中国人胚胎肝组织来源纤溶酶原kringle5基因的克隆与序列分析

目的：分离、克隆和测定中国人纤溶酶原Kringle5功能区基因，为进一步研究其功能奠定基础。方法：实验于2002—06／2003-05在广州医学院金域医学检验中心完成。①实验材料：国人胚肝组织取自广州医学院第一附属医院的流产胚胎（取得家属同意，并经广州医学院第一附属医院伦理委员会批准）。pET21a（＋）载体购自Novagen公司，大肠杆菌BL21（DE3）为医学检验中心保存。引物均由上海生工合成。②实验方法：从国人胚肝组织中提取mRNA，用反转录-聚合酶链反应方法将人纤溶酶原Kringle5的cDNA扩增出来，克隆到pET21a（＋）载体中测序。（D实验评估：采用紫外分光光度仪和琼脂糖凝胶电泳分析胚肝组织总RNA的抽提结果；经琼脂糖凝胶电泳鉴定Kringle5的反转录-聚合酶链反应扩增结果；pET-Kringle5重组质粒的酶切鉴定；序列测定。结果：①胚肝组织提取总RNA结果：提取的总RNA经紫外分光光度仪测得A260nm/A80nm〉1．8，A60nm，A270nm〉1.2，表明无蛋白残留；电泳结果显示提取的总RNA有明显的28S、18S两条带，说明RNA基本完整。②Kringle5的反转录-聚合酶链反应扩增结果：人Kringle5 cDNA片段长为240bp，加上引物设计的2个酶切位点，总长度为258bp，聚合酶链反应产物长度与该长度一致，符合预期结果。③）pET-Kringle5重组质粒的构建和酶切鉴定结果：用引物所带的限制性内切酶BamH Ⅰ、NdeⅠ双酶切，结果有250bp左右条带出现。④序列测定结果：证实国人纤溶酶原Kringle5功能区基因被成功克隆，序列分析证实为该基因，未发现有基因突变或多态性现象，但第153位核苷酸与文献比较存在碱基替代现象，其组成的密码子由于遗传的简并性，所编码的氨基酸相同，并未造成氨基酸组成的改变。结论：中国人纤溶酶原Kringle5功能区cDNA基因编码序列与国外文献报道的相应序列可能存在碱基替代现象。     

基底前脑神经元移植互海马后ChAT,NGFR和NOS的表达变化

为了比较基底前脑神经元移植至海马后胆碱乙酰转移酶，神经生长因子受体和一氧化氮合酶神经元的变化规律，选用雄性SD大鼠35只，在单侧穹隆海马伞损伤后一周，将胚胎基底前脑神经元植入损伤侧海马。在移植术后存活5d,7d,14d,30d,60d,90d,和180d共分为7个时间组灌注取材，进行ChAT和NGFR的免疫组织化学反应及NOS反应，观察其神经元的变化。结果证明，ChAT神经元在移植后30d方出现阳性反应；NGFR神经元在移植后7d可见淡染的胞体，随后逐渐增强；NOS神经元在移植后7d时呈明显的阳性反应，而且数量多，三种神经元直到180d时均尚呈阳性反应，提示移植物内NOS神经元出现早且数量多，NGFR神经元出现的也较早，ChAT神经元出现最晚。这三种物质在细胞内出现的时间和数量差异与它们在细胞内发挥的功能有关。     

周围神经Waller变性时的信息传递方式

为了检测 Waller变性时损伤部远侧段的溃变过程是同时发生还是自切断处逐渐向远侧离心式传递 ,本实验切断大鼠坐骨神经 ,将整个远侧段分为连续的 A、B、C三段 ,A段为最靠近切断处的部位。用 c-fos免疫组化方法和 EA50 组化方法 ,比较了三段之间的形态变化和阳性细胞数。结果显示 ,神经切断后 2 d,A、B、C三段间 c-fos阳性细胞数量有显著差异。至第 5天 ,这种差别消失 ,各段间阳性细胞数量表达无显著差异。实验结果说明 ,周围神经切断后 ,信息传递是由近至远地发生 ,也说明 Waller变性是由近至远地发生。至于神经切断后 ,引起 c-fos表达的机制还有待进一步研究     

