n-HA/PA66复合生物活性人工椎体支撑植骨治疗胸腰椎爆裂型骨折合并截瘫

目的:探讨用前路椎管减压、自行研制的纳米羟基磷灰石/聚酰胺66(n-HA/PA66)复合生物活性人工椎体支撑植骨治疗胸腰椎爆裂型骨折合并截瘫的临床疗效。方法:2003年12月—2006年1月收治胸腰椎爆裂型骨折合并截瘫40例,年龄17～62岁。受伤部位:T_(12)5例、L_1 16例、L_2 13例、L_3 6例。神经损害按Frankel分级:A级7例、B级19例、C级8例、D级6例。所有病例均行前路椎管减压、n-HA/PA66复合生物活性人工椎体支撑植骨、钛钉板或钉棒系统内固定。结果:所有病例术后均获得6～25个月(平均13个月)的随访。神经功能:除5例Franel A级和2例D级无变化外,其余均有1～2级的改善。其中由A级到B级2例;B级到C级7例,B级到D级12例;C级到D级5例,C级到E级3例;D级到E级4例。36例伤椎接近解剖复位,6例复位良好。术前伤椎前缘高度平均为椎体的42.8%,术后平均为90.5%,重建的椎体高度无丢失。矢状面Cobb角术前平均为28.4°,术后平均为14.6°。n-HA/PA66复合生物活性人工椎体于术后3～6个月骨性融合。无感染、无椎体移位和断钉等并发症。结论:前路n-HA/PA66复合生物活性人工椎体支撑植骨能有效恢复和维持伤椎的结构和高度,可避免取自体髂骨植骨,是一种有效的脊柱前路重建方法。     

新型纳米骨重建和修复材料羟基磷灰石/聚酰胺体内植入的生物相容性及安全性

目的评价新型纳米骨修复和重建材料纳米羟基磷灰石/聚酰胺(n-HA/PA66)植入动物体内后可能引发的急、慢性全身毒性反应及植入机体后对动物机体局部组织的影响,皮内刺激反应的潜在性和程度。方法:参照GB/T16886.5-1997-ISO10993-5:1992对医用植入材料的评价标准和所推荐的生物学和动物试验,将n-HA/PA66埋植在动物体肌肉内,在不同时相点抽血对血液常规、炎性指标、血生化指标及肝、肾功能指标进行检测,以评价急性全身性毒性反应;又在不同时相点取材,行大体标本和病理组织切片观察。以不同浓度的材料浸提液加入动物血样中,用分光光度计测取各自的吸光度并算出相应的溶血率。通过在动物背部皮内注射材料浸提液,在规定时相点观察并计算其刺激指数(PII)。结果:n-HA/PA66在动物体内的急慢性毒性反应为无毒,各期试验组和对照组各项化验结果组间差异无显著性意义(P>0.05),证实材料埋置动物体内后未引起明显的血常规、炎性指标、血生化指标及肝肾功能变化,病理组织切片示材料周围的包裹组织,其炎性变化符合一般的炎症变化转归规律;不同浓度的材料浸提液与血液混溶的溶血率均<3%,低于标准规定的5%;动物背部皮内注射材料浸提液后观察期原发性刺激指数(PII)均在0～0.4区间内,按标准刺激反应判为极轻微。结论:新型骨修     

