大鼠结肠上皮细胞分离及培养方法的建立

目的:建立大鼠结肠上皮细胞的原代培养方法,为结肠上皮形态及功能研究提供理想的细胞模型.方法:采用6-15日龄乳鼠,取结肠剪碎、反复清洗后,弃上清,加10 mL、0.1%Ⅰ型胶原酶和透明质酸酶联合配制的消化液,37℃消化25 min,分离上皮细胞团;吹打消化液,取上清,加入培养基重悬反复离心3次后,细胞沉淀接种于含100 mL/L胎牛血清的完全培养基中,37℃、50 mL/L CO2细胞培养箱中培养.采用差速贴壁法及相差消化法去除成纤维细胞,细胞贴壁长满瓶80%-90%后用2.5 g/L的胰酶消化液消化并传代.结果:成功分离结肠上皮细胞团且活力较高.24 h后可见部分细胞团贴壁,贴壁细胞为多角形,4-8 d逐渐融合成片,呈现明显的"铺路石"样.细胞经传代处理后成纤维细胞明显减少.免疫荧光染色及透射电镜观察鉴定为上皮细胞.冻存处理复苏后细胞状态较佳.结论:通过该法可建立较稳定的大鼠结肠上皮细胞原代培养体系,为结肠上皮生理、病理及药物作用机制提供了体外研究平台.     

滋肾宁神胶囊对 D-半乳糖所致亚急性衰老模型大鼠的影响

[目的]观察滋肾宁神胶囊对D-半乳糖所致亚急性衰老模型大鼠的影响.[方法]选用SD大鼠随机分成空白对照组,模型组,七宝美髯丸组(剂量为2 g·kg-1·d-1),滋肾宁神丸组(剂量为3.33 g·kg-1·d-1),滋肾宁神胶囊高、中、低剂量组(剂量分别为9.96、4.98、2.49 g·kg-1·d-1);除空白对照...     

柚皮苷亲水凝胶骨架片制备及体外释放的研究

目的:制备柚皮苷亲水凝胶骨架片,并对其释药影响因素及释放模型进行探讨。方法:采取羟丙甲基纤维素(HPMC)为骨架材料,以湿法制粒压片法制备了柚皮苷亲水凝胶骨架片。考察了辅料(PEG类型、乳糖、蔗糖、甘露醇),HPMC分子量及含量对药物释放的影响,并采取零级、一级、Higuchi及Ritger-pappas模型,对药物的释放进行了拟合。结果:辅料对骨架片中药物释放的影响为:PEG4000PEG400PEG10000;填充剂为甘露醇的骨架片释放速度要快于含乳糖和蔗糖的骨架片;HPMC分子量及含量越大,药物释放越慢;药物的释放符合零级释放,药物的释放以溶蚀为主。结论:制备的柚皮苷亲水凝胶骨架片能持续缓慢地释放药物。     

溃结灵对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜IκB-α基因和蛋白表达的作用

目的 观察溃结灵对溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型结肠黏膜核因子抑制蛋白-κB(IκB-α)基因表达及磷酸化核因子抑制蛋白-κB(pIκB-α)蛋白表达的作用,对其抗UC作用机制进行探讨.方法 采用三硝基苯磺酸(TNBS)法复制UC大鼠模型并进行不同剂量药物干预.采用实时定量荧光PCR方法检测结肠黏膜IκB-α基因表达和Western blot方法检测结肠黏膜pIκB-α蛋白相对表达量.结果 模型组IκB-α基因相对表达量明显低于正常组(P＜0.01);溃结灵高剂量组ⅠκB-α基因相对表达量明显高于模型组(P＜0.05).模型组pIκB-α蛋白相对表达量明显高于正常组(P＜0.01);溃结灵低、高剂量组pIκB-α蛋白相对表达量均明显低于模型组(P＜0.05).结论 溃结灵对TNBS法UC大鼠模型结肠黏膜IκB-α基因表达有上调作用及对pIκB-α蛋白表达有抑制作用,其抗UC作用的机理可能为抑制IκB-α的磷酸化,进而抑制IκB-α蛋白的降解,最终抑制核转录因子-κB的活化,减轻炎症反应.     

牛大力对四氯化碳及酒精所致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的 研究牛大力对小鼠急性肝损伤的保护作用.方法 采用四氯化碳腹腔注射、56度红星二锅头酒灌胃诱导小鼠急性肝损伤模型,观察牛大力对小鼠血清AST,ALT活性及肝组织匀浆MDA含量、肝脏指数、胸腺指数的影响.结果 牛大力能降低模型小鼠血清中AST,ALT活性,减少肝匀浆MDA含量,降低肝脏指数,提高胸腺指数.结论 牛大力有保肝的作用.     

