胰腺癌中OPG表达及与预后的相关性

目的探讨胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma, PDAC)中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)的表达与临床病理学特征、KRAS基因突变及预后的相关性。方法收集2008～2012年南京医科大学第一附属医院PDAC标本102例,制作组织芯片,采用免疫组化法检测OPG在PDAC中的表达。采用荧光定量PCR法检测其中46例肿瘤组织KRAS基因第12、13号外显子突变情况。结果肿瘤组织中OPG与癌旁组织相比,其表达更高。46例KRAS基因突变检测中有24例野生型(52.2%),22例突变型(47.8%)。相关性分析显示KRAS基因突变与糖尿病有关(P=0.025),与OPG表达及其他临床病理特征无相关性(P0.05)。Cox单因素生存分析显示组织大小(P=0.008)、分化程度(P0.001)、肠系膜上动脉受侵犯(P=0.043)、肠系膜上静脉受侵犯(P=0.004)、门静脉受侵犯(P=0.033)、术后化疗(P=0.023)、OPG表达(P0.001)与PDAC预后显著相关。Cox多因素生存分析显示OPG高表达(P0.001)是PDAC患者总生存期的独立预后因素。结论 OPG高表达提示PDAC患者预后差,其可以作为PDAC预后的生物学标志物。     

高碘酸作为氧化剂在六胺银染色中的应用

真菌感染是临床上较常见的感染性疾病,近年来,随着抗生素、免疫抑制剂和激素等的广泛应用,真菌感染有不断上升的趋势,因而快速准确检出真菌对明确诊断、指导临床用药治疗及改善预后有着重要意义。对于石蜡组织切片内的真菌,常规苏木精-伊红(HE)染色着色较浅或者不着色,因此观察真菌比较困难,特别是真菌数量较少、菌体较小的时候更难辨认,所以我们采取特殊染色的方式对真菌进行观察和诊断。六胺银染色法和过碘酸雪夫染色(PAS)法均对真菌有良好的显色效果,而六胺银染色比PAS染色的效果更敏感,对各种霉菌均着色,使菌丝和孢子呈明显的黑褐色,颜色形态对比清晰,在镜下极易辨认,也有利于长久保存。六胺银染色法和PAS染色法中第一步也是关键一步是使用氧化剂将真菌细胞壁内的多糖氧化成醛基,这决定了染色效果的好坏。目前临床上常用的氧化剂是5%铬酸水溶液,铬酸的配制需要用到三氧化铬,然而三氧化铬为高毒致癌物,危险性极大,吸入后可引起急性呼吸道刺激症状,严重者甚至发生化学性肺炎;口服则刺激和腐蚀消化道,引起恶心、呕吐、腹痛、血便等,重者出现呼吸困难、紫绀、休克、肝损害及急性肾功能衰竭等;长期接触三氧化铬会接触性皮炎、铬溃疡、鼻炎、鼻中隔穿孔及呼吸道炎症等。此外,三氧化铬作为助燃物极易引起燃爆,并且对水体容易造成污染,危害环境[1]。为了寻求更好的氧化剂替代,故本实验探索将高碘酸作为氧化剂使用时的实验条件。     

结肠癌组织中LKB1的表达及其与上皮-间质转化的关系

目的探讨LKB1在结肠癌组织中的表达及其与肿瘤上皮-间质转化的关系。方法采用免疫组化法检测75例结肠癌组织及对应癌旁正常结肠组织中LKB1、上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transformation,EMT)相关标志物E-cadherin、N-cadherin、vimentin的表达,分析LKB1表达与结肠癌临床病理特征及EMT的关系。结果 49例结肠癌组织中LKB1低表达,55例正常结肠组织中LKB1高表达;LKB1表达降低与淋巴结转移、TNM肿瘤分期相关(P0.05);E-cadherin、N-cadherin、vimentin分别在25例、48例、26例结肠癌组织中高表达,LKB1表达与E-cadherin表达呈正相关(r=0.648,P0.05),与Ncadherin(r=-0.891,P0.05)和vimentin(r=-0.660,P0.05)表达呈负相关。结论 LKB1在结肠癌组织中表达下调,与EMT的发生呈正相关,可作为结肠癌转移发生的预测指标。     