模拟骨水泥型人工关节阻塞骨髓腔远侧骨干内压力变化及复方丹参的干预

背景：骨水泥阻塞股骨近中段骨干髓腔后严重破坏了骨内和髓内的血液循环状态,可引起了一系列血流动力学变化,导致股骨远端的骨内压持续升高并长期存在。目的：观察骨水泥阻塞兔股骨近中段骨干髓腔后复方丹参对股骨远端骨内压的影响。设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2007-07/2008-04在重庆医科大学实验动物中心完成。材料：选用成年新西兰大白兔42只,采取兔左侧股骨髓腔内灌注聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥的方法,制作骨水泥阻塞股骨近中段骨干髓腔的动物模型。方法：按随机数字表法选出6只作为造模后即刻组。其余36只兔随机分为2组,复方丹参注射组及生理盐水注射组各18只,再根据不同观察时点分为造模后4,8,16周组,每时点6只。复方丹参注射组造模后每只兔肌肉注射复方丹参注射液2mL/d,共4周;生理盐水注射组造模后每只兔肌肉注射氯化钠生理盐水注射液2mL/d,共4周。主要观察指标：测量两组兔造模后即刻、4,8,16周实验侧骨内压。结果：造模后4,8,16周生理盐水注射组兔实验侧骨内压显著高于复方丹参注射组（P〈0.05）。生理盐水注射组兔实验侧各时点骨内压均处于骨内高压状态,造模后16周骨内压有所下降。造模后4周实验侧骨内压显著高于造模后16周（P〈0.05）,其他各时点两两比较差异无显著性意义（P〉0.05）。复方丹参注射组兔实验侧骨内压在造模后4周基本恢复正常骨内压水平,造模后8,16周继续保持正常骨内压水平不变。造模后4,8,16周实验侧骨内压均显著低于造模后即刻（P〈0.05）,造模后4,8,16周3个时点两两比较差异无显著性意义（P〉0.05）。结论：复方丹参可以有效降低骨水泥阻塞骨干髓腔后引起的骨内高压。     

单开门椎管扩大成形术对颈椎管狭窄症患者颈椎功能的重建作用

背景：各种原因所致的颈椎管狭窄症，主要治疗方法采取后路椎板切除术，但术后效果并不十分理想。目的：观察单开门椎管扩大成形术治疗各种颈椎管狭窄症患者的术后功能改善情况：设计：自身前后对照观察。单位：重庆医科大学附属第一医院骨科。对象：选择1995—05／2004—05重庆医科夫学附属第一医院骨科收治的多节段颈椎管狭窄症患者32例，男22例，女10例。脊髓型颈椎病致椎管退变性狭窄12例，发育性椎管狭窄症18例，后纵韧带骨化症2例。方法：对32例颈椎管狭窄症患者采用单开门椎管扩大成形术治疗，获患者知情同意，术后随访半年。术前、术后2周及3个月脊髓功能采用日本骨科学会17分法评定（上肢和下肢功能分别为0-4分；上肢、下肢和躯干感觉分别为0-2分；膀胱功能分为0-3分。各项0分为严重障碍，最高分为正常）。术后2周，3个月及半年颈椎弧度、脊柱稳定性及并发症的观察采用X射线片观察。主要观察指标：①患者手术前后脊髓功能。②术后颈椎弧度、脊柱稳定性及并发症。结果：按意向处理分析，32例患者均进入结果分析。①患者手术前后脊髓功能评估：以日本骨科学会评估标准，12例脊髓型颈椎病致椎管退变性狭窄患者、18例发育性椎管狭窄症患者及2例后纵韧带骨化症患者，术后2周及3个月评分均显著高于术前（术前分别为5．2，5．7，5．5分；术后2周分别为9．2，9．7，9．4分；术后3个月分别为11．3，11．8，11．6分）。②术后颈椎弧度、脊柱稳定性及并发症变化：3例显示颈椎前屈弧度消失颈椎变直．但未见再关门及脊柱不稳现象；余29例未出现颈椎曲度异常及脊柱不稳现象。结论：应用单开门椎管扩大成形术治疗各种原因所致的颈椎管狭窄症患者，术后短期及3个月时，仍能改善和提高患者脊髓功能评分，对颈椎的稳定性不产生影响。     

