血根碱对大鼠气道平滑肌细胞生物力学特性的影响

本研究拟探究血根碱对大鼠气道平滑肌细胞(rASMCs)的刚度、牵张力、应力纤维分布等细胞生物力学特性的影响。体外培养的rASMCs经过血根碱溶液在不同浓度(0.005~5μmol/L)条件下分别处理12 h、24 h、36 h和48 h后,采用噻唑盐比色法、光学磁粒扭转细胞测量仪、傅里叶变换牵张力显微术、划痕实验和免疫荧光显微技术等检测其活性、刚度、牵张力、迁移速度和微丝骨架分布等细胞生物力学特性的变化。实验结果显示,在浓度低于0.5μmol/L时,血根碱对细胞活性没有明显影响,但对细胞生物力学特性呈现浓度和时间依赖性,具体表现为r AMSCs经0.05μmol/L和0.5μmol/L浓度的血根碱处理12 h和24 h后细胞刚度、细胞牵张力和细胞迁移速度均明显降低、细胞骨架应力纤维出现解聚。鉴于气道平滑肌细胞(ASMCs)生物力学特性在哮喘气道高反应性(AHR)中的关键作用,上述的实验结果提示,血根碱有可能通过改变气道平滑肌细胞生物力学特性而改善AHR,进而为开发基于血根碱的气道松弛剂等哮喘治疗药物奠定基础。     

倾慕

正~~     

三维回转培养动物细胞模拟失重生物效应研究进展

空间失重环境会影响生物体功能,表现出失重生物效应。在地面可以采用多种方式(探测火箭、回转器、磁悬浮)模拟失重环境或失重生物效应,探索失重效应的细胞分子机制。近年来研究动物细胞在三维回转条件下模拟失重生物效应及机制研究的论文逐年增加。本文对三维回转培养条件下模拟失重生物效应的原理进行了简单介绍,分析了三维回转模拟失重的结果 ,重点综述了三维回转培养条件下采用多种动物细胞模拟失重生物效应研究进展,并对有待解决的问题进行了展望。     

人骨肉瘤MG-63细胞自分泌可溶性纤连蛋白参与细胞形态维持

目的:探讨MG-63细胞自分泌可溶性纤连蛋白(FN)在细胞形态维持中的作用。方法:将培养24 h MG-63细胞随机分成对照组、更换新鲜培养基组(不含自分泌可溶性FN)、更换培养MG-63细胞24 h的条件培养基组(含自分泌可溶性FN)和更换添加FN的新鲜培养基组(添加FN),在0.5 h、1 h和2 h观察细胞形态;采用ELISA法检测新鲜和条件培养基中可溶性FN含量;采用免疫荧光方法观察细胞微丝骨架和不溶性FN的分布变化。结果:检测新鲜和条件培养基可溶性FN浓度结果表明,条件培养基中可溶性FN含量明显高于新鲜培养基(P0.01);与对照组相比,不含自分泌可溶性FN组细胞0.5 h时回缩明显,由梭形变成圆形,1 h时开始重新铺展,2 h时形态恢复明显;含自分泌可溶性FN组和添加FN组细胞形态没有明显变化;观察细胞微丝骨架和不溶性FN分布发现,与对照组相比,不含自分泌可溶性FN组细胞0.5 h时应力纤维解聚,细胞外纤丝状FN明显减少。结论:细胞自分泌可溶性FN可能通过参与调节不溶性FN和微丝骨架的重构,参与细胞形态调节。     

多壁碳纳米管抑制MC3T3-E1成骨细胞迁移的实验研究

目的探讨多壁碳纳米管(MWCNT)对MC3T3-E1成骨细胞迁移的影响。方法采用超声法分散MWCNT,经扫描电镜、投射电镜和动态光散射仪检测分散效果。采用MWCNT(100 g/mL)处理MC3T3-E1成骨细胞,原子力显微镜检测细胞表面形态,划痕实验检测细胞迁移情况,Gradientech Tracking软件分析细胞迁移特性。结果 MWCNT获得较好分散,细胞处理12 h后,MWCNT大量吸附于细胞表面。划痕实验显示对照组愈合率为80%,MWCNT处理组愈合率为45%(P<0.01),其迁移距离、直线距离和迁移速度均显著低于对照组。结论 MWCNT可大量吸附于成骨细胞表面并显著抑制MC3T3-E1成骨细胞迁移。     

龙胆苦苷等6种中草药提取物对SMMC-7721人肝癌细胞增殖的影响

目的　研究龙胆苦苷等 6种中药有效成分对 SMMC- 772 1人肝癌细胞增殖的影响。方法　 MTT法测定不同浓度的 SMMC- 772 1人肝癌细胞活力 ,观察药物对癌细胞增殖的影响。结果　 10 2 ,10 4和 10 6nmol.L-1的土贝母皂苷、10 4nmol.L-1和 10 2 nmol.L-1的龙胆苦苷、10 2 nmol.L-1的白屈菜红碱、 3个不同浓度的血根碱及 1g.L-1的败酱草提取物作用于细胞 4 8h后对细胞具有明显的杀伤效应 ;10 mg.L-1的败酱草提取物和 1g.L-1和 10 mg.L-1的威灵仙提取物对肝癌细胞具有促生长作用。结论　龙胆苦苷、土贝母皂苷、白屈菜红碱和血根碱能抑制 SMMC- 772 1人肝癌细胞增殖 ;败酱草提取物能促进肝癌细胞增殖 ;低浓度威灵仙提取物抑制、高浓度促进肝癌细胞增殖。     

