Nestin在CDA-2诱导人胶质瘤细胞分化中的变化

目的： 研究nestin（巢蛋白）在人尿萃取物细胞分化剂CDA-2（又名尿多酸肽）诱导SWO-38人胶质瘤细胞分化中表达的变化及其意义。方法: 采用光镜观察和鉴定CDA-2对SWO-38细胞的分化作用;RT-PCR、细胞免疫荧光、Western blotting分析CDA-2诱导前后SWO-38细胞nestin表达的变化。 结果: 光镜观察发现经CDA-2诱导后SWO-38细胞胞体变大、核浆比减小、突起增多,表现出向成熟的星形细胞分化的现象;Nestin表达在细胞浆,呈丝状着色;Nestin在CDA-2诱导SWO-38细胞分化中表达下调。结论: Nestin在CDA-2诱导SWO-38细胞分化中表达下调,进一步验证nestin与细胞分化的关系,nestin有可能成为胶质瘤诱导分化治疗领域新的标志物。     

骨髓间充质样干细胞和骨髓单个核细胞影响博莱霉素诱导肺纤维化的比较*

背景：有报道指出,骨髓间充质样干细胞和骨髓单个核细胞在多种疾病中被证明有疗效,骨髓间充质样干细胞在肺纤维化模型中也有应用。 目的:比较骨髓间充质样干细胞和骨髓单个核细胞对博莱霉素A5所致大鼠肺泡炎和早期纤维化的治疗作用。 方法:收集Wistar雄性幼鼠的骨髓间充质样干细胞、骨髓单个核细胞并分别进行DAPI标记。21只Wistar雌性大鼠气管内注入博莱霉素A5制作肺损伤模型,随机均分为骨髓间充质样干细胞治疗组、骨髓单个核细胞治疗组和模型组。造模后第7天处死大鼠,取肺组织病理切片观察炎症和纤维化情况;荧光显微镜下检测DAPI标记细胞;ELISA法检测肺组织匀浆羟脯氨酸和肿瘤坏死因子的含量。 结果与结论:①在骨髓间充质样干细胞治疗组、骨髓单个核细胞治疗组肺组织冰冻切片中均见到DAPI标记的外源细胞。②模型组肺泡炎最严重,骨髓间充质样干细胞治疗组肺泡炎最轻,各组比较,差异有显著性意义(P < 0.05)。③模型组肺组织匀浆中羟脯氨酸和肿瘤坏死因子α含量最多,骨髓间充质样干细胞治疗最少,各组比较差异有显著性意义(P < 0.05)。提示骨髓间充质样干细胞和骨髓单个核细胞均可定植于损伤肺组织,并能有效阻止博莱霉素A5诱导的大鼠肺泡炎和早期纤维化,前者作用更为显著。     

IKKβ在炎症与肿瘤中的作用

1863年病理学鼻祖。RudolfVirchow在肿瘤组织中发现了白细胞,并称肿瘤来源于有慢性炎症的区域。随着对肿瘤微环境的不断认识,其中含有各种免疫细胞,能分泌促进炎症的细胞因子和趋化因子,如TNFα,IL-1,IL-6,IL-8,基质降解酶和氧自由基等,这些都是造成DNA损伤的因素。在如此     

携带HGF基因的重组腺病毒表达载体的构建

目的 构建携带肝细胞生长因子HGF的重组腺病毒表达载体。为研究HGF的功能、作用机制及临床应用奠定基础。方法 以pcDNA3.0-HGF为模板,经PCR扩增得到HGF基因,将其插入到带有绿色荧光蛋白基因的穿梭载体pAdTrack-CMV-GFP中,得到重组质粒pAdTrack-CMV-HGF-GFP。将线性化的pAdTrack-CMV-HGF-GFP与pAdEasy-1质粒共转化BJ5183感受态细胞,进行同源重组,得到重组腺病毒质粒,经PacI线性化后,转染AD293细胞。结果 得到重组腺病毒,转染重组腺病毒DNA的AD293细胞经荧光显微镜能观察到AD293细胞内有绿色荧光,且出现细胞病变反应（cytopathic effects,CPE),对传代的Ad-HGF进行PCR分析证实得到目的基因,感染CHL细胞,通过western blotting分析HGF蛋白表达量,从而证实重组腺病毒载体构建成功。结论 腺病毒制备简便,成本低,周期短,毒性小,产量高,感染率及蛋白表达率高,成功构建Ad-HGF为进一步研究HGF并最终使其在临床应用中更为方便提供实验基础。     

