肤烫愈对深Ⅱ度烫伤大鼠创面愈合影响的研究

目的　研究肤烫愈对深 度烧伤创面的疗效及其毒副作用。方法　将 30只 Wistar大鼠制成2 0 %深 度烧伤模型后 ,实验组 (n=15 )外用肤烫愈 ,对照组 (n=15 )使用艾利克 ,观察创面愈合情况及其毒副作用。结果　实验组创面愈合时间为 2 3.0 7± 1.83天 ,对照组为 2 5 .40± 1.80天 ,两组有高度显著性差异 (P <0 .0 0 5 )。实验组创面愈合率高于对照组 (P<0 .0 5 ) ,实验组表皮细胞生长因子 (EGF)的表达呈黄色 ,较对照组着色深 ,平均阳性细胞百分率为 37.98%,而对照组为 30 .2 7%,其实验组表达强于对照组 ,具有高度显著性差异 (P<0 .0 0 5 )。成纤维细胞生长因子 (b FGF)表达呈棕黄色 ,较对照组着色深 ,平均阳性细胞百分率为 6 3.5 0 %,而对照组为 5 3.95 %,实验组的表达明显强于对照组 (P<0 .0 0 5 ) ;两组大鼠用药期间肝肾功正常 ,无显著性差异 (P>0 .0 5 )。结论　肤烫愈可促进深 度烧伤创面愈合 ,无明显肝肾毒性。     

碱性成纤维细胞生长因子与卵巢癌的关系

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子 (basic fibroblast growth factor,b FGF)对卵巢癌细胞增殖、浸润和肿瘤血管生成的影响 ,及 b FGF单克隆抗体 (b FGF monoclonal antibody,b FGF- MAb)的治疗作用。　方法　将人卵巢癌细胞株 SKOV3接种于 2 4孔板 ,加入不同浓度的 b FGF,每日行结晶紫染色后测定光密度 (D4 90 )值 ,绘制细胞生长曲线 ;将 SKOV3细胞团接种于铺设有细胞外基质凝胶的 4孔板 ,每日测定癌细胞在凝胶中的浸润距离 ;建立 SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤模型 ,每周两次分别将 b FGF、b FGF-MAb和生理盐水注射于移植瘤周围 ,8周后测量肿瘤体积 ;对移植瘤组织切片行 因子的免疫组化染色、测定肿瘤内微血管密度 (microvessel density,MVD)。　结果　 b FGF能促进 SKOV3细胞增殖并呈浓度依赖 ,实验第 5天 ,5 ng/ml、10 ng/ml组细胞 D4 90 值是对照组的 1.0 9倍和 1.2 1倍 ;b FGF能促进 SKOV3细胞浸润并呈浓度依赖 (P<0 .0 5 ) ,第 7天 ,5 ng/ml、10 ng/ml组细胞浸润距离分别是对照组的 1.5 3倍和2 .4 5倍 ;b FGF组移植瘤体积和 MVD分别是对照组的 1.80倍和 1.4 6倍 (P<0 .0 5 ) ,b FGF- MAb组移植瘤体积和 MVD分别是对照组的 6 3.7%和 6 2 .8% (P<0 .0 5 )。　结论　b FGF能明显促进卵巢癌细胞的增殖、     

亲水性接枝纳米炭的制备及其淋巴靶向特性的研究

目的制备亲水性纳米炭并研究其淋巴靶向性。方法浓硝酸氧化修饰纳米炭表面,100℃反应100 h,所得纳米炭能够在水中直接分散成混悬液,表明纳米炭经过修饰后成为亲水性接枝纳米炭。使用红外光谱、碱量滴定法和元素分析对纳米炭进行分析,并通过小鼠皮下注射实验研究其淋巴示踪性。结果硝酸氧化在纳米炭表面引入了大量含氧官能团,特别是羧基,其含量从2.1 mmo.lg-1增加到15.4 mmo.lg-1;使用激光粒度仪测定亲水纳米炭混悬液的平均粒径为71 nm,室温下放置考察6个月后,平均粒径无变化;用这种亲水性接枝纳米炭制备的混悬液能在4 m in内有效地对小鼠淋巴结进行染色,具有淋巴示踪特性。结论亲水性接枝纳米炭混悬液具有良好的悬浮稳定性,淋巴示踪效果好且染色迅速,可望成为新一代的淋巴靶向示踪剂。     

