小鼠骨髓基质成纤维细胞与成骨关系的实验研究

目的：研究骨髓基质成纤维细胞与成骨的关系。方法：Luria多器官培养器体外器官培养法，肾被膜下移植技术以及石蜡切片技术，结果：移植物在移植处形成软骨细胞团及骨基质，结论：骨髓基质成纤维细胞集落形成细胞（CFU－F）为基质多能干细胞，能增生分化为成骨所必需的基质细胞。     

提高bFGF基因表达水平的策略及其表达产物的纯化工艺

目的通过在同一个表达载体pLX1上调整SD序列和ATG之间距离,以提高bFGF目的蛋白表达量。方法以Klenow和MungBeanNuclease通过增加2个及减少2个碱基调整SD序列和ATG之间距离,SDS-PAGE和Westernblot检测目的蛋白表达量,以高压液相疏水层析、凝胶过滤及肝素亲和层析纯化目的蛋白、MTT法进行活性测定。结果获得了重组质粒pLX2,pLX3,诱导后与表达质粒pLX1（7.78%）相比,表达量分别为8.03%,9.9%,经纯化后获得的bFGF纯度达98%,ED50为2.29ng/ml。结论调整SD序列和ATG之间距离可以增加目的基因的剂量,从而提高了目的基因在大肠杆菌中的表达水平。     

HIV-1中国流行株gag与hIL-2在重组痘苗病毒中的共表达及其与核酸疫苗的实验免疫研究

目的：将HIV-1中国流行株B亚型gag基因、gag和hIL-2基因在天坛株痘苗病毒中进行共表达，以期获得重组痘苗病毒，观察细胞因子的佐剂作用，与核酸疫苗混合免疫，评价免疫效果，为新型艾滋病疫苗研制开发打下基础。方法：将HIV-1中国流行株 gag基因、gag和hIL-2基因片段插入到 pJ38载体启动子下游，经同源重组和血凝素阴性空斑筛选重组痘苗病毒，SDS-PAGE、Western blot检测目的蛋白。以重组病毒和核酸疫苗免疫Balb/c小鼠，进行淋巴细胞转化实验、CTL、CD4 、CD8 T细胞数目以及血清抗体的细胞免疫和体液免疫指标检测。结果：获得了重组痘苗病毒 vJ38gag和 vJ38gag-IL-2。与 vJ38-gag相比，vJ38gag-IL-2，具有更好的免疫原性，重组痘苗病毒免疫3次的效果好于重组病毒免疫2次，以2rVV-DNA混合免疫效果最好。结论：重组痘苗病毒vJ38gag和vJ38gag-IL-2能够表达外源蛋白并诱导机体产生细胞免疫和体液免疫。细胞因子IL-2发挥了免疫佐剂的作用。     

小鼠骨髓基质成纤维细胞与成骨关系的实验研究

目的 :研究骨髓基质成纤维细胞与成骨的关系。方法 :Luria多器官培养器体外器官培养法、肾被膜下移植技术以及石蜡切片技术。结果 :移植物在移植处形成软骨细胞团及骨基质。结论 :骨髓基质成纤维细胞集落形成细胞 ( CFU-F)为基质多能干细胞 ,能增生分化为成骨所必需的基质细胞     

人bFGF基因克隆表达及表达产物的纯化和生物学活性分析

目的：通过融合蛋白表达方式将编码人碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）ｃＤＮＡ在大肠杆菌ＤＨ５ａ中的表达,为ｂＦＧＦ进一步研究提供材料来源,方法：用多聚酶链反应（ＰＣＲ）及ＤＮＡ重组技术将ＰＣＲ产物克隆到ｐＧＥＭ－５Ｚ载体并测序,然后克隆到表达载体ｐＸＨ上。结果：转化重组质粒ｐＬＸ１的大肠杆菌经４２℃温控诱导４￣５ｈ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示融合蛋白的分子量约３５０００,薄层扫描分析表明该蛋白占菌体     