^12C^6＋离子辐射对细胞存活增殖及模拟失重和辐射对家蚕卵发育的影响

目的:观察重离子辐射后人骨肉瘤细胞MG-63、人胚胎皮肤成纤维细胞ESF-1和人胚胎肝正常细胞HEL-1的生存和增殖情况,及重离子辐射和模拟失重环境处理后家蚕卵的孵化和发育情况,初步探讨重离子辐射对细胞及复合环境对家蚕卵的一些生物学效应.方法:利用超导磁体模拟失重环境,利用重离子加速器产生12C6 离子,用不同剂量辐射细胞和家蚕卵,检测在重离子辐射后细胞的存活和克隆形成能力及复合条件下家蚕卵的发育情况.结果:HEL-1细胞在0.1Gy时存活率已经开始降低,且随辐射剂量的增大这种影响也增加,到1.5 Gy时存活率降低50%.ESF-1细胞在1.5 Gy时存活率下降约20%,但辐射对骨肉瘤MG-63细胞的存活率影响不大.HEL-1和ESF-1细胞受到0.1 Gy的辐射后克隆形成能力就明显降低90.2%和79.1%,而MG-63细胞一直保持较高的克隆形成率,直到1.5 Gy时迅速降低75%.家蚕的出蚁率随辐射剂量的增大而降低,到30 Gy时出蚁率降到2.22%.当辐射剂量为0～10 Gy时,家蚕卵在两种不同重力条件下的孵化率没有明显差异.但当辐射剂量增加到15,20和30 Gy时,失重环境明显促进了家蚕卵的孵化.另外,失重环境下家蚕卵的孵化时间比正常条件下缩短约3 d左右.同时,高剂量的辐射处理会延迟家蚕幼虫的生长.结论:重离子辐射降低了细胞的存活和增殖能力,同时影响了家蚕从受精卵到幼虫的发育,降低了出蚁率.失重环境可以缩短家蚕卵的孵化时间.     

强磁重力环境对MG63成骨样细胞钙离子/钙调蛋白信号的影响

目的:研究强磁重力环境对MG63成骨样细胞钙离子浓度和钙离子下游信号分子表达的影响。方法:利用大梯度强磁场提供μg(12T),1g(16T)和2g(12T)三组不同强磁重力复合环境处理MG63成骨样细胞后,经Fluo-3/AM标记的细胞用激光共聚焦显微镜检测处理0.5 h对细胞胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响;用Western blot检测处理3 h对钙调蛋白(CaM)和肌球蛋白轻链激酶(MLCK)表达以及钙离子/钙调蛋白依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)活性的变化。结果:钙离子浓度检测结果表明,与对照组细胞(1 g,地磁)相比,1 g(16 T)组细胞Fluo-3荧光强度增加,结果显示强磁场导致[Ca2+]i增加;与2 g(12 T)组相比,μg(12 T)组细胞Fluo-3荧光强度下降,结果显示模拟失重导致[Ca2+]i降低,抑制钙离子信号。蛋白质表达的检测结果表明,与对照组相比,1 g组细胞CaM和MLCK表达以及CaMKⅡ活性没有明显变化;与2 g(12 T)组相比,μg(12 T)组细胞CaM表达以及CaMK活性下降,结果显示模拟失重抑制CaM/CaMKⅡ信号。结论:强磁场导致MG63成骨样细胞胞内游离钙离子浓度增加,模拟失重抑制成骨样细胞钙离子/钙调蛋白信号。     

彗星实验检测紫外线诱导的K562细胞DNA损伤

背景与目的研究紫外线(Ultraviolet,UV)诱导K562细胞DNA损伤情况,评价彗星实验改良方法及分析参数的可靠性。材料与方法采用0.3mW/cm2UV以用不同时间(3、5、10、40、60、120、180、240s)照射K562细胞,诱导细胞DNA损伤,用彗星实验检测,CASP软件分析。结果尾长、彗星长、尾矩、Olive尾矩4个参数与紫外线照射时间有良好的时间依赖关系。结论0.3mW/cm2的紫外线照射K562细胞3s即可造成细胞DNA损伤,CASP分析软件可以用于彗星检测分析,其中尾长、彗星长、尾矩、Olive尾矩可作为彗星实验的分析指标,所改良的彗星实验系统可靠性较强,且基本上解决了实验中常见的脱胶现象,采图更方便。     

传统单细胞凝胶电泳方法的改良

目的对传统的单细胞凝胶电泳方法进行改良，建立了一种更加简单、可靠、易操作的方法.方法对常规载玻片和磨砂载玻片进行了筛选，对传统的制胶方法进行了改良，在实验的流程中增加水洗和脱水操作。结果常规载玻片的背景荧光强度较低。。采用镀膜法制备底胶，灌胶法制备含细胞胶层可以很好地克服脱胶的现象。水洗和脱水步骤的加入增加了实验结果的可靠性。结论采用改良的实验方法节约了时间，且实验结果更加可靠。