三阴性乳腺癌模型裸鼠血管正常化后对紫杉醇的反应

目的:通过观察人三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)模型裸鼠血管正常化后对紫杉醇的反应,探讨重组人内皮抑素与紫杉醇在血管正常化时间窗内联用是否优于紫杉醇单用并分析磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)在早期评估化疗的作用。方法:将人TNBC细胞株MDA-MB-231种植于36只BALB/c-nu雌性裸小鼠的右下腹部皮下,随机分成4组(模型组、重组人内皮抑素治疗组、紫杉醇治疗组及人内皮抑素联用紫杉醇治疗组),每组有7只完成实验。重组人内皮抑素于实验开始时给药,连续使用17 d,紫杉醇于实验第6天和第12天分别给药,所有用药均为腹腔注射,用量均为10 mg·kg~(-1)·d~(-1)。治疗前1 d及注射实验试剂后5、11、17 d进行MRI扫描,所有荷瘤鼠均在最后一次MRI扫描后颈椎脱位处死,切下瘤体,进行病理学及免疫组化检测,测定肿瘤微血管密度(microvessel density,MVD)及Ki67表达。结果:第17天,联用组移植瘤体积小于模型组及重组人内皮抑素治疗组(P0.05),但与紫杉醇治疗组比较无显著差异。第11天,紫杉醇治疗组的慢弥散系数大于模型组,联用组慢弥散系数大于重组人内皮抑素治疗组(P0.05)。解剖各组荷瘤鼠未见远处转移病灶。HE染色显示4组肿瘤外周均有明显坏死,且药物治疗组坏死程度均高于模型组。药物治疗组的MVD均小于模型组,且药物联用组均小于药物单用组(P0.05)。药物联用组Ki67表达较重组人内皮抑素组明显降低,但与紫杉醇治疗组相比无显著差异。结论:在血管正常化时间窗内,重组人内皮抑素联合紫杉醇化疗对TNBC移植瘤虽有明显的抑瘤作用,但疗效未优于紫杉醇;慢弥散系数可以早期预测治疗效果。     

miR-21通过下调PTEN增强人脑胶质瘤细胞对卡莫司汀耐药

目的:探讨微小RNA-21(miR-21)在增强人脑胶质瘤细胞对卡莫司汀(BCNU)耐药中的作用及其可能的作用机制。方法: 用jetPRIME将miR-21mimics及阴性对照序列转入人脑胶质瘤细胞SWOZ2,用实时荧光定量PCR法检测BCNU敏感株SWOZ2与BCNU耐药株SWOZ2-BCNU、SWOZ2-miR-21mimics细胞与对照组细胞中miR-21表达差异,用CCK-8检测这两对细胞对BCNU敏感度的差异,用Westernblotting检测这两对细胞中第10号染色体同源缺失性磷酸酶及张力蛋白(PTEN)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和P-糖蛋白(P-gp)表达的差异。结果:SWOZ2-BCNU细胞miR-21的表达水平明显高于SWOZ2细胞,转染组SWOZ2-miR-21mimics细胞中miR-21的表达量明显高于对照组;SWOZ2-BCNU细胞BCNU的半数抑制浓度(IC₅₀)明显高于SWOZ2细胞,转染组细胞BCNU的IC₅₀明显高于对照组;与SWOZ2细胞相比,SWOZ2-BCNU细胞中PTEN蛋白的表达明显降低,p-Akt和P-gp蛋白的表达都明显升高;转染后,与对照组相比,转染组细胞中PTEN蛋白的表达明显降低,而p-Akt和P-gp蛋白的表达皆明显升高。结论:miR-21可能通过下调PTEN蛋白表达,增强人脑胶质瘤细胞对BCNU耐药。     

