胞壁酰二肽激活小鼠原代肝窦内皮细胞中NOD2信号

目的调查小鼠原代肝窦内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cells,LSECs)中NOD2信号通路激活后产生的免疫应答效应。方法使用胶原酶灌注方法结合percoll密度梯度离心加抗小鼠LSEC免疫磁珠分离纯化小鼠LSEC。定量PCR检测小鼠原代LSEC NOD1和NOD2 mRNA表达水平,同时给胞壁酰二肽刺激小鼠原代LSEC;定量PCR检测NOD2、RIP2、TNF-α和IL-6mRNA表达水平;定量ELISA检测细胞上清IL-6和TNF-α蛋白产量。结果小鼠原代LSEC中NOD2基础表达水平相对于NOD1基础表达水平较低。胞壁酰二肽刺激LSEC后诱导NOD2及其下游分子RIP2表达水平上调,接着诱导产生IL-6效应分子,而没有诱导产生TNF-α等其它细胞因子和趋化因子。结论胞壁酰二肽能够激活小鼠LSEC中NOD2介导的信号通路,并诱导产生IL-6效应分子,可能在维持肝脏内环境稳定中发挥着重要作用。     

mDixon技术在成人非酒精性脂肪性肝病临床诊断中的初步应用

目的探讨mDixon技术半定量测量肝脏质子密度脂肪分数(PDFF)在成人非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)临床诊断中的应用价值。方法回顾性分析2018年3月至2018年9月在上海交通大学附属第一人民医院行MR上腹部mDixon成像序列扫描的成人患者,排除肝脏其他疾病以及因恶性肿瘤正在接受放射、化学治疗的患者,进行PDFF测量,与常规MR及超声结果进行比较,并测量脐孔水平皮下脂肪厚度和腹部前后、左右径,计算腹围。通过泊松回归分析脂肪含量与年龄、性别、皮下脂肪、腹围的相关性。结果纳入436例患者腹部MR进行脂肪定量分析,其中女性199例,男性237例,年龄20～89岁。肝脏PDFF范围:0.03%～27.78%,均值4.70%。其中PDFF5%有324例(74.31%),PDFF≥5%有112例(25.68%),PDFF≥33%为0。436例中超声诊断脂肪肝有61例,占13.99%。男性和女性患者的肝脏PDFF高峰年龄不一致,肝脏PDFF与皮下脂肪、腹围均有明显相关性(P0.001),且男性与年龄明显相关(P0.001)。结论基于mDixon技术的MRI-PDFF能自动获得相应肝脏脂肪含量值,具有方便快捷、结果可靠、重复性好等优势,其脂肪肝的检出率优于超声,可为NAFLD的肝脂肪变非创伤性诊断和评估提供帮助。     

FibroTouch检测肝脏受控衰减参数对肝脂肪变的诊断价值分析*

目的 探讨FibroTouch定量检测肝脂肪变受控衰减参数（CAP）诊断肝脏脂肪变程度的价值。方法 2016年8月~2017年10月纳入脂肪肝可疑人群63例,行FibroTouch检测和肝活检检查。采用多元线性回归分析,建立回归方程,构建受试者工作特征（ROC）曲线,计算曲线下面积（AUC）,确定CAP值的诊断效能和影响因素。结果 经肝组织学检查,诊断为S0者36例（57.1%）,NAFLD人群27例,其中S1者12例（19.1%）,S2者9例（14.3%）,S3者6例（9.5%）;其CAP值分别为（200.2±21.2） dB/m、（228.7±51.7） dB/m、（259.4±29.1） dB/m和（320.5±22.4） dB/m;CAP与BMI（r=0.503,P=0.000）、肝细胞脂肪变性程度（r=0.761,P=0.000）呈显著正相关;BMI和肝脂肪变程度为CAP值的独立预测因素;CAP值诊断肝脏脂肪变S1、S2和S3的截断点分别为212 dB/m、246 dB/m和287 dB/m,其敏感度分别为81.5%、86.7%和100.0%,特异度分别为80.6%、91.7%和96.5%。结论 FibroTouch可以有效而准确地诊断和评估肝脏脂肪变性程度,值得进一步研究。     