抗人核内不均一核糖核蛋白A2/B1抗体可变区基因克隆、串联和表达

目的克隆抗人核内不均一核糖核蛋白A2/B1(heterogeneousnuclearribonucleoproteinA2/B1,HnRNPA2/B1)单克隆抗体的重链可变区(variableregionofheavychain,VH)和轻链可变区(variableregionoflightchain,VL)基因,构建抗HnRNPA2/B1单链抗体(singlechainFv,ScFv)基因,并在大肠杆菌表达。方法采用斑点ELISA、Western印迹和免疫组化检测抗HnRNPA2/B1单克隆抗体3E8的特异性,并通过逆转录-聚合酶链反应、重叠延伸PCR来克隆、串联VH和VL基因,构建抗HnRNPA2/B1ScFv基因pET28(a )表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳、竞争抑制ELISA检测表达产物。结果3E8抗体能特异性地与HnRNPA2/B1合成肽以及3株人肺癌细胞内HnRNPA2/B1结合;克隆的VH基因为345bp,VL基因为309bp,符合小鼠抗体可变区特性;抗HnRNPA2/B1ScFv蛋白以包涵体形式表达,分子量约28000,并具有与抗原结合活性。结论成功构建了抗HnRNPA2/B1ScFv基因克隆,并在大肠杆菌中获得了功能性表达,为阐明HnRNPA2/B1与肺癌相关性奠定了实验基础。     

C-末端缺陷JAK3逆转录病毒载体的构建及在真核细胞中的表达

目的　以逆转录病毒 PL XSN为载体 ,构建重组逆转录病毒 C-末端缺陷的 JAK3[c- term defi-cient JAK3,JAK3(ΔC) ]载体 PL JAK3(Δ C) ,以 BAL B/ c3T3为靶细胞 ,转染 JAK3(ΔC) c DNA,检测 JAK3(Δ C)蛋白在真核细胞中的表达情况。为利用 JAK3(ΔC)对白血病进行基因治疗的实验研究打基础。方法　用限制性内切酶法从质粒 Pc DNA3- JAK3(Δ C)中分离目的基因片段 ,连接到逆转录病毒载体 PL XSN多克隆位点上构建重组逆转录病毒载体 PL JAK3(Δ C) ,通过转化感受态细菌扩增并检测 DNA序列及限制性内切酶酶切鉴定 ;用脂质体L IPOFECTAMINE介导法将 PL JAK3(Δ C)转染包装细胞 PA317细胞 ,并用 G4 18筛选抗性细胞克隆 ,收集病毒 ;用该病毒感染靶细胞 BAL B/ c3T3,G4 18筛选抗性克隆并测定病毒滴度 ;抗性细胞扩增培养 ,细胞溶解后经免疫沉淀 (IP)、Western blotting检测 BAL B/ c3T3细胞中 JAK3(Δ C)的表达情况。结果　 1重组逆转录病毒载体 PL -JAK3(Δ C)酶切和 DNA测序均表明含有 2 796 bp的 JAK3(ΔC)基因 ;2病毒滴度为 1.2× 10 4 CFU/ ml;3PL JAK3(Δ C)转染 BAL B/ C3T3细胞中表达出了 JAK3(Δ C)蛋白 ,其相对分子质量为 10 7× 10 3。结论　该研究构建的 C-末端缺陷 JAK3重组逆转录病毒载体 PL JAK3(     

人AFP全长基因编码序列的克隆及表达

目的 构建人AFP全长基因编码序列的真核表达质粒，并在CHO及小鼠肌肉组织中表达。方法 从人胎肝组织中提取AFP基因，以全长基因序列为目的基因片段，真核表达质粒pcDNA3．1( )为载体，构建AFP重组质粒phAFP，经酶切分析和DNA测序对phAFP进行鉴定。重组质粒phAFP经脂质体转染真核细胞CHO以及直接注射小鼠胫前肌，并采用免疫荧光染色及免疫组化对其表达产物进行检测。结果 获取的AFP基因片段与GenBank报道的序列一致，确认为人AFP基因的全长编码序列，构建的重组质粒phAFP能在体外真核细胞CHO、体内肌细胞中有效表达。结论 成功构建了能在真核细胞中表达的重组质粒phAFP，为AFP DNA疫苗治疗肝癌的研究打下基础。     