超声引导下微波消融联合乙醇注射治疗兔肝VX2瘤

目的评估超声引导下微波消融联合乙醇注射治疗兔肝VX2瘤的可行性和安全性。方法 30只新西兰大白兔于肝脏上移植VX2瘤,2周后经超声造影确认肿瘤移植成功后,MW组(15只)和MP组(15只)分别接受超声引导下微波消融治疗和微波消融联合无水乙醇注射治疗。治疗结束后1周,将动物处死,取出肝脏观察消融范围。结果种植VX2瘤后2周,MW组和MP组分别有13只和14只兔子成瘤。两组兔子均耐受治疗,MP组消融范围明显大于MW组(P<0.01)。消融后大体标本显示,MP组形态欠规则。HE染色显示,两组病理组织无明显差异。结论微波消融联合乙醇注射治疗兔肝VX2瘤安全、有效。     

弹力纤维及广谱型角蛋白双重染色与单纯弹力纤维染色在肺癌可疑胸膜侵犯病例中的比较

目的比较弹力纤维及广谱型角蛋白双重染色与单纯弹力纤维染色评估肺癌胸膜侵犯的效果。方法回顾性分析江苏省人民医院2015年6月~2016年7月经术后病理证实为肺癌病例的临床病理资料,选取HE染色后不能明确是否侵犯胸膜的104例使用弹力纤维及广谱型角蛋白双重染色和单纯弹力纤维染色进行病理分析。结果 104例患者中,使用单纯维多利亚蓝染色分析胸膜侵犯阳性患者46例,而使用双重染色法分析胸膜侵犯阳性患者63例,采用双重染色法评估胸膜侵犯阳性率高于单纯弹力纤维染色(P0.05)。进一步病理学观察发现,使用双重染色法与单纯弹力纤维染色法分析结果矛盾的患者,大部分为单个或数个广谱角蛋白染色阳性的肿瘤细胞突破胸膜。结论相对于单一方法染色,弹力纤维及广谱型角蛋白双重染色结合了两者的优点并可同步显像胸膜及肿瘤细胞,能更好的观察肿瘤细胞与周围胸膜之间的毗邻关系,对于明确病理诊断及制定临床治疗方案具有积极意义。     

血管肌纤维母细胞瘤5例临床病理分析

目的探讨血管肌纤维母细胞瘤(AMF)的临床病理学特点及诊断和鉴别诊断要点。方法采用HE及免疫组化方法,分析5例发生于外阴及其他部位的血管肌纤维母细胞瘤。结果 5例AMF中2例位于外阴,1例位于阴道,1例位于足底,1例位于腹股沟。镜下见肿瘤境界清楚,在大片黏液背景中见丰富薄壁的海绵样血管和梭形上皮样肿瘤细胞。瘤细胞分布有明显的疏密区,密集区瘤细胞聚集于血管周围,成束或链状排列;疏松区弥散于黏液背景中,且常与胶原纤维伴行。免疫组化:肿瘤细胞vimentin和desmin(+),CD34、actin、CD117、S-100、CD31和CK(-);发生于外阴和阴道的3例ER和PR(+)。术后随访3例,均无复发。结论血管肌纤维母细胞瘤是一种好发于女性外阴部的良性软组织肿瘤,局部切除可治愈,但也有少数复发病例报道,组织学上需与侵袭性血管黏液瘤、富于细胞的血管纤维瘤、纤维上皮性间质息肉、上皮样平滑肌瘤、栅栏状肌纤维母细胞瘤等鉴别。     