胎鼠内侧膝状体植入成年大鼠听皮质区的形态学研究

将Ｅ１５－Ｅ１６天胎鼠的内侧膝状体原基植入到成年Ｗｉｓｔａｒ大鼠听皮质区脑腔内，于移植后６０天取材，Ｎｉｓｓｌ、Ｗｉｌ、Ｍａｒｓｌａｎｄ－Ｇｌｅｅｓ法制备光及透射电镜观察，光镜下移植植物神经元存且分化发育良好，有少数神经元未分化成熟。移植物的细胞构筑有一定的特征。电镜下移植物丰富的神经毡内有树突和轴突。可看到不对称型和对称型的突触，突触前膜内含有空心的圆形或椭圆形突触小泡及大颗粒小泡。结果显示移植     

使用瞳孔孔径动态变化测量分析装置定量检测正常人瞳孔对光反射

目的：定量观察正常人瞳孔对光反射。方法：以瞳孔孔径动态变化测量分析装置连续摄录并且分析127名正常人瞳孔直径，分析不同年龄的瞳孔对光反射的变化；结果：不同年龄组的瞳孔对光反射的瞳孔收缩速率和收缩时间不同，年龄越大，瞳孔收缩速率越慢。年龄越小，瞳孔收缩时问越短。结论：瞳孔孔径动态变化测量分析装置能较好地定量检测人瞳孔对光反射。     

载脂蛋白E基因多态性与阿尔茨默病的关系探讨

目的 :探讨阿尔茨默病 (AD)患者的载脂蛋白E(ApoE)基因的分布 ,分析它们的相互关系。方法 :利用聚合酶链式反应 -限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)技术对AD患者和相应健康对照的ApoE基因进行分型 ,从而进行AD与ApoE等位基因多态性的关联分析。结果 :AD病人ApoE等位基因ε4 占 2 0 .74% ,明显高于正常人对照组的 7.6 4% ,而ε3 则占 6 4.6 3% ,低于正常人对照组的 84.12 % ,均有极显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :ApoE等位基因中 ,ε4 可能为AD的易感因子 ,而ε3 则为保护因子。     

利培酮治疗首发精神分裂症患者血清同型半胱氨酸、脂蛋白a、甲状腺激素水平的研究

目的探讨利培酮对精神分裂症患者血清同型半胱氨酸、脂蛋白a、甲状腺激素水平影响。方法选择首发精神分裂症患者50例,服用利培酮治疗前及8周后分别抽血检测血清同型半胱氨酸、脂蛋白a、甲状腺激素水平。结果治疗前FT3（3．30±0．60）ng／L、T4（9．25±2．25）mg／L;治疗后FT3（3．10±0．60）ng／L、T4（8．54±1．71）mg／L,结果均降低,差异有统计学意义（P〈O．05）。FT4、T3、TSH、同型半胱氨酸、脂蛋白a治疗前后差异无统计学意义（P〉0．05）。结论长期服用抗精神分裂症药物患者需监测甲状腺激素水平。     

基底前脑NOS神经元移植至成年鼠海马内的发育

目的 研究基底胶脑ＮＯＳ神经元移植成年鼠海马内后,ＮＯＳ的发育变化规律,同时观察移植的与宿主海马间发生联系的情况。方法 将大鼠１４－１６ｄ胚胎的基底前脑移植到单侧穹隆海马伞切断的成的大鼠海马内,动物在移植后存活５,７,１４,３０,６０,９０,１５０和１８０ｄ分别取脑,经ＮＡＤＰＨ－ｄ法和尼氏染色观察。结果 在移植后第７ｄ时ＮＡＤＰＨ－ｄ阳性染色才出现在ＮＯＳ阳性神经元内,随着移植物成活时间的延长,     

基底前脑神经元移植后NOS神经元膨体的变化

目的 研究基底前脑神经元移植到海马后NOS阳性神经元膨体的变化,阐明脑组织移植后部分可塑性变化的规律.方法 雄性SD大鼠30只,每组6只动物在移植前一周行左侧穹窿-海马伞切断术.将胚胎14-16天基底前脑隔及斜角带区的细胞悬液移植入损伤倒海马,分别在移植后第7天、第14天、第30天和第60天取脑行NADPH-黄递酶组织化学染色.结果 移植后第7天NOS阳性神经元突起上有较多的神经膨体,其大小不等,间距不等.第14天和第30天这些膨体逐渐变得有大小和间距的规律性,60天时已无膨体.结论 一氧化氮合成酸在神经元移植后的纤维结构重塑方面发挥了一定的作用.