结核分枝杆菌Ag85B与IL-12基因真核共表达质粒的构建及表达

目的 :构建结核分枝杆菌Ag85B和鼠IL 12基因的共表达载体pBud85B IL12。方法 :将结核分枝杆菌Ag85B基因和鼠IL 12基因同时克隆入含多启动子的共表达载体pBudCE4 .1中 ,构建真核共表达质粒pBud85B IL12。以pBud85B IL12转染COS 7细胞 ,通过RT PCR及ELISA方法检测目的基因的表达。结果 :在COS 7细胞中同时可检测到Ag85B和IL12的表达。结论 :pBud85B IL12共表达质粒的成功构建 ,为对其免疫原性、免疫反应性及免疫保护作用的进一步研究奠定了基础     

外伤性无骨折脱位型颈脊髓损伤的13例报告

头颈部遭受外伤后引起颈椎骨折脱位和脊髓损伤临床较常见。经Ｘ线检查未见骨折脱位 ,但有明确的脊髓损伤这类情况并不少见。 1990年以来我院收治这类损伤病人 13例 ,现报告如下 :1　临床资料1 1　一般资料 :本组 13例 ,男 10例 ,女 3例。年龄32 - 72岁 ,平均 4 6 2岁 ,其中 5 0岁以上 8例 ,伤后至入院时间 1小时至 1月不等 ,2 4小时以内就诊者8例。1 2　受伤原因 :平地跌跤 6例 ,车祸 2例 ,头部砸伤1例 ,坠落伤 1例 ,颈后伸活动致伤 1例 ,颈椎推拿伤 1例 ,1例损伤原因不明。有明确颈椎过伸性损伤史 9例 ,屈曲性损伤 1例。1 3　临床表现 :11…     

酒精性股骨细胞凋亡及其p53等基因的表达

目的　探讨细胞凋亡抑癌基因 (p5 3)和细胞凋亡抑制基因 (Bcl 2 )基因在酒精性股骨头缺血性坏死骨细胞凋亡中的作用。方法　家兔 6 0只 ,随机分为 2组。灌胃法建模 ,实验组给予含乙醇 5 0 %的烈性白酒 8ml/ (kg·d) ,对照组给予等量生理盐水 ,1～ 6个月分批处死。原位末端标记法 (TUNEL法 )检测骨细胞凋亡 ,免疫组化检测 p5 3和Bcl 2基因表达。结果　第 2 ,3,6个月 ,实验组出现大量骨细胞凋亡 ,以软骨下区最为明显 ,骨细胞凋亡数明显高于对照组 (P <0 0 1) ;两组间骨细胞Bcl 2基因阳性细胞数、p5 3基因阳性细胞数均有显著性差异 (P <0 0 1) ,实验组骨细胞Bcl 2基因阳性细胞数与细胞凋亡数成明显负相关性 (r=- 0 75 ,P <0 0 1) ,实验组骨细胞 p5 3基因阳性细胞数与细胞凋亡指数呈明显正相关性 (r=0 6 8,P <0 0 1)。结论　酒精性ANFH中骨细胞存在明显凋亡现象 ,且受 p5 3基因上调与Bcl 2基因下调影响 ,p5 3与Bcl 2共同调节骨细胞凋亡。     

结核分枝杆菌DNA疫苗对小鼠结核病免疫治疗作用的实验研究

目的探讨结核分枝杆菌DNA疫苗pcD85B、pcDMPT64以及小鼠白细胞介素12(IL-12)真核表达质粒psIL12对结核分枝杆菌感染的疗效与机制。方法将结核分枝杆菌H37Rv感染的C57BL/J6小鼠100只随机分成生理盐水对照组、pcDNA3.1对照组,psIL12治疗组,pcD85B、pcDMPT64、pcD85B+pcDMPT64、pcD85B+psIL12DNA疫苗治疗组。感染4周后分别给予生理盐水、空质粒、psIL-12及DNA疫苗,第1次治疗后2个月处死小鼠,检测器官荷菌量、脾淋巴细胞特异性γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌水平,并于第1次治疗后2个月、5个月观察小鼠肺、脾组织病理改变情况。结果pcD85B治疗组肺组织荷菌量(lg-1CFU/g)为6.99±0.40,比生理盐水对照组(8.15±0.37)、pCDNA3.1对照组(8.19±0.29)显著降低(P<0.01);脾组织荷菌量(lg-1CFU/g,x±s)为5.17±0.33,比生理盐水对照组(5.76±0.16)及空质粒对照组(5.88±0.21)显著降低(P<0.05)。psIL12治疗组的肺(7.41±0.50)、脾(5.31±0.21)荷菌量比对照组显著降低(P<0.05);pcD85B+psIL12治疗组肺、脾荷菌量与pcD85B组比较差别无统计学意义。pcD85B组脾淋巴细胞IFN-γ、TNFα水平比对照组显著升高(P<0.05),各组间IL4水平差异无统计学意义。生理盐水对照组、pCDNA3.1对照组肺组织     