胶质瘤细胞维甲酸代谢调控机制及其对细胞增殖的影响

目的: 探讨胶质瘤细胞中的维甲酸合成调控机制,以及维甲酸对人脑胶质瘤细胞SWO-Z2的增殖抑制作用及可能的机制。方法: 运用小分子RNA干扰Krüppel 样转录因子9(KLF9);Real-time PCR和Western blotting检测 KLF9 基因RNAi沉默效率。 KLF9 基因干扰后,运用Western blotting检测醛脱氢酶1家族成员A1(ALDH1A1)蛋白表达的变化。应用CCK-8法从3种类型维甲酸药物(13-顺维甲酸、9-顺维甲酸和全反式维甲酸分别简称13- cis RA、9- cis RA和ATRA)中筛选出对SWO-Z2细胞活性抑制作用最强的药物。Western blotting检测不同浓度ATRA作用SWO-Z2细胞后增殖相关蛋白cyclin D1、Bcl-2、cleaved PARP以及胶质瘤分化标记物GFAP的表达情况。Real-time PCR检测SWO-Z2细胞的维甲酸受体表达情况。结果: 小分子RNA干扰 KLF9 基因后, 成功下调KLF9表达,引起ALDH1A1 mRNA和蛋白表达都下降。3种类型维甲酸中ATRA对SWO-Z2细胞的增殖活性抑制作用最强。ATRA作用SWO-Z2细胞72 h后cleaved PARP蛋白激活,cyclin D1和Bcl-2表达水平下降,而GFAP表达没有改变。SWO-Z2细胞维甲酸受体(RARs)表达降低。结论: KLF9作为 ALDH1A1 基因的上游调控基因,通过正调控 ALDH1A1 基因的表达促进胶质瘤细胞中的维甲酸合成;ATRA处理SWO-Z2细胞后未能促进胶质瘤分化而是明显抑制肿瘤细胞增殖能力,可能是由于胶质瘤细胞内缺乏维甲酸受体所致。     

Nestin差异表达对脑胶质瘤细胞迁移与侵袭的影响

目的： 探讨nestin差异表达对脑胶质瘤细胞迁移与侵袭能力的影响。方法: Transwell实验检测细胞的迁移与侵袭能力;细胞免疫荧光观察细胞nestin的表达;Western blotting对比分析细胞nestin和MMP-2的表达。结果: SWO-38细胞的迁移能力大大低于U251细胞,差异显著(P<0.05),而两者侵袭能力无明显差别。细胞免疫荧光结果显示,SWO-38细胞的nestin均匀分布在细胞浆,呈丝状着色;而U251细胞的nestin强表达于核周,并向胞浆放射状分布。Western blotting结果显示两株细胞nestin的分子量存在差异。而SWO-38细胞的MMP-2表达水平则高于U251细胞,显示SWO-38细胞有更强的酶解细胞外基质的能力。结论: 脑胶质瘤细胞的迁移能力与nestin的差异表达存在相关性,而侵袭能力与MMP-2相关。迁移能力与酶解细胞外基质能力的结合决定了肿瘤的侵袭能力。     