HIV-1中国流行株gag-hIL-2重组痘苗病毒与pIRES-gag-hIL-2核酸疫苗联合免疫的实验研究

目的　将HIV 1中国流行株B亚型gag和hIL 2基因在天坛株痘苗病毒中进行共表达 ,与核酸疫苗联合免疫 ,评价免疫效果 ,为新型艾滋病疫苗开发研制奠定基础。方法　将HIV 1中国流行株gag hIL 2基因片段插入到痘苗病毒载体pJ38启动子下游 ,经同源重组和血凝素阴性空斑筛选重组痘苗病毒 ,SDS PAGE、Westernblot检测目的蛋白。以重组病毒和核酸疫苗免疫BALB c小鼠 ,进行淋巴细胞转化实验及血清抗体的细胞免疫和体液免疫指标检测。结果　获得了重组痘苗病毒vJ38gag IL 2 ,具有更好的免疫原性 ,3rVV效果好于 2rVV ,以 2rVV DNA混合免疫效果最好。结论　重组痘苗病毒vJ38gag IL 2能够表达外源蛋白并诱导机体产生细胞免疫和体液免疫     

人bFGF基因克隆表达及表达产物的纯化和生物学活性分析

目的：通过融合蛋白表达方式将编码人碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）ｃＤＮＡ在大肠杆菌ＤＨ５α中的表达,为ｂＦＧＦ进一步研究提供材料来源。方法：用多聚酶链反应（ＰＣＲ）及ＤＮＡ重组技术将ＰＣＲ产物克隆到ｐＧＥＭ－５Ｚ载体并测序,然后克隆到表达载体ｐＸＨ上。结果：转化重组质粒ｐＬＸ１的大肠杆菌经４２℃温控诱导４５ｈ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示融合蛋白的分子量约３５０００,薄层扫描分析表明该蛋白占菌体总蛋白量的９９％。经ＦａｃｔｏｒＸａ酶切后得到分子量约为１７０００的ｂＦＧＦ,其生物学活性ＥＤ５０为２２９ｎｇ／ｍｌ。结论：经ＰＣＲ方法扩增的ｂＦＧＦ可在大肠杆菌中高效表达,为其进一步结构与功能研究打下基础     

红景天制剂对老年小鼠脾淋巴细胞化反应及脂质过氧化作用的影响

脂质过氧化是引起膜流动性降低、机体老化和疾病发生的重要原因之一 ,而机体本身存在抗氧化剂和抗氧化酶系等保护系统 ,用以防止或终止过氧化作用〔1〕。据报道红景天具有明显抗疲劳、抗缺氧、抗衰老的作用 ,可增强机体免疫力〔2〕。本实验通过饲喂老龄小鼠红景天制剂 ,测定心、肝组织中过氧化物含量及谷胱甘肽过氧化物酶的活性 ,了解红景天制剂对老年小鼠的抗氧化作用 ,并通过测定老龄小鼠脾细胞对刀豆蛋白(ＣｏｎＡ)和脂多糖 (ＬＰＳ)的反应性 ,探讨红景天制剂对老年小鼠脾细胞免疫功能的影响。材料与方法　 (1)材料 :将吉林省长白山高山…     

提高bFGF基因表达水平的策略及其表达产生的纯化工艺

目的：通过在同一个表达载体pLX1上调整SD序列和ATG之间距离,以提高bFGF目的蛋白表达量。方法：以Klenow和MungBean Nuclease通过增加2个及减少2个碱基调整SD序列和ATG之间距离,SDS－PAGE和Western blot检测目的蛋白表达量,以高压液相疏水层析、凝胶过滤及肝素亲和层析纯化目的蛋白、MTT法进行活性测定。结果：获得了重组质粒pLX2,pLX3,诱导后与表达质粒pLX1(7.78%)相比,表达量分别为8．03％,9．9％,经纯化后获得的bFGF纯度达98％,ED50为2．29ng/ml。结论：调整SD序列和ATG之间距离可以增加目的基因的剂量,从而提高了目的的基因在大肠杆菌中的表达水平。