牛大力对小鼠免疫功能的影响

[目的]观察牛大力水提液对小鼠免疫功能的影响.[方法]选用SPF级KM小鼠,通过计算小鼠脾脏指数、胸腺指数、廓清指数和采用血清溶血素试验法、二硝基氯苯诱导小鼠迟发型变态反应试验法,观察高、中、低剂量牛大力(剂量分别为20、10、5 g·kg-1·d-1)对正常小鼠免疫调节的影响.通过测定免疫抑制小鼠(灌胃给予40 mg·kg-1·d-1醋酸泼尼松)脾脏指数、胸腺指数以及廓清指数,观察高、中、低剂量牛大力(剂量同前)对免疫低下小鼠免疫调节的影响.[结果]牛大力对正常小鼠脾脏指数、胸腺指数以及廓清指数均无显著性影响,但能不同程度地增加免疫低下小鼠的脾脏指数、胸腺指数及廓清指数(P<0.05或P<0.01).牛大力能显著提高小鼠血清溶血素含量(P<0.05),不同程度抑制小鼠迟发型皮肤过敏反应,但差异无显著性意义(与模型组比较,P>0.05).[结论]牛大力能不同程度地提高正常小鼠和免疫功能低下小鼠的免疫功能.     

清开消炎方对卵清蛋白致大鼠过敏性鼻炎的实验研究

目的 观察清开消炎方对卵清蛋白(OVA)致大鼠过敏性鼻炎(AR)的疗效.方法 以OVA为致敏原建立大鼠AR模型,实验分正常组,模型组,清开消炎方高、中、低剂量组,鼻炎康组,藿胆丸组,观察各组大鼠行为学表现,测定其血清总IgE水平及组胺含量、鼻分泌物及血液嗜酸性粒细胞(EOS).同时,观察鼻黏膜组织学变化.结果 清开消炎方各剂量组动物鼻瘁、喷嚏、清涕、EOS浸润明显减轻,鼻黏膜厚度变薄(P＜0.01);血清总IgE以及组胺水平降低.结论 清开消炎方能缓解AR大鼠鼻部症状,对AR可能具有较好的疗效.     

五指毛桃不同提取物补益作用的实验研究

目的:比较五指毛桃水提取物和醇提物的补益作用.方法:通过抗应激、免疫功能及贫血实验观察五指毛桃不同提取物的补益作用;通过抗疲劳实验、耐常压缺氧实验、耐脑缺血缺氧实验考察对抗应激作用的影响;通过对巨噬细胞吞噬功能、血清溶血素水平和皮肤迟发性过敏实验观察五指毛桃不同提取物对免疫调节功能的影响;通过失血性贫血和环磷酰胺致贫血实验观察对补血作用的影响.结果:五指毛桃水提物和醇提物均可以延长小鼠负重游泳、耐常压缺氧及耐脑缺血缺氧的时间;提高巨噬细胞吞噬功能、血清溶血素水平;增强皮肤迟发型过敏反应;改善贫血小鼠的红细胞和血红蛋白水平,但五指毛桃醇提物各方面补益作用均优于水提物.结论:五指毛桃醇提物具有有较好的补益作用.     

溃结灵对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜I B、IKKβ蛋白表达的作用

目的 :观察溃结灵对溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型结肠黏膜核因子κB抑制蛋白-(I B)及I B激酶β(IKKβ)的蛋白表达作用,对其抗UC作用机制进行探讨。方法:采用三硝基苯磺酸(TNBS)法复制UC大鼠模型并进行溃结灵药物干预。采用Western blot方法检测结肠黏膜I B、IKKβ蛋白相对表达量。结果:模型组I B蛋白相对表达量明显低于正常组(P<0.05),溃结灵高剂量组(18.3g/kg)I B蛋白相对表达量显著高于模型组(P<0.01),中剂量组(9.2g/kg)I B蛋白相对表达量明显高于模型组(P<0.05);模型组IKKβ蛋白相对表达量显著高于正常组(P<0.01),溃结灵高(18.3g/kg)、中(9.2g/kg)两个剂量组IKKβ蛋白相对表达量均明显低于模型组(P<0.05)。结论 :溃结灵对TNBS法UC大鼠模型结肠黏膜I B蛋白表达的上调作用及对IKKβ蛋白表达的抑制作用,可能是其抑制NF-κB的活化,减轻炎症反应的作用机制之一。     

牛大力祛痰、镇咳和平喘作用的实验研究

[目的]观察牛大力的祛疫、镇咳及平喘作用.[方法]通过小鼠气管酚红法、家鸽纤毛运动实验、小鼠浓氨水引咳法、豚鼠枸橼酸引咳法及豚鼠组胺-乙酰胆碱超声雾化法观察牛大力的祛痰镇咳平喘作用.[结果]牛大力能显著增加小鼠气管酚红排泌量,促进家鸽气管内墨汁运动,减少氨水引发小鼠和枸橼酸引发豚鼠咳嗽反应的次数,延长咳嗽潜伏期,对抗组胺-乙酰胆碱引起的豚鼠支气管哮喘(均P＜0.05或P＜0.01).[结论]牛大力具有一定的祛痰、镇咳及平喘作用.