HL—60细胞凋亡小体体外负载树突状细胞的实验研究

目的：证实树突状细胞(Dendrmc cells,DCs)可通过吞噬凋亡小体获取抗原物质,探讨其在肿瘤免疫治疗中的意义。方法：利用吸附单克隆抗体-磁珠分离系统(MACS),从人脐血中分离出CD34^ 细胞,体外以重组hGM—CSF hSCF hTNF—α hFL诱导培养DCs,光镜观察诱生细胞的形态,流式细胞术(FACS)检测其表型。电镜观察和流式细胞仪检测三氧化二砷(As2O3)诱导凋亡的HL-60细胞,将凋亡的HL-60细胞与培养早期的DCs共育4～8h,电镜观察DCs吞噬凋亡小体的现象。结果：CD34^ 细胞经诱生后生成了大量具有典型形态和表型的成熟DCs;电镜下见凋亡的HL-60细胞内凋亡小体形成,流式细胞仪检测DNA含量,见亚二倍体峰形成。凋亡细胞与DCs共育后,电镜下见DCs吞噬凋亡小体的现象。结论：DCs可通过吞噬凋亡小体摄取抗原物质。     

hB7-1重组腺病毒感染的肿瘤细胞的生物学特性

目的 在完成hB7-1 cDNA克隆并成功构建包含hB7-1基因的重组腺病毒rAdexl-B7－1的基础上,对经rAdexl-B7－1感染的B16细胞的体外生物学特性进行了研究。方法 以FACS、电镜等方法观察病毒感染前后B16细胞的变化。结果 ①重组腺病毒经KEK293细胞扩增、CsCl纯化后滴度可达10^10ＰＦＵ／ml,且２０ＭＯＩ的病毒可使９５％以上的Ｂ１６细胞被感染。②细胞动力学研究显示,rAdexl-B7-1对Ｂ１６的生长及集落形成能力无影响。③ＦＡＣＳ结果表明,rAdexl-B7-1细胞的增殖周期无影响。④扫描电镜及透射电镜结果表明,经rAdexl-B7-1感染的Ｂ１６细胞在表面形态及超微结构上出现变化。结论 重组腺病毒rAdexl-B7-1对Ｂ１６细胞的生长动力学无影响,对形态学有轻微影响。     

白细胞介素-2基因导入肿瘤浸润淋巴细胞获得成功(简报)

1990年9月美国 NCI 批准了 Rosenbeng等应用导入 TNF 基因的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)治疗晚期黑色素瘤病人的研究方案,宣告了恶性肿瘤基因治疗的开始。这一疗法为将具有治疗作用的因子定向导入肿瘤局部有效地杀伤肿瘤提供了有前途的新的途径。基于应用淋巴因子激活的淋巴细胞(LAK)     

小鼠Lewis肺癌移植瘤模型活体分子成像研究

目的建立能进行光学活体分子成像的lewis肺癌(LLC)移植瘤模型，探讨其在观察研究肿瘤的生长、转移、肿瘤血管生成及治疗效果等方面的价值。方法利用pLEIN-CMV-GFP逆转录病毒载体将绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)报告基因转入小鼠Lewis肺癌(LLC)肿瘤细胞，体外稳定高效表达后，种植于小鼠双侧腹股沟，在不同时间利用光学活体成像仪成像，观察并用病理学证实。结果所有动物均成功制成荷GFP基因LLC移植瘤模型，GFP基因稳定高效表达，可见随肿瘤生长，绿色荧光团块增大。结论该模型稳定可靠，能够使我们利用光学分子成像的方法，实时、无创、连续地观察肿瘤生长，为研究肿瘤提供了新的思路和方法。     

人白细胞介素18和新城疫病毒HN基因嵌合表达载体的构建与表达

目的：构建人白细胞介素18（IL-18）与新城疫病毒（NDV）HN基因嵌合表达质粒。 方法：选用适当的限制性核酸内切酶将NDV的HN基因连接至真核表达质粒pVAX1 IL-18中IL-18基因的尾部,同时替换掉IL-18基因的终止子,构建表达IL-18 HN 嵌合基因的pVAX1 IL-18 HN质粒,经酶切鉴定正确后,通过脂质体介导转染HeLa细胞,应用Western blotting及血凝试验检测其表达情况。 结果：酶切鉴定证实正确地构建了pVAX1 IL-18 HN嵌合表达质粒,Western blotting和血凝试验检测结果表明,嵌合后的IL-18和HN基因均能够表达,且表达的HN蛋白具有较高的血凝活性。 结论：IL-18和HN基因嵌合后不影响二者的表达,而且表达的HN蛋白具有血凝活性。     

