞癌Cal27细胞系端粒酶新蛋白,即端粒酶卡侯体蛋白1（TCAB1）基因的沉默效应,以期探索肿瘤基因治疗的新途径。方法：根据TCAB1基因,构建慢病毒shTCAB1-A~D,测定病毒滴度;用重组慢病毒体外感染Cal27细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达推断感染效率;半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测TCAB1 mRNA水平;Western blot检测TCAB1蛋白质的表达水平;四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测细胞体外增殖能力;Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力改变。结果：经PCR与测序鉴定证实成功构建靶向TCAB1的慢病毒RNAi载体,病毒滴度为1.5×108~3×108 U·mL-1。荧光显微镜观察显示,绝大部分细胞表达绿色荧光。与空白细胞对照组相比,4种不同的shTCAB1-A~D慢病毒感染组TCAB1 mRNA表达下调48.7%~62.0%;蛋白抑制率达45.6%~77.5%,shTCAB1-C组最明显。shTCAB1-C慢病毒能明显抑制Cal27细胞增殖能力,也能降低其侵袭能力,穿过人工基底膜的平均细胞数明显低于空白对照组及非特异性对照组,侵袭抑制率高达67.5%（P〈0.05）。结论：成功构建并包装了端粒酶新蛋白TCAB1靶向的RNAi慢病毒,该病毒可高效感染人口腔鳞状细胞癌细胞,产生特异性的基因沉默效应。     

鼻咽癌组织中DNA损伤与EB病毒感染的相关性研究

目的分析鼻咽癌(NPC)组织磷酸化组蛋白H2AX(γ-H2AX)的表达水平和EB病毒(EBV)的感染情况,探寻二者的相关性。并用细胞实验进行验证,以阐明EBV诱导DNA损伤应答进而促进NPC发生发展的可能机制。方法选取NPC标本50例和鼻咽炎(NPI)20例,采用免疫组化法检测γ-H2AX及EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)的表达,对LMP1阴性标本采用原位杂交方法检测EB病毒编码的RNA(EBER);采用Western blot法检测EBV感染鼻咽癌细胞CNE1后γ-H2AX表达的变化。结果NPC组γ-H2AX的阳性率达94%,显著高于NPI组的40%;EBV阳性率为94%,显著高于NPI组的30%;97.9%EBV感染的NPC组织γ-H2AX阳性,二者表达有相关性(P0.05)。通过Western blot法检测进一步验证,EBV感染可使CNE1中γ-H2AX的表达量增高。结论γ-H2AX表达和EB病毒感染有密切关联性,EBV感染可能是通过诱导细胞DNA损伤,造成基因组不稳定从而促进NPC的发生发展。     

鼻咽癌中端粒酶TCAB1活性与EB病毒感染的关系

端粒酶的新蛋白组分-端粒酶卡侯体蛋白1（telomeraseCajalbodyproteinl,TCABl）是一个全新蛋白,在临床肿瘤样本的表达情况国内外尚未见报道,更没有病毒感染对TCAB1表达和转录调控的报道。因此本研究探讨鼻咽癌中TCAB1表达与EB病毒感染的关联性,为阐明EB病毒调控TCAB1表达和信号传导的分子机制奠定基础,以期为鼻咽癌寻找更理想的诊断和治疗指标。     

护理本科学生培养中存在的问题及改进方法探讨

分析目前我国护理本科专业学生培养过程中存在的问题,提出相应的改进方法,以提高我国护理本科学生的培养质量。     

LAK细胞提取液的抗肿瘤活性的研究

作者采用自制的LAK细胞冻融提取液作体内外抗肿瘤的实验研究.结果表明:每天每小鼠用LAK细胞冻融提取液0.2ml治疗,可使小鼠肝癌实体瘤H22抑瘤率达51%(腹腔注射)和65%(肿瘤局部注射).体外实验显示,LAK细胞冻融提取液对K562和Raji细胞均有较强的抗瘤作用,其杀瘤活性分别为68.5±0.85%和58.2±2.01%.     

抗麻风杆菌酚糖脂1末端三糖的单克隆抗体的制备

将麻风杆菌特异性抗原酚糖脂Ⅰ(phenolic glycolipid I,PGL-I)包被在明尼苏达沙门氏菌(Salmonella minisota)表面,制成免疫原、脾脏内免疫BALB/c鼠,取免疫鼠脾脏制成脾细胞悬液,与Sp2/0细胞按常法融合,选择性培养。凡有克隆生长的,对其上清,用人工合成、含PGL-I末端三糖的人工半合成抗原——NT-O-BSA作ELISA进行筛选。从中选择了一株对PGL-I末端三糖表位特异的单克隆抗体——E_(10)F_1进行了初步鉴定。E_(10)F_1的Ig亚类为IgG3,与大多数抗糖抗体的Ig亚类一致。经ELISA及斑点免疫吸附试验鉴定,E_(10)F_1仅与PGL-I包被的明尼苏达沙门氏菌出现阳性反应,不与明尼苏达沙门氏菌、BSA、BCG、耻垢分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌发生反应。证明单克隆抗体E_(10)F_1所识别的抗原表位为PGL-I分子末端三糖,也是麻风杆菌的特异性抗原表位。文中对制备抗糖的单克隆抗体的实验设计进行了讨论。     

一株抗HBV-P31肽段McAb的交叉反应

单克隆抗体技术已在生物学各种领域中得到广泛的应用。尽管一般认为McAb识别一种表位,具有很高的特异性,有时特异性也并不单一,仍可出现多特异性(multispecificity),如我们研制的HBV-P31 McAb中就表现有交叉反应性。