抗人AFP单链抗体基因的构建和在大肠杆菌中的表达

目的　构建抗人 AFP单链抗体 (Sc Fv)的基因并转入大肠杆菌 BL - 2 1(DE3)中诱导表达。分离纯化Sc Fv并鉴定其生物活性。方法　用 RT- PCR方法从能分泌特异性抗人 AFP单克隆抗体的杂交瘤细胞中分离纯化抗体 VH和 VL基因。用重叠延伸 PCR方法将 VH和 VL拼接在一起 ,构建抗人 AFP单链抗体的基因。将 Sc Fv基因克隆至 p GEM- T载体构建 ,用限制性内切酶切以及测序鉴定。将 Sc Fv基因连接到 p ET32 (a )质粒 ,转化 BL - 2 1(DE3)细菌。抗性生长的克隆用异丙基硫代 -β- D-半乳糖苷 (IPTG)诱导 4 h。溶解细菌并纯化 Sc Fv,通过 SDS-PAGE电泳及竞争抑制 EL ISA实验检测其活性。结果　获得的 VH含 339bp,来自小鼠 Ig Gγ链 ,VL含 312 bp,来自小鼠κ链。 VH和 VL通过编码 (G4 S) 3连接肽的 4 5 bp序列连接在一起构成含 6 96 bp的 Sc Fv基因。 BL - 2 1(DE3)中表达的 Sc Fv抗体与融合蛋白 (Trx A)融合在一起并以包涵体的形式存在。 Trx A- Sc Fv相对分子质量约 4 0× 10 3,Sc Fv相对分子质量约 2 4× 10 3。竞争 EL ISA实验显示 :Trx A - Sc Fv可抑制 4 1%的 Mc Ab与抗原结合 ,而Sc Fv抗体则可抑制 5 3%的 Mc Ab与抗原结合。结论　我们成功构建了由 6 96个碱基组成的抗人 AFP单链抗体的基因 ,并在大肠杆菌获得了     

阿莫西林对芍药苷治疗痛经模型小鼠疗效的影响研究

目的:研究阿莫西林对芍药苷治疗痛经模型小鼠疗效的影响。方法:小鼠随机分组,所有组连续12d灌胃给予己烯雌酚造模,第5天时模型对照组、阳性对照组、芍药苷不同剂量+阿莫西林(PA)3组灌胃给予阿莫西林7d,于第12天对芍药苷(P)3组和PA3组分别给予芍药苷不同剂量。给药后1h,所有组腹腔注射缩宫素,记录首次发生扭体的潜伏期和15min内小鼠扭体次数。结果:与阴性对照和模型对照组比较,P3组扭体潜伏期明显延长,15min内扭体次数明显减少(P<0.01~0.05),PA3组中除大剂量组具有延长扭体潜伏期和减少扭体次数作用外(P<0.01~0.05),其余2组作用不明显(P>0.05)。结论:阿莫西林可降低芍药苷治疗痛经模型小鼠的疗效,提示这2种药物不宜同时使用。     

抗人Atg5单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗人Atg5单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定。方法以人Atg5重组蛋白作为免疫原免疫Balb／c小鼠,取其脾细胞与SP2／O细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗人Atg5单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用ELISA、westernB10t、免疫组化鉴定单克隆抗体的特性,并测定其效价、亚型及亲和力常数。结果成功筛选到一株能稳定分泌抗人Atg5单抗的细胞株1E783H9,亚型鉴定重链为IgG2b,轻链为kappa链。ELISA法测定腹水抗体效价为1：4．096×lO。,抗体亲和力常数为7．309×10^8mol／L;westernblot显示此单抗能特异性识别人子宫颈癌Hela细胞系中的天然人Atg5蛋白;细胞免疫组化进一步显示Atg5表达在细胞质中。结论成功制备了抗人Atg5单克隆抗体,为进一步研究其与宫颈癌关系及在临床上的应用奠定了基础。