胶质瘤细胞维甲酸代谢调控机制及其对细胞增殖的影响

目的: 探讨胶质瘤细胞中的维甲酸合成调控机制,以及维甲酸对人脑胶质瘤细胞SWO-Z2的增殖抑制作用及可能的机制。方法: 运用小分子RNA干扰Krüppel 样转录因子9(KLF9);Real-time PCR和Western blotting检测 KLF9 基因RNAi沉默效率。 KLF9 基因干扰后,运用Western blotting检测醛脱氢酶1家族成员A1(ALDH1A1)蛋白表达的变化。应用CCK-8法从3种类型维甲酸药物(13-顺维甲酸、9-顺维甲酸和全反式维甲酸分别简称13- cis RA、9- cis RA和ATRA)中筛选出对SWO-Z2细胞活性抑制作用最强的药物。Western blotting检测不同浓度ATRA作用SWO-Z2细胞后增殖相关蛋白cyclin D1、Bcl-2、cleaved PARP以及胶质瘤分化标记物GFAP的表达情况。Real-time PCR检测SWO-Z2细胞的维甲酸受体表达情况。结果: 小分子RNA干扰 KLF9 基因后, 成功下调KLF9表达,引起ALDH1A1 mRNA和蛋白表达都下降。3种类型维甲酸中ATRA对SWO-Z2细胞的增殖活性抑制作用最强。ATRA作用SWO-Z2细胞72 h后cleaved PARP蛋白激活,cyclin D1和Bcl-2表达水平下降,而GFAP表达没有改变。SWO-Z2细胞维甲酸受体(RARs)表达降低。结论: KLF9作为 ALDH1A1 基因的上游调控基因,通过正调控 ALDH1A1 基因的表达促进胶质瘤细胞中的维甲酸合成;ATRA处理SWO-Z2细胞后未能促进胶质瘤分化而是明显抑制肿瘤细胞增殖能力,可能是由于胶质瘤细胞内缺乏维甲酸受体所致。     

卵巢成熟囊性畸胎瘤伴基底细胞癌变1例并文献回顾

卵巢畸胎瘤伴基底细胞癌病变十分罕见。暨南大学附属第一医院曾收治1名因盆腹腔肿物就诊的年轻妇女。入院后于腹腔镜下行肿瘤剔除术。病理提示畸胎瘤伴基底细胞癌变。患者2年后顺利生产一活婴,至截稿时仍处于无病生存状态,预后良好。     

三阴性乳腺癌组织DJ-1和PTEN及AR表达与预后相关性分析

目的:探讨三阴性乳腺癌(TNBC)组织中帕金森相关蛋白(DJ-1)、第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)和雄激素受体(AR)的表达及其与临床病理因素和预后的关系。方法:免疫组织化学SP法检测DJ-1、PTEN和AR蛋白在68例TNBC组织和30例正常乳腺组织中的表达,并分析其与TNBC临床病理因素的关系,及其对预后的影响。结果:TNBC组织中DJ-1阳性表达率为70.6%(48/68),AR阳性表达率为36.8%(25/68)。正常乳腺组织中DJ-1阳性表达率为6.7%(2/30),无AR表达。TNBC组织中DJ-1、AR阳性表达率明显高于正常乳腺组织,χ2值分别为7.09和6.72,P值分别为0.002和0.005。TNBC组织中PTEN阳性表达率为27.9%(19/68),正常乳腺组织中为100.0%。TNBC组织中PTEN阳性表达率显著低于正常乳腺组织,χ2=5.94,P=0.008。DJ-1、PTEN和AR表达在TNBC组织中的表达与腋窝淋巴结转移、组织学分化和TNM分期密切相关,P<0.01。TNBC组织中DJ-1和AR的表达均与PTEN蛋白的表达呈负相关,r=-0.529,P=0.009;而两者之间呈正相关,r=0.496,P=0.011。在5年无瘤生存率和5年总生存率方面,DJ-1和AR表达阴性者明显高于阳性者,P<0.01;PTEN表达阳性者高于阴性者,P<0.01。Cox回归多因素分析结果表明,腋窝淋巴结转移、DJ-1、PTEN及AR表达是影响TNBC患者5年无瘤生存率的独立预后因素,P<0.05。结论:TNBC组织中DJ-1和AR过表达,而PTEN表达下调,三者均为TNBC患者预后的独立危险因素,参与调控TNBC的发生与预后。     