从骨科医师角度看超声在骨科的应用

作为影像诊断学的一个重要组成部份,超声已在骨科临床应用近20余年.由于该方法无辐射损害、重复性强,对体液、软组织及软骨的显示有明显的特异性和准确性、故在骨科诊断学中占有不可忽视的重要地位.又因超声对骨科的研究起步较晚,且因骨结构的特点限制超声使用范围,故尚有许多课题得进一步研究.一、进行骨科超声检查的基本要求.1、熟悉检查局部的超声解剖这点虽然是一个普通常识,但往往不易做到.声像图的基础是断层解剖结构,四肢和脊柱的断层解剖极为复杂,而不同方向切面结构又大相径庭,即使是一位解剖学家也难以全面、准确地辩别.仅掌握脊柱、四肢及关节的横、纵两个标准切面的超声解剖,也需要付出很大的努力.2.了解临床拟诊疾病的基本病理变化组织或器官的病理变化是合理解释声像图上     

骨水泥阻塞兔骨干髓腔后远侧关节的改变

背景:临床上对骨水泥型人工关节并发症的研究已经很多,但骨水泥型人工关节植入后对远侧关节组织结构的影响仍有待进一步观察。目的:观察骨水泥阻塞兔股骨近中段骨干髓腔后远侧关节组织结构的改变。设计:对照观察。单位:广西壮族自治区人民医院。材料:选用26只健康成年新西兰大白兔,雌雄不拘,体质量2.6～3.5kg,实验动物由重庆医科大学实验动物中心提供。国产聚甲基丙烯酸甲酯TJ骨水泥、16#上颌窦穿刺针(外径1.6mm,内径1.05mm,长80mm)、日本Olympus公司光学显微镜(BH-2型,LM)、日本Hitachi公司透射电子显微镜(H-600,SEM)。方法:实验于2005-07/2006-04在重庆医科大学实验动物中心完成。随机摸球法取18只实验兔为模型组,其余8只不造模,作为对照组。模型组采用兔左侧股骨髓腔内灌注骨水泥进行造模,实验兔麻醉后,采用髋后外方入路,根据兔存在第3转子这个特殊的解剖结构,从股骨后外方肌间隙进入,在第3转子上方仅切除大转子外侧部分而不打断股骨颈,暴露转子间窝,找到骨髓腔入口,用自制的大小合适、粗细不同的髓腔锉反复扩髓后(深度为股骨长度的1/2),反复冲洗创面,冲出破坏的骨髓组织,纱布条蘸干。按粉、液比2∶1比例调配骨水泥,持续手工搅拌,待聚合至面团状态后使用,为避免骨水泥填入股骨骨髓腔后深度无法控制,首先将一小块面团状骨水泥作成髓腔大小塞状物,用器械轻轻填入髓腔内至股骨中段狭窄处,作为髓腔塞,待10min骨水泥基本固化后,再将其重新调配好呈面团状骨水泥,用器械填入股骨髓腔内,直至填满为止。待骨水泥完全固化后,缝合关闭切口,分别于术后4,8及16周取材观察,每次取6只,对照组直接取材,采用苏木精-伊红染色、甲苯胺蓝染色、免疫组织化学检测对两组实验兔实验侧远侧关节软骨、软骨下骨和滑膜组织标本进行组织学观察,同时采用透射电镜观察左侧股骨远端关节软骨、软骨下骨标本组织学变化。主要观察指标:①苏木精-伊红染色、甲苯胺蓝染色、免疫组织化学检测实验兔实验侧远侧关节软骨、软骨下骨和滑膜组织学观察结果。②透射电镜下左侧股骨远端关节软骨、软骨下骨标本组织学变化。结果:①苏木精-伊红染色显示模型组实验兔关节软骨、软骨下骨和关节滑膜组织损害随时间呈进行性加重,造模后16周关节软骨破坏,骨组织结构损害,滑膜组织增生、肿胀;甲苯胺蓝染色显示造模后16周实验兔关节软骨全层失染;免疫组织化学结果:造模后16周软骨细胞Ⅱ型胶原染色阳性,关节滑膜细胞及软骨细胞TGF-β1染色阳性。②透射电镜下模型组实验兔关节软骨和骨细胞损害随时间呈进行性加重,造模16周部分软骨细胞和骨细胞坏死、崩解。结论:骨水泥阻塞股骨近中段骨干髓腔后导致股骨远端血循环障碍,使股骨远端骨代谢发生紊乱,最终造成远侧关节骨、软骨和滑膜组织发生了退行性病变或坏死。     