经食管隧道内镜纵隔探查术的动物实验研究

背景:目前内镜隧道技术用于消化道腔外手术有诸多问题仍存在争议。目的:探讨经食管隧道内镜纵隔探查术的可行性和安全性。方法:采用实验用家猪,建立食管黏膜下隧道,行经食管隧道内镜纵隔探查术,术后以止血夹封闭食管黏膜创面,予青霉素预防感染。2周后复查胃镜,处死实验动物,取食管标本进行大体和组织学检查。观察实验动物存活率以及创面愈合和并发症发生情况。结果:术中能清晰探及主动脉、气管、心包等纵隔内器官,术后实验动物均存活,无明显并发症发生。2周后胃镜复查和解剖标本组织学检查提示创面愈合良好。经与尸检结果比对,内镜下定位相应解剖结构准确。结论:经食管隧道内镜纵隔探查术具有一定的可行性且相对安全。     

湖北地区119例 HCV 1b 型 NS3丝氨酸蛋白酶区的序列变异研究

目的：分析丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)1b 型非结构蛋白3(non-structure protein 3, NS3)丝氨酸蛋白酶区序列的变异规律及影响意义。方法使用基因型别特异性引物,通过巢式 PCR 的方法扩增119例慢性 HCV 1b 型患者血清中 HCV NS3区。对 PCR 产物进行测序后获得 NS3区核苷酸及氨基酸序列。分析119例 HCV 1b 型 NS3区序列的同源性及种系进化,分析 NS3丝氨酸蛋白酶区的变异情况及重要功能位点的突变情况。结果湖北地区 HCV 1b 型与 HCV 1b 型标准株及亚洲地区序列同源性较高,核苷酸序列同源性为85.94％及87.68％,氨基酸序列同源性可达96.83％及92.39％,而与欧美地区1b 型同源性较低,核苷酸序列同源性均为85.57％,氨基酸序列同源性分别为92.17％及93.38％。进化树分析提示湖北地区序列与中国其他地区序列亲缘性较接近,而与日本、东南亚地区及欧美地区的1b 型亲缘性较远。 NS3丝氨酸蛋白酶区185个氨基酸内有34个位点有氨基酸突变,但其重要的功能区包括催化酶底物特异性结合位点以及 Zn2﹢结合位点在所有序列中均高度保守,无一例发生突变。结论对湖北地区 HCV 1b型 NS3丝氨酸蛋白酶区的变异规律及生物学意义的研究进一步丰富和完善了对 HCV 1b 型基因组变异情况的认识。为了解 HCV1b 型在中国地区的进化过程提供一定理论基础。     

胃黏膜肠化生的危险因素——60386例胃镜和病理分析

背景:胃黏膜肠化生为慢性萎缩性胃炎的病理表现之一,对其危险因素的早期干预有助于减缓萎缩性胃炎向胃癌发展的进程。目的:探讨胃黏膜肠化生的危险因素。方法:收集2013年1月—2018年9月至上海交通大学附属第一人民医院行胃镜检查的60 386例患者的胃镜及其病理检查结果。采用Logistic回归分析探讨胃黏膜肠化生的危险因素。结果:15 318例(25. 4%)患者发生胃黏膜肠化生,6 218例(10. 3%)伴有胆汁反流。单因素Logistic回归分析显示,性别、年龄、胆汁反流、Hp感染均为胃黏膜肠化生的影响因素(P 0. 05)。多因素Logistic回归分析显示,胆汁反流对胃黏膜肠化生无明显影响(OR=1. 04,95%CI:0. 97～1. 11,P=0. 25),性别(OR=1. 13,95%CI:1. 08～1. 17,P 0. 01)、年龄(OR=1. 59,95%CI:1. 56～1. 61,P 0. 01)、Hp感染(OR=1. 25,95%CI:1. 19～1. 31,P 0. 01)为胃黏膜肠化生的危险因素。结论:性别、年龄和Hp感染为胃黏膜肠化生的危险因素,尚不能认为胆汁反流对胃黏膜肠化生有影响。     