GLP-1通过下调ATGL表达参与3T3-L1脂肪细胞脂质代谢

目的探讨胰高血糖素样肽-1（GLP-1）对胰岛素抵抗模型3T3-L1 脂肪细胞的影响及其可能的机制。方法分别使用
GLP-1、胰岛素、胰岛素加GLP-1 干预胰岛素抵抗模型3T3-L1 脂肪细胞,Western blotting 检测脂肪组织甘油三酯水解酶
（ATGL）、葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）、Akt1、Akt2 及其磷酸化蛋白表达量;免疫荧光法检测GLP-1 干预后脂肪细胞的成脂情
况。结果胰岛素刺激下3T3-L1脂肪细胞Akt1、Akt2活化不明显。GLP-1刺激下3T3-L1脂肪细胞磷酸化Akt1、Akt2表达明显
增加,同时促进GLUT4向细胞膜上转移,并抑制ATGL蛋白的表达。在胰岛素的协同作用下这一现象更加明显。结论GLP-1
通过降低脂肪细胞ATGL蛋白表达参与脂质代谢,同时增强脂肪细胞GLUT4的膜转移,促进葡萄糖吸收,改善胰岛素抵抗。
     

沉默变异性浆细胞瘤异位１抑制鼻咽癌细胞增殖作用的机制研究

目的探讨变异性浆细胞瘤异位１（ｐｌａｓｍａｃｙｔｏ ｍａｖａｒｉａｎｔｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ１，ＰＶＴ１）抑制鼻咽癌细胞增殖的分子机制。方法构建特异性的shRNA PVT1慢病毒载体，包装慢病毒（LV/shRNA PVT1）并转导鼻咽癌C666 1细胞，检测Smad4的表达；LV/shRNA PVT1转导C666 1细胞24 h后转染Smad4 siRNA，通过细胞计数、四甲基偶氮唑蓝（MTT）法及流式细胞术分析沉默Smad4对LV/shRNA PVT1介导的鼻咽癌细胞生长及细胞周期的影响，并检测细胞周期相关调控因子的表达。结果下调PVT1后鼻咽癌细胞中Smad4的表达升高，而用siRNA沉默Smad4表达后，结果显示，抑制Smad4表达可阻断LV/shRNA PVT1介导的细胞生长抑制效应，同时细胞周期结果显示，与对照组相比，shRNA PVT1/Smad4 siRNA组细胞G1期比例降低，S期和G2期比例升高，并且CDK4、CDK6及c myc的mRNA水平升高。结论下调PVT1可抑制鼻咽癌细胞增殖，并升高Smad4的表达，沉默Smad4可阻断shRNA PVT1对鼻咽癌细胞增殖的抑制效应；提示Smad4可能是PVT1作用的一个下游靶基因，下调PVT1可能通过Smad4抑制鼻咽癌细胞增殖。     

4E-BP1在人脑胶质瘤细胞对卡氮芥获得性耐药中的作用

 目的： 探讨真核翻译起始因子4E结合蛋白1（4E-BP1）与人脑胶质瘤细胞耐药性的关系,为寻找克服胶质瘤获得性耐药的新靶点提供理论依据。方法：Western blotting 检测SWOZ2及其获得性耐药细胞株SWOZ2-BCNU中4E-BP1及其磷酸化蛋白（p-4E-BP1）的表达。小干扰RNA下调4E-BP1表达后,细胞计数试剂盒8检测SWOZ2细胞对卡氮芥（BCNU）的耐药性。免疫荧光法检测4E-BP1及p-4E-BP1(T70)蛋白在2株细胞中的表达位置。结果：SWOZ2-BCNU细胞中4E-BP1及其磷酸化蛋白表达较SWOZ2细胞明显下降。下调4E-BP1表达能明显增加敏感细胞对BCNU的耐药性。SWOZ2-BCNU细胞p-4E-BP1(T70)蛋白在获得性耐药过程中出现了核转位。结论：4E-BP1作为翻译调控关键蛋白,可能参与了人脑胶质瘤获得性耐药的发生机制。