骨坏死模型中脂类代谢异常对骨修复重建的影响

目的：探讨激素性骨坏死的发病机制及脂类代谢异常对骨修复重建的影响。方法：实验于2003-06／12在重庆医科大学实验动物中心完成。通过对新西兰大白兔联合应用马血清加地塞米松磷酸钠诱导骨坏死模型，对实验组、对照组实验兔股骨头进行组织学苏木精一伊红(HE)染色、MRI观察，并对兔的血脂、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)进行检测，分析比较。结果：实验组出现了典型的股骨头缺血坏死改变，第1周即出现了胆固醇和三酰甘油明显升高，分别为(3．04&;#177;0．09)，(2．43&;#177;0．19)mmol／L，实验前后比较差异有显著性意义(t=29．13和27．71，P＜0．001)。AST,ALT实验第1周开始出现升高，分别为(72．3&;#177;7．5)，(97．6&;#177;8．2)U／L，与实验前比较，差异有显著性意义(t=14．55和17．72，P＜0．001)，第5周与实验前差异仍有显著性意义(t=11．55和15．36．P＜0．001)。结论：血管炎、血脂代谢异常和肝功能损害共同导致股骨头缺血坏死发生，影响骨组织修复重建。     

纳米羟基磷灰石／聚酰胺骨水泥增强骨质疏松松质骨性能的生物力学分析

目的：评价新型注射型纳米羟基磷灰石／聚酰胺66复合骨水泥体外增强骨质疏松性松质骨的生物力学性能，从而选择适合临床使用的骨水泥。方法：实验于2001-01／2003-01在重庆医科大学、四川大学纳米生物材料研究中心和四川大学生物治疗国家重点实验室完成。选取5具老年和1具青年的T1-T6脊柱和双侧股骨髁标本，经X线摄片未见明显病理性缺损和破坏。椎体压缩实验：将脊柱标本去除椎间盘和椎体后方成分后仅保留椎体34个。①老年椎体28个，随机分为4组：纳米羟基磷灰石／聚酰胺66含量60％的复合骨水泥组（HP1组）、纳米羟基磷灰石／聚酰胺66含量70％的复合骨水泥组（HP2组）、纳米羟基磷灰石／聚酰胺66含量80％的复合骨水泥组（HP3组）、骨质疏松组，7个标本／组；青年椎体6个，作为正常对照组。②HP1，HP2，HP3组分别注射含量为60％，70％和80％的纳米羟基磷灰石／聚酰胺66复合骨水泥5mL，骨质疏松组和正常对照组仅作穿刺。③测定每个标本的载荷-位移数据和压力-位移曲线，采样频率为10Hz。股骨髁松质骨扭转实验：用于实验的股骨髁10个。①老年股骨髁8个，随机分为4组：HP1，HP2，HP3组及骨质疏松组。2个／组；青年股骨髁2个，作为正常对照组。②HP1，HP2，HP3组分别注射含量为60％，70％和80％的纳米羟基磷灰石／聚酰胺66复合骨水泥20mL，骨质疏松组和正常对照组仅作穿刺。然后将各组股骨髁的松质骨制成10mm&;#215;10mm&;#215;30mm的松质骨条标本，5个／每组。测定各组的抗扭强度和抗扭刚度。结果：椎体压缩实验中保留34个椎体，股骨髁松质骨扭转实验中选用10个股骨髁，全部进入结果分析。椎体压缩实验：①各组屈服强度和最大抗压强度的测定：与骨质疏松组比较，HP1，HP2，HP3组均明显提高，HP1，HP2组尤为显著（P均〈0．05）；但HP1，HP2，HP3组仍均显著低于正常对照组（P〈0．05）。②各组抗压刚度的测定：与骨质疏松组比较，HP1，HP2，HP3组均明显提高，HP1，HP2组尤为显著（P〈0．05）；但HP1，HP2，HP3组仍均低于正常对照组，且HP3组差异显著（P〈0．05）。股骨髁松质骨扭转实验：①各组抗扭强度的测定：与骨质疏松组比较，HP1，HP2，HP3组的抗扭强度均明显提高，HP1，HP2组尤为显著（Pd〈 0．05）；但HP1，HP2，HP3组的抗扭强度仍均低于正常对照组，HP2，HP3组尤为显著（P〈0．05）。②各组抗扭刚度的测定：与骨质疏松组比较，HP1，HP2，HP3组的抗扭刚度均明显提高，HP1，HP2组尤为显著（P〈0．05）；但HP1，HP2，HP3组的抗扭刚度仍均低于正常对照组，HP3组尤为显著（P〈0．05）。结论：注射型纳米羟基磷灰石与聚酰胺66复合骨水泥材料能够增强骨质疏松松质骨的抗压和抗扭性能，治疗骨质疏松骨折，预防椎体骨折的发生。另外，纳米羟基磷灰石／聚酰胺66含量为60％和70％的复合骨水泥有较好的抗压和抗扭性能，更符合临床应用的需求。     

