3例瓜氨酸血症I型患儿基因与外周血代谢物表达特点

目的 探究瓜氨酸血症I型患儿基因与外周血代谢物表达特点,提高临床对瓜氨酸血症I型的认识.方法 收集瓜氨酸血症I型患儿病例信息,利用液相串联质谱技术对3例瓜氨酸血症I型患儿进行外周血代谢物的测定,归纳总结瓜氨酸血症I型患儿外周血小分子代谢物表达特点,并且对瓜氨酸血症I型患儿进行高通量二代测序,获取患儿的基因突变类型.结果...     

2型糖尿病患者的氨基酸及酰基肉碱代谢水平分析

目的 检测并分析2型糖尿病患者血液中11种氨基酸和31种酰基肉碱的水平,评价小分子代谢物作为2型糖尿病的诊断价值.方法 收集门诊2型糖尿病患者302例,正常对照302例,利用液相串联质谱技术测定血液中的11种氨基酸和31种酰基肉碱的水平并进行比较分析.用ROC曲线判断诊断效能.结果 2型糖尿病患者与对照组的7种氨基酸和21种酰基肉碱水平差异有统计学意义,C2对2型糖尿病有辅助诊断价值,曲线下面积为0.771(95％CI=0.734～0.809),P<0.01,当临界值为12.50μmol/L时,灵敏度和特异性分别为60.3％和82.5％.结论 2型糖尿病患者存在氨基酸和酰基肉碱代谢紊乱,C2可以作为2型糖尿病的辅助诊断指标.     

不同储存条件和反复冻融操作对血浆蛋白组学检测的影响

目的 分析不同储存条件和反复冻融操作对血浆蛋白组学鉴定水平的影响,以探讨蛋白组学分析中血浆保存标准.方法 以30名健康志愿者为研究对象,取空腹静脉血离心得血浆.将30份样品平均分为3组混合为血浆池,置于不同条件(4℃、-20℃、-80℃、液氮)保存,通过考察保存时间和反复冻融次数观察蛋白检测的稳定性.结果 在4℃保存样本72 h后蛋白鉴定数量明显上升,丰度差异蛋白所占比例22.88％,显著高于其他实验组;保存条件为-20℃,-80℃,液氮实验组冻融3次无显著变化;于-80℃保存1年蛋白检测水平仍较为一致.结论 血浆在4℃保存48 h内蛋白检测水平稳定,于-80℃长期冻存1年内蛋白水平稳定,反复冻融3次以内对血浆蛋白组学检测的影响较小.     

相同多态性位点对结核分枝杆菌北京家族菌株多位点可变数目串联重复序列基因型构成的影响

目的 探讨多态性相同的位点对北京家族结核分枝杆菌多位点可变数目串联重复序列(MIRU-VNTR)基因分型的影响,为合理选择分型位点提供科学依据.方法 分别选取9个及12个位点,构成4组MIRU-VNTR位点组合,其中,9位点组成的两个组合中,分别有两个不同位点(MIRU40/MIRU16)多态性一致,其余为相同位点;12位点的两个组合则分别包括另外两个多态性相同的位点(MIRU39/MIRU31).进行聚类分析,比较含有相同多态性的不同位点组合的分辨能力、成簇能力以及基因型特点.结果 9位点两个组合都将菌株分为三群,其中,Ⅲ群菌株仅有1株相同,分别占组合1、2的2.0％和1.6％.12位点组合也将菌株分为三群,第Ⅱ群菌株组成差异非常明显,完全没有相同的菌株.结论 多态性相同的位点对北京家族菌株MIRU-VNTR基因分型影响较大.在选择MIRU-VNTR分型位点时,应不仅仅检验位点的分辨能力和对成簇的影响,还应考虑有相同/相近多态性的位点对基因型构成的影响.     

运动损伤恢复后进行不同体能训练的唾液生化指标分析

目的 探讨唾液样本无创生化指标作为反映早期运动损伤,监测常规指标的可行性.方法 选取同一时间开始训练的男性青年(年龄18.5±0.1岁)初始训练后(3km跑)有横纹肌溶解症状且经治疗后完全恢复后(1～2个月)患者70例(年龄18.4±0.1岁),同时随机选择无症状的同期男性青年70例(年龄18.7±0.2岁)作对照,对后续训练进行观察.训练包括长时间低强度(2d徒步70 km)和短时间高强度(2h 15km),分别在训练前、2d徒步70km前后、2h 15km前后,进行唾液采集并对21项生化指标进行检测.比较唾液生化指标的变化,评估其作为监测常规指标的意义.结果 发现两组唾液样本的生化指标随着运动强度的不同,呈现一定的变化趋势.在长时间低强度的训练后,疾病组和对照组的NAGL、UREA均显著升高(P<0.05),不同的是,疾病组CRE、UA、TP、CO2、LDH显著上升(P<0.05),对照组的Ca显著上升(P<0.05);在短时间高强度的训练前后,疾病组和对照组的GLU、CYSC、UREA、CRE、CO2均显著上升(P<0.05),GGT、NAGL、UA、ALP、ALT、P、LDH均显著降低(P<0.05),整体趋势一致,不同的是,疾病组AST显著降低(P<0.05),对照组K显著上升,Ca、Mg显著降低(P<0.05).通过绘制ROC曲线并计算分析AUC,短时间高强度运动后Ca越高对运动损伤的预警价值越大,约登指数为0.388,灵敏度和特异性分别为69.8％和69.0％.结论 唾液生化指标可在一定程度上反映运动训练损伤对机体的影响,两组在基于自身运动前后对比,以唾液血糖、肾功(NAGL、CYSC、UREA、CRE、UA)、肝功(GGT、ALP、ALT、AST、TP)、电解质(CO2、P)、心肌酶(LDH)受运动损伤影响较明显,Ca可作为反映短时间高强度训练损伤敏感无创预警指标.     