结核分枝杆菌Ag85B-MPT64融合基因的构建表达

目的：构建结核分枝杆菌(H37Rv)Ag85B-MPT64融合基因并在真核细胞中表达．方法：采用序贯PCR(geneSOEing)法将Ag85B和MPT64编码基因用疏水甘氨酸接头(Gly4Ser)3经PCR扩增融合，定向克隆入pcDNA3．1( )中。采用脂质体转染法将pcDNA／Ag85B—MPT64(pcDNA／AM)转染COS-7细胞，用RT-PCR、ELISA和斑点印迹法检测其表达。结果：Ag85B-MPT64融合基因经双向DNA序列测定，碱基突变率为0．11％(2／1707)，突变为无意义突变；重组质粒转染COS-7细胞后经检测证实，该融合基因能在真核细胞中表达。结论：成功地构建了Ag85B-MPT64融合基因并在真核细胞中表达，融合蛋白具有良好的抗原性。     

结核分支杆菌Ag85B-MPT64融合基因疫苗的构建及其在小鼠体内的表达

我们将结核杆菌Ag85B和MPT64编码基因用疏水甘氨酸接头 ,经过基因拼接 (geneSOEing)法融合构建DNA疫苗并研究其免疫原性 ,为进一步研究其融合基因疫苗的免疫保护作用奠定基础。材料与方法　H3 7Rv购自中国医学科学院微生物菌种保藏中心 ,重组Ag85B和MPT64纯化蛋白及多价抗血清由本教研室收藏。纯化蛋白衍生物 (PPD )标准品由成都生物制品研究所提供。BABL/c小鼠购自重庆医科大学实验动物中心。根据H37Rv标准菌株Ag85B和MPT64的编码序列 ,设计引物。P1:5′ AAGCTTATGTTCTCCCGGCCGGG 3′为Ag85B上游引物 ,下划线部分…     

大鼠股骨骨折合并脑外伤时HIF-1α及Cbfα1的血清表达及意义

目的探讨大鼠股骨骨折合并脑外伤时低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及核心结合因子α1(Cbfα1)在血清中的表达及意义。方法选用70只3月龄健康SD大鼠,随机分为假手术组(A组),股骨骨折组(B组),脑外伤组(C组)和骨折合并脑外伤组(D组),分别进行造模。造模术后24 h取C、D组脑组织行苏木素-伊红染色判断脑外伤程度。1 d、3 d、1周、2周、3周、4周、5周通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组HIF-1α及Cbfα1的血清表达。结果 B、C、D组内不同时间段HIF-1α及Cbfα1表达比较,差异有显著性(P0.05);同一时间段B、C、D组表达均明显高于A组,D组高于B、C两组,差异均有显著性(P0.05)。结论 HIF-1α及Cbfα1在大鼠骨折和脑外伤后均有较明显的表达,在骨折合并脑外伤后表达更加突出,这可能是造成脑外伤后加速骨折愈合的重要因素之一。     

重组骨保护素-卡介苗的构建及防治骨质疏松症的研究进展

人骨保护素(osteoprotegerin.OPG)为一种破骨细胞抑制因子,其对破骨细胞的形成、分化和调节骨吸收的具有重要作用,骨保护素的研究在骨质疏松、骨硬化病、类风湿性关节炎、骨肿瘤、心血管疾病等临床疾病的发病机制及治疗方面均取得了较大进展。目前国外已经进行重组骨保护素治疗绝经后骨质疏松的临床试验,未发现明显毒性作用。本文对重组骨保护素-卡介苗的构建及防治骨质疏松症的研究进展发展前景进行了展望。     

寰椎椎动脉沟后结节的观测及其临床意义

椎动脉沟是寰椎椎弓根的重要组成部分,有报道将其形态分为深沟形、浅沟形、全环形、半环形、无沟形等,其中浅沟形和深沟形最为常见[1-2].常见的椎动脉沟后外上方有一骨棘,通过标本观察发现该骨棘位置相对恒定,故将其称之为寰椎椎动脉沟后结节.本研究通过对干骨标本的观测,分析寰椎椎动脉沟后结节与寰椎椎弓根中点的对应解剖关系.     

tPA和VEGF165基因共表达质粒的构建及其在血管平滑肌细胞中的表达

目的 构建携带人组织纤溶酶原激活物(tPA)和血管内皮细胞生长因子165(VEGFl65)基因的真核表达质粒pBudCE4．1／tPA-VEGF165,并观察其在血管平滑肌细胞(VSMC)中的表达。方法从人心脏组织中克隆tPA和VEGF165基因。将tPA和VEGF165基因克隆至真核表达质粒pBudCE4．1中,构建共表达质粒pBudCE4．1／tPA-VEGF165。将pBudCE4．1／tPA-VEGF165转染VSMC,用RT-PCR法检测转染的VSMC中tPA和VEGFl65mRNA的表达,用ELISA法检测转染的VSMC培养液中tPA和VEGF165蛋白质。结果人tPA和VEGF165基因的RT-PCR产物分别为1．9kb和576bp。经酶切鉴定证实,tPA和VEGF165基因已克隆至真核表达质粒pBudCE4．1中。以其转染VSMC后,经RT-PCR和ELISA检测发现,tPA和VEGF165在mRNA和蛋白质水平均有表达。结论成功地构建了真核共表达质粒pBudCE4．1／tPA-VEGF165,并在VSMC中表达tPA和VEGF165。