以红色及绿色荧光蛋白为标记基因的血管内皮生长因子165和骨形态发生蛋白2真核表达载体的构建及其在293-T细胞中的共表达

背景:血管内皮生长因子和骨形态发生蛋白具有协同促进血管生成的作用。目的:构建在真核细胞中表达人血管内皮生长因子165的红色荧光蛋白表达载体和携带人骨形态发生蛋白2的绿色荧光蛋白表达载体,共转染真核细胞以研究血管内皮生长因子165和骨形态发生蛋白2在293-T细胞内的表达和定位。设计:随机对照实验。单位:解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所国家重点实验室。材料:实验于2002-09/2004-03在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所国家重点实验室完成。pCDNA3.1( )/骨形态发生蛋白2由美国UCLA大学Dr.Bostrom惠赠;pDsRed1-N1由ProfessorRogerY.Tsien,UniversityofCalifornia,SanDiego,USA惠赠。pUC18/血管内皮细胞生长因子165,293-Tcells由本实验室保存。方法:根据已知的人血管内皮生长因子165序列,设计在目的片段两端分别携带酶切位点的两条引物,用聚合酶链反应从质粒pUC18/血管内皮生长因子165中扩增出去除终止密码子的人血管内皮生长因子165片段,定向克隆至含报告基因的质粒pDsRed1-N1中,构建重组质粒pDsVEGF165Red1-N1;同时,构建pIRES2-骨形态发生蛋白2-加强型绿色荧光蛋白表达载体。以DOTAP为介导,将重组质粒共转染293-T细胞,48h后用激光共聚焦显微镜检测报告基因红色荧光蛋白和加强型绿色荧光蛋白的表达,使用反转录聚合酶链反应及免疫印迹方法检测血管内皮生长因子165和骨形态发生蛋白2在细胞内表达。主要观察指标:质粒的酶切鉴定及重组质粒在293-T细胞中mRNA及蛋白水平的表达。结果:重组质粒经酶切、聚合酶链反应和DNA序列测定证明构建正确,目的基因在293-T细胞中在mRNA及蛋白水平获得表达。激光共聚焦显微镜观察到红色荧光蛋白和加强型绿色荧光蛋白在细胞内共定位的情况。结论:成功构建pDsVEGF165Red1-N1和pIRES2-骨形态发生蛋白2-加强型绿色荧光蛋白2种含报告基因的真核表达载体,两者共转染后能在真核细胞中表达,为研究血管内皮生长因子165和骨形态发生蛋白2在细胞内的相互作用提供了一个重要而方便的工具。