细胞亲环素A对单核来源泡沫细胞功能的影响

目的:研究细胞亲环素A对单核来源泡沫细胞功能的影响,探讨细胞亲环素A(CypA)在动脉粥样硬化发病过程中的作用。方法:以氧化型低密度脂蛋白诱导,建立人单核细胞系(THP-1细胞)分化的泡沫细胞模型,采用油红O染色进行形态学鉴定。以不同浓度的重组人CyPA(50、100、200μg/L)刺激人单核来源的泡沫细胞,通过细胞黏附实验、基质侵袭实验和明胶酶谱实验检测在分化的过程中CypA作用前后,MMP的表达,细胞黏附和侵袭力的变化。进而用环孢素A(CsA)、HAb18 mAb、c7b8 f10以及HAb18 mAb联合c7b8 f10分别进行阻断实验,观察对泡沫细胞功能的抑制作用。结果:在单核向泡沫细胞分化的各阶段中,泡沫细胞MMP-2、9的表达,黏附基质和侵袭能力均较THP-1单核株和巨噬细胞显著增强(P<0.05);CyPA对泡沫细胞上述功能有促进作用,浓度100~200μg/L的作用效果最明显(P<0.05);以上拮抗剂均可不同程度阻断CypA作用于泡沫细胞前后的上调作用,其中以HAb18 mAb联合c7b8 f10的抑制作用最明显(P<0.05)。结论:CypA上调了动脉粥样硬化泡沫细胞MMP-2、9的表达及其活性,增强了泡沫细胞黏附、侵袭能力,其促进作用可被CypA和CD147的拮抗剂所抑制。这一作用机制可能与动脉粥样硬化斑块不稳定性的发病机制相关联,并为其治疗提供了新的理论基础。     

CD147分子和基质金属蛋白酶在类风湿关节炎滑膜中的表达

目的 探讨类风湿关节炎(RA)滑膜组织CD147的表达及其与基质金属蛋白酶(MMP)-01和MMP-2表达的相关性。方法 采用免疫组织化学SP(streptavidin／peroxidase)染色方法检测11例RA患者受损关节软骨-血管翳接合部（CPJ)滑膜组织中CD147和MMP-1及MMP-2的表达，并与3例骨关节炎（OA)患者滑膜组织CD147和MMP-1及MMP-2的检测相对照。结果 3例OA滑膜组织CD147和MMP-1及MMP-2的表达均为阴性，而11例RA滑膜组织中均有CD147和MMP-1及MMP-2的表达。其中，表达CD147的细胞为单核-巨噬细胞、淋巴细胞和滑膜成纤维样细胞，表达MMP-1及MMP-2的细胞为滑膜成纤维样细胞。统计学分析表明RA滑膜细胞CD147的表达和MMP-1及MMP-2的表达间存在显著相关性。结论 CD147在RA滑膜组织中表达增高，可能是导敏RA受损关节软骨、骨基质降解的重要因素之一。     

多普勒超声定量血流量准确性的实验研究

目的：本文探讨几种常用多普勒血流参数定量血流量的准确性。方法：在离体模型上准确模拟出不同的血流量，用频谱多普勒测量几种血流数（TAmean、TApeak和VTI），分别计算每分血流量Q，并与实际血流量进行比较。结果：Q(TAmean）与实际血流量接近，测量比较准确（回收率RR＝98．0％），其次是Q（TApeak)（RR＝91．6％），而Q(VTI)准确性较差（RR＝159．9％），高估实际血流量约60％；而各方法的变异系数无明显差别。结论：应用TAmean计算每分血流量较其它血流参数相对比较准确。     

CyPA对类风湿关节炎中性粒细胞的趋化和产生IL-8的作用及其意义

目的:观察细胞环亲素A(CyPA)对人中性粒细胞HL-60株和类风湿关节炎(RA)患者外周血中性粒细胞的趋化和产生IL-8的作用.方法:选择12例RA患者,分离外周血中性粒细胞,采用Boyden小室趋化实验比较CyPA和/或IL-8对HL-60和RA患者粒细胞的趋化作用,采用ELISA检测CyPA促进培养的粒细胞产生IL-8作用,并与健康人比较.结果:CyPA组、 IL-8组及CyPA+IL-8组较阴性对照组趋化性显著增强( P <0.05);与IL-8组相比,CyPA抗体+IL-8组趋化指数降低( P <0.05);与CyPA组或IL-8组相比,CyPA+IL-8组趋化指数有所增加.RA患者中性粒细胞培养上清中IL-8水平较健康人显著增加( P <0.05);经CyPA刺激后,RA患者中性粒细胞培养上清中IL-8水平较CyPA刺激前增加,差异有统计学意义( P <0.05);阻断CyPA后,RA患者中性粒细胞培养上清中IL-8水平较CyPA刺激前无明显差异.结论:CyPA影响IL-8对中性粒细胞的趋化作用并对其分泌有影响.     

类风湿关节炎患者Th17和CD161+Th17细胞水平的变化

目的 观察类风湿关节炎(RA)患者和健康对照组外周血中CD4+ IL-17+T细胞(Th17)和CD4+ CD161+ IL-17+T细胞(CD161+Th17)的水平,探讨其在RA发病过程中的意义.方法 采用流式细胞术测定36例RA患者和11例健康对照组外周血中Th17细胞及CD161+ Th17的细胞百分率.结果 RA患者外周血Th17及CD161+ Th17细胞水平明显高于健康对照组(P＜0.01)且与疾病活动指数(DAS28)、血沉和C-反应蛋白水平呈显著正相关(P ＜0.05);RA患者和健康对照组外周血中CD161+ Th17细胞百分率明显高于Th17细胞百分率(P＜0.01);Th17细胞百分率与CD161+ Th17细胞百分率显著正相关(P＜0.01).结论 Th17及CD161+ Th17细胞在RA患者外周血中均增高且与疾病活动度正相关.     