EGCG通过下调COX-2和MMP-2表达抑制人脑胶质瘤细胞的迁移和侵袭

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)下调COX-2及MMP-2的表达、抑制人脑胶质瘤细胞迁移及侵袭的作用机制。方法:MTT法检测EGCG处理24h后SWO-38细胞的活性,确定药物作用浓度;细胞侵袭与迁移实验检测EGCG处理24h后SWO-38细胞的迁移与侵袭能力;Western blotting对比分析EGCG处理24h后SWO-38细胞COX-2和MMP-2的表达。通过肿瘤坏死因子α(TNF-α)促进COX-2的表达,观察EGCG是否通过COX-2/MMP-2通路抑制肿瘤的迁移侵袭。结果:细胞侵袭与迁移实验发现,EGCG对SWO-38细胞的迁移和侵袭能力有抑制作用,与对照组SWO-38细胞相比较,有显著差异(P0.01)。Western blotting发现经过EGCG处理24h后,SWO-38细胞COX-2和MMP-2蛋白的表达水平降低,提示EGCG抑制SWO-38迁移的机制可能与该药物抑制COX-2的表达而降低SWO-38细胞酶解细胞外基质的能力相关。结论:EGCG抑制了人脑胶质瘤SWO-38细胞的迁移与侵袭,其机制与EGCG抑制COX-2表达后,调节了MMP-2诱导的酶解细胞外基质的能力相关。     

外源性hCG对子宫内膜癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的 观察外源性hCG对子宫内膜癌裸鼠移植瘤生长的影响,探讨hCG在子宫内膜癌治疗中的意义.方法 建立子宫内膜癌裸鼠移植瘤模型,用hCG对裸鼠进行皮下注射,计算成瘤率,称量瘤体质量;并对瘤组织进行HE染色,观察肿瘤瘤组织形态及测量坏死面积;Masson染色观察瘤组织纤维化;免疫组织化学染色观察瘤组织Ki-67表达.结果 两组裸鼠成瘤率均为100%(10/10);与对照组相比,hCG处理组裸鼠移植瘤瘤质量有增高趋势;HE染色可见hCG处理组子宫内膜癌细胞呈腺腔样排列,瘤组织内坏死面积较少而范围较小;Masson染色见hCG处理组胶原纤维粗大而致密,而NS组胶原纤维较纤细而稀疏;Ki-67在两组表达无明显差别.结论 外源性hCG在裸鼠体内实验可促进子宫内膜癌细胞的分化.     

IL-2协同IL-12诱导人单个核细胞及其体外抗瘤作用的研究

目的检测白细胞介素-2(IL-2)联合IL-12诱导人外周血单个核细胞(PBMC)体外抗肿瘤作用。方法分别应用MTT法和流式细胞仪法测定IL-2与IL-12协同诱导对体外培养的3种肿瘤细胞株的杀伤活性。结果IL-2与IL-12联合诱导的PBMC,对3株靶细胞的杀伤效应差异有显著性(P<0.05)。MTT法与流式细胞仪法两种方法检测的杀伤率有明显的相关性(r=0.997,P<0.05)。结论IL-2与IL-12协同对3种不同组织来源的实体瘤细胞株表现了较强的杀伤力,而杀伤率的差异与肿瘤细胞的不同免疫特征有关。     

巢蛋白和缺氧诱导因子-1α在人脑胶质瘤组织的表达及作用

目的 探讨巢蛋白(nestin)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在人脑胶质瘤组织中的表达及其在胶质瘤血管生成中所起的作用.方法 应用免疫组化两步法检测53例不同级别胶质瘤和5例正常胎脑组织中nestin和HIF-1α的表达.结果 nestin在低级别和高级别胶质瘤的平均光密度值(A)分别为0.246 3±0.060 2和0.643 8±0.090 1,差异有显著性(P<0.05);HIF-1α在低级别和高级别胶质瘤的平均光密度值(A)分别为0.133 4±0.029 8和0.274 6±0.090 4,差异有显著性(P<0.05).结论 胶质瘤中,nestin在新生微血管内皮细胞和HIF-1α在肿瘤细胞的表达与胶质瘤的病理分级有关,级别越高表达越强,而且两者呈正相关,提示可将nestin和HIF-1α作为一种判断胶质瘤新生血管增生、恶性程度的参考依据.