人脐血CD_(34)~ 细胞体外诱导树突状细胞及其功能的检测

目的　探讨人脐血CD 34 细胞体外诱导树突状细胞 (dendriticcells ,DCs)的可能性 ,并检测DCs的功能。方法　利用吸附单克隆抗体 磁珠分离系统 (MACS)获得脐血CD 34 细胞 ,体外以重组的人干细胞集落刺激因子 (hSCF)、人粒 巨噬细胞集落刺激因子 (hGM CSF)、人肿瘤坏死因子α(hTNF α)、人酪氨酸激酶受体家族III的配体 (hFL)诱生DCs。流式细胞仪检测DCs的表型 ,3H TdR掺入法检测DCs体外刺激同种异体T细胞增殖的功能 ,最后通过乳酸脱氢酶法检测DCs活化的T细胞对肿瘤细胞的杀伤性。结果　从人脐血分离到的CD 34 细胞 ,经hSCF、hGM CSF、hTNF α、hFL共同培养后 ,第 7天镜下即可见典型形态的DCs ,第 10天时明显增多 ,细胞表型检测见CD 1a 细胞的比例增加到 (2 8± 4) %(P <0 0 1) ,人类白细胞抗原DR(HLA DR)表达占 (94± 11) %。在三种不同的混和比例下 ,DCs均可刺激异源T细胞增殖 ,其中以DCs∶T细胞为 1∶5时增殖最明显。而且被激活的T细胞对三种不同组织来源的肿瘤细胞均产生了明显的杀伤性 (P <0 0 1)。结论　人脐血CD 34 细胞体外经细胞因子诱导培养 ,可生成大量具有典型功能的成熟DCs。     

HL-60细胞凋亡小体体外负载树突状细胞的实验研究

目的 :证实树突状细胞 (Dendritic cells,DCs)可通过吞噬凋亡小体获取抗原物质 ,探讨其在肿瘤免疫治疗中的意义。方法 :利用吸附单克隆抗体 -磁珠分离系统 (MACS) ,从人脐血中分离出 CD34+ 细胞 ,体外以重组 h GM- CSF+ h SCF+ h TNF-α+ h FL诱导培养 DCs,光镜观察诱生细胞的形态 ,流式细胞术 (FACS)检测其表型。电镜观察和流式细胞仪检测三氧化二砷 (As2 O3 )诱导凋亡的 HL - 6 0细胞 ,将凋亡的 HL- 6 0细胞与培养早期的 DCs共育 4～ 8h,电镜观察 DCs吞噬凋亡小体的现象。结果 :CD34+细胞经诱生后生成了大量具有典型形态和表型的成熟 DCs;电镜下见凋亡的 HL- 6 0细胞内凋亡小体形成 ,流式细胞仪检测 DNA含量 ,见亚二倍体峰形成。凋亡细胞与 DCs共育后 ,电镜下见 DCs吞噬凋亡小体的现象。结论 :DCs可通过吞噬凋亡小体摄取抗原物质。     

补气化湿汤联合微创手术治疗结直肠癌82例

目的探讨自拟补气化湿汤联合微创手术治疗结直肠癌的临床疗效。方法回顾分析2008年1月至2011年5月施行82例中药联合微创手术及86例常规手术患者的临床资料,统计分析两组患者的一般资料、手术情况、病理结果及生存期等数据。结果中药联合微创手术组的生存率优于常规手术组,结果有显著差异。结论中药联合微创手术能有效治疗结直肠癌,远期疗效优于常规手术。     

对逆转录病毒为载体基因治疗的两点研究

用健康人外周血淋巴细胞,经羧甲基茯苓多糖促诱生剂制备而成的高效价临床级IL-2可用于肌注、静滴或动脉输注,IL-2与LAK细胞和化疗结合治疗晚期肿瘤44例,其中CR PR13例(29.3％),CR PR MR 22例(50％),SR16例,无效死亡6例,总有效率(CR PR MR SR)为86.4％。IL-2与~(60)Co放射综合治疗肿瘤37例,CR为51.4％,PR为46.8％,SR者例(2.7％),总有效率为97.3％,一年生存率为86.2％。应用CMP促诱生的低剂量IL-2和低剂量放/化综合治疗16例晚期癌症,CR占37.5％,总有效率(CR PR)为93.8％,一年生存率为87.5％,结果表明:该低剂量IL-2/LAK继免疫化疗与放/化疗综合治疗晚期癌症是一种有效的治疗手段。     

人白细胞介素Ⅱ基因成功导入三株恶性肿瘤细胞

外源性基因导人TIL细胞对恶性肿瘤患者进行抗肿瘤的基因治疗是美国Rosenberg和Anderson共同提出的抗肿瘤基因治疗的最新方法。也曾有人提出将外源性基因转导进肿瘤细胞中，试图改变恶性肿瘤生物性状而创建自体或异体活瘤苗达到预防和治疗恶性肿瘤的目的。