HE染色原理和试剂配制及染色过程中的若干问题的探讨

目的 探讨HE染色原理和试剂配制及染色过程中的若干问题的临床基础性意义,推广优良、简捷、经济的试剂配制方法,研究染色过程中的若干问题,完美HE染色,明确病理诊断,利于临床治疗.方法 采用本科室自己配制试剂所染HE切片30张和30张(对照组)某试剂公司配制试剂所染HE切片进行显微镜下对比,分析两者的优缺点及染色过程中的若干问题.结果 本科室自家配制试剂所染HE切片明显优于对照组,尤其体现在细胞核着色上,注重染色过程中的若干问题的切片比未注重染色过程中的若干问题的切片质量高.结论 HE染色原理和试剂配制及染色过程中的若干问题的探讨,从基础理论出发,不断实践,为更完美、清晰地呈现显微镜下正常或异常的组织细胞结构,明确病理诊断,从而更好更快地指导临床治疗而努力.     

正交设计试验在免疫组化检测琥珀酸脱氢酶条件优化中的应用

免疫组化染色已成为病理学临床诊断和研究中不可缺少的重要技术之一,其染色是否成功受抗原修复、一抗浓度、孵育时间、温度等因素的影响。在实际工作中,检测一些新抗体时需从众多影响因素的不同水平去摸索最佳的检测条件,费时费力。为了减少实验次数和劳动量,降低实验成本,本文将正交设计试验引入免疫组化检测条件优化实验中,运用免疫组化法检测琥珀酸脱氢酶( succinate dehydrogenase, SDH)在胃肠道间质瘤中的表达,探讨该方法的可行性,以便于寻找一种经济、简易、可行的免疫组化检测条件优化方法。     

叉头盒蛋白A1过表达对SW480细胞增殖和凋亡及EMT形成影响

目的探讨叉头盒蛋白A1(fork-head box protein A1,FOXA1)过表达对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)形成的影响,为结肠癌发生发展机制研究提供一定参考。方法收集南京医科大学第一附属医院2014-03-01-2016-10-31结肠癌手术切除癌组织及其配对正常组织标本各50例。体外培养结肠癌细胞SW480、T84、DIFI及人正常结肠上皮细胞NCM460,以随机数字表法分成空白对照组(CK组)、转染含慢病毒载体对照液的阴性对照组(NC组)和转染含FOXA1过表达慢病毒载体的FOXA1过表达(FOXA1过表达组)3组。采用qRT-PCR法检测细胞中FOXA1mRNA表达水平,采用MTT法检测细胞增殖,采用AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡,采用流式细胞术法检测细胞周期,采用蛋白质印迹法检测细胞中FOXA1蛋白及EMT过程相关蛋白的表达。结果结肠癌组织FOXA1mRNA及蛋白表达水平分别为0.42±0.12、0.28±0.07,低于正常组织的1.11±0.24、0.98±0.21,t值分别为18.183、22.361,均P<0.05。结肠癌SW480、T84、DIFI细胞中FOXA1mRNA分别为0.11±0.02、0.14±0.03和0.15±0.03,蛋白表达水平分别为0.34±0.07、0.38±0.09和0.37±0.08,均低于正常上皮细胞的0.27±0.06、0.67±0.09,F值分别为10.259、10.385,P值分别为0.004、0.004;与CK、NC组比较,FOXA1过表达组结肠癌SW480细胞凋亡率(F=32.511)、G0/G1期细胞比例(F=8.860)、FOXA1mRNA(F=325.500)及其蛋白(F=39.670)、E-cadherin(F=37.507)、Cytokeratin蛋白水平(F=14.957)均升高,均P<0.05;24(F=22.407)、48(F=65.290)和72h(F=46.778)的A值、S期细胞(F=11.042)、G2/M期细胞比(F=6.139)、N-cadherin(F=20.746)、Vimentin(F=26.493)、Twist(F=11.024)、β-catenin蛋白(F=29.359)表达水平均降低,均P<0.05。结论过表达FOXA1能够抑制结肠癌SW480细胞增殖,诱导其凋亡,可能抑制结肠癌细胞EMT过程。