串联质谱技术筛查新生儿甲基丙二酸血症回顾性分析

目的回顾性分析串联质谱技术在新生儿甲基丙二酸血症筛查中的应用。方法利用液相串联质谱技术筛查2015年10月至2017年12月在该院进行48项遗传代谢病检测的样本近10万例,对初筛为阳性的样本做召回复查,对复查仍为阳性的样本通过气相色谱质谱技术进行尿有机酸分析,并采用基因测序作进一步确诊。结果通过对近10万例样本进行筛查,发现132例疑似甲基丙二酸血症、丙酸血症样本,确诊甲基丙二酸血症1例,丙酸血症1例。结论串联质谱技术对甲基丙二酸血症的诊断有重要的提示作用,需密切结合气相色谱质谱和测序技术鉴别诊断丙酸血症。     

结核分枝杆菌Rv0073基因在大肠杆菌中的表达及纯化

目的 构建结核分枝杆菌(MTB) Rv0073基因原核表达载体并进行表达和纯化.方法 以MTB H37Rv基因组DNA为模板,采用聚合酶链反应(PCR)扩增目的基因片段,构建原核表达载体pET26b-Rv0073,经测序确定无误后转化至大肠杆菌(E.coli)感受态细胞BL21中.用聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)方法检测重组蛋白表达,检测异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导不同时间、不同温度条件下重组蛋白表达量.采用His镍磁珠进行外源蛋白小量纯化.结果 成功构建重组表达质粒,重组蛋白经IPTG诱导后,2h开始明显表达且表达量无时间依赖性,在不同温度诱导下,重组蛋白的表达量随温度的增高而减少.重组蛋白以包涵体形式存在,经His镍磁珠纯化后获得重组蛋白.结论 成功构建并表达Rv0073蛋白,为后续Rv0073的大量纯化及其功能研究奠定了基础.     

运动损伤恢复后进行体能训练的尿液有机酸代谢研究

目的 研究体能训练过程中运动损伤对机体有机酸代谢的影响,为合理安排训练提供理论依据.方法 选取30例训练后横纹肌溶解症患者作为疾病组和参加同期训练的30名健康大学生作为正常组,疾病组均已通过入院治疗并调整休息2月.随后两组共同进行长时间低强度的70km徒步运动和短时间高强度的2h 15km训练,分别在拉练前、徒步70km运动前后、2h 15km运动前后、集训结束后进行尿液有机酸的动态检测.结果 两组在经过运动后,乳酸水平增加,柠檬酸、苹果酸、富马酸、2-酮异戊酸、3-羟基异戊酸、乙醛酸、2-羟基异戊酸、苯乙酸、喹啉酸、2-甲基-3-羟基丁酸、肌酐、杏仁酸等各个指标均较运动前有所升高.与正常组相比,疾病组的乳酸、柠檬酸、富马酸、2-酮戊二酸、乙醇酸、3-羟基异戊酸、2-羟基丁酸、丙二酸、肌酐、2-酮异戊酸明显升高,棕榈酸水平持续低于正常组.结论 运动后机体有机酸代谢明显增强,运动损伤恢复后再次进行大负荷运动时,会加速体内的无氧代谢,使乳酸堆积,并且消耗更多的脂类来维持所需的能量.     

25-羟基维生素D不同临床检测方法的评价

目的 分析和比较电化学发光法(ECLIA)和液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法检测25-羟基维生素D[25(OH)D]的临床性能,为临床提供更准确有效的25(OH)D检测依据.方法 收集263例血清标本,分别用ECLIA和LC-MS/MS两种方法测定25(OH)D水平,对测定结果进行统计分析和比对,探讨两种方法测定结果的相关性和差异性.结果 分析263例临床样本结果,与LC-MS/MS相比,ECLIA相对平均偏差为-0.9％;ECLIA检测结果与LC-MS/MS检测结果相关性为0.51,一致性为0.39;Bland-Altman回归分析结果具有统计学意义,两种方法的测量结果存在差异.结论 ECLIA无法检测25(OH)D2,与LC-MS/MS对比存在差异,相关性和一致性有待提升.