类风湿关节炎外周血与滑液细胞CD147分子表达的研究

目的　为了探讨关节内CD14 7表达细胞的来源与类风湿关节炎 (RA)的关系 ,研究CD14 7分子在RA患者及正常健康人外周血与滑液细胞中的表达水平。方法　取 10例活动期RA患者用药治疗前后外周血、治疗前滑液及 10名正常健康对照外周血 ,外周血和滑液分离后细胞悬液采用双色免疫荧光标记 ,流式细胞术测量淋巴细胞 (CD3+ T)、CD14 + 单核细胞和中性粒细胞表达CD14 7阳性率及表达荧光强度水平。结果　①与正常对照相比 ,RA患者外周血CD3+ T淋巴细胞与CD14 + 单核细胞的表面CD14 7表达强度较高 (P <0 0 1) ,而其表达率比较差异无显著性。中性粒细胞表面CD14 7的表达率与表达强度与正常人相比差异均无显著性 ;②正常对照外周血细胞膜表面CD14 7的分子的表达在IFN γ刺激后有显著增多 ,而RA患者在刺激前后差异无显著性 ;③关节滑液中淋巴细胞、单核细胞与中性粒细胞上的CD14 7表达强度均比外周血细胞表达高 ,且淋巴细胞的表达率较高。结论　CD14 7在RA中各种炎细胞上均有较高表达 ,提示其在RA的病理损伤中起到重要作用。     

类风湿关节炎滑膜侵蚀软骨SCID鼠模型的建立及初步实验研究

目的建立类风湿关节炎(RA)-SCID小鼠模型,观察滑膜对软骨的侵蚀情况,为探讨RA滑膜侵蚀软骨机制及治疗奠定基础。方法70只SCID小鼠,3～6周龄。无菌获得12例非关节炎患者正常关节软骨,修剪成约2 mm×2 mm×1 mm后备用。同时取10例RA患者(膝关节或髋关节)滑膜组织修剪成约3 mm×6 mm的小块(片),这些小块包裹软骨后共植入SCID鼠肾包囊处,4例骨关节炎(OA)患者滑膜及2例正常滑膜同样处理作对照。术后观察小鼠和移植物的一般情况,从第4周开始分批处死SCID小鼠并切除移植物,进行苏木素-伊红(HE)染色病理分析。结果大部分滑膜及软骨在SCID小鼠体内存活,4周开始滑膜黏附并侵蚀软骨,12周后RA滑膜明显破坏软骨,移植物细胞浸润、软骨破坏与RA病理类似,OA滑膜轻微破坏软骨,而正常滑膜几乎不破坏软骨。结论RA滑膜植入SCID可成活并能侵蚀软骨,RA-SCID小鼠可作为人源化滑膜侵蚀软骨模型,在探讨机制特别是软骨破坏及治疗方面可能有明显优势。     

基质金属蛋白酶2,9与类风湿性关节炎病情活动及关节破坏相关

目的:观察类风湿性关节炎(RA)患者血清基质金属蛋白酶MMP - 2 ,MMP - 9与病情活动及早期关节破坏的关系。方法:用双抗体夹心ELISA法测定98例病史少于12个月未经治疗的早期RA患者及2 0例健康人血清中MMP - 2、MMP - 9,并分析其与RA患者X线表现积分(△Larsen)及健康评分(△HAQ)、CRP的关系。结果:血清MMP - 2、MMP - 9水平与C反应蛋白(CRP)、△Larsen、△HAQ显著相关,相关系数及P值分别为r=0 .4 2 ,0 .4 9,P <0 .0 1;r=0 .2 3,0 .32 ,P <0 .0 5 ;r =0 .32 ,0 .30 ,P<0 .0 1。MMP - 2、MMP - 9与关节侵蚀改变的出现相关(r=0 .6 5和0 .5 2 ,P <0 .0 5 )。Larsen积分显示骨侵蚀进展与MMP - 2水平关系更密切(r=0 .30 ,P <0 .0 1)。结论:血清MMP - 2、MMP - 9水平与RA患者病情活动及早期关节骨侵蚀显著相关,可以作为早期患者出现骨侵蚀的有益预测指标。     

体外诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞的定向分化及其鉴定

目的: 体外诱导骨髓间充质干细胞(MSC)向软骨细胞定向分化, 并对分化后的细胞进行鉴定。方法: 由健康成人骨髓中分离出MSC, 取第 3代细胞进行实验。鉴定后, 将微小细胞团在TGF -β1、地塞米松(Dex)及维生素C(VitC)等诱导下分化。14d后, 细胞团经石蜡包埋、切片及HE染色后, 进行甲苯胺蓝染色及II型胶原(ColII)的免疫组化染色。采用Westernblot和RT- PCR, 分别检测诱导前后MSC中ColII及前ColIImRNA的表达。结果: HE染色显示, 诱导后细胞呈软骨细胞样形态; 甲苯胺蓝及ColII染色的细胞外基质呈阳性。Westernblot和RT PCR的结果显示, 诱导分化后的MSC可表达ColII和前ColII的mRNA。结论: MSC在TGF- β1、Dex及VitC等诱导后, 可分化为软骨细胞。