Establishment and application of hepatitis B virus persistent replication model in IFNAR−/− mouse

The type Ⅰ interferon and IFNAR play an important role in hepatitis B virus (HBV) infection and anti-HBV therapy. However, its mechanism of action is still poorly understood. To gain more insights into the role of typeⅠinterferon and typeⅠinterferon receptor (IFNAR) in HBV infection, we established an HBV persistent replication IFNAR knockout (IFNAR-/) mouse model and preliminarily applied this model. At first, the progeny of IFNAR-/mouse was reproduced. Then hydrodynamic injection with pAAV/HBV1.2 plasmid was conducted to establish the persistent HBV replication IFNAR-/mouse model. At last, we applied this model to evaluate the effect of nucleoside analogues entecavir (ETV) on HBV replication. It was found that there was no difference in the serum HBsAg and HBeAg levels and HBcAg expression in the liver tissue between the ETV treated groups and normal saline (NS) treated group, but the serum HBV DNA levels were significantly suppressed 10, 25, 40 and 55 days after the ETV treatment [P=0.035, P=0.00, P=0.149 and P=0.084, IFNAR knockout (KO) control group vs. C57BL/6 ETV groups, respectively; P=0.081, P=0.001, P=0.243 and P=0.147, IFNAR KO control group vs. IFNAR KO ETV groups, respectively]. Interestingly, there was no difference in serum HBV DNA levels between the ETV treated IFNAR-/and C57BL/6 mice. This result suggests that HBV suppression during ETV treatments doesn’t depend on typeⅠ interferon and IFNAR. Collectively, persistent HBV replication IFNAR-/mouse model that we established is a useful and convenient tool to detect the function of the typeⅠinterferon and IFNAR in HBV infection and anti-HBV treatments.     

CXCR3基因敲除小鼠慢性乙型肝炎病毒复制模型的建立

目的建立CXCR3基因敲除小鼠慢性乙型肝炎病毒复制模型。方法繁育CXCR3基因敲除小鼠,并抽提组织DNA进行聚合酶链反应及凝胶电泳鉴定基因型。CXCR3基因敲除小鼠纯合子9只与野生型C57BL/6小鼠9只同时高压水注射pAAV/HBV1.2质粒,按既定时间点采血检测HBsAg、HBeAg、HBV DNA,以及取肝组织行免疫组织化学检测HBcAg表达。结果本实验室繁殖的CXCR3基因敲除小鼠均为纯合子基因型。在pAAV/HBV1.2质粒转染后第1天,CXCR3基因敲除小鼠与野生型C57BL/6小鼠血清HBsAg水平分别为1134.69±244.42和1759.63±881.20(P=0.096);第4天分别为5305.29±1395.06和7493.29±658.63(P=0.003);第15天分别为1615.04±1187.16和1536.19±1046.02(P=0.905);第40天为229.45±79.27和228.19±295.02(P=0.996);第1天血清HBeAg水平分别为6.65±1.50和20.61±4.03(P=0.000);第4天为6.33±1.61和9.79±2.31(P=0.007);第15天为3.52±1.97和2.85±0.74(P=0.425);第40天为1.28±0.06和1.90±1.01(P=0.431);第10天血清HBVDNA水平分别为4.38±0.22 lgcopies/ml和6.56±0.16lgcopies/ml(P=0.008);第15天为4.41±0.88lgcopies/ml和5.69±0.04lgcopies/m(l P=0.177);第25天为4.48±0.04lgcopies/ml和6.44±0.16lgcopies/ml(P=0.004);第40天为3.66±0.45lgcopies/ml和5.20±0.28lgcopies/ml(P=0.055);两组血清HBV DNA持续存在,在转染后第40天仍为阳性。肝组织HBcAg持续阳性,在转染后第4天、15天和40天均呈高表达,但CXCR3基因敲除小鼠肝组织HBcAg表达较低。结论我们成功建立了CXCR3基因敲除小鼠慢性HBV复制模型,可用于进一步研究CXCR3基因及其配体与HBV感染的关系。