全反式维甲酸对糖尿病大鼠肾脏nephrin和COX-2表达的影响

目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)对糖尿病大鼠肾脏nephrin、环氧化酶-2(COX-2)表达的影响.方法 链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠模型,将其随机分为模型组(D组)和全反式维甲酸干预组(A组),并以正常组(N纽)作对照.干预8周后.观察各组大鼠尿蛋白、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)及肾脏病理变化;用免疫组化及实时荧光定量PCR检测肾脏nephrin、COX-2蛋白及mRNA的表达.结果 用A-TRA干预后,可以明显减轻糖尿病大鼠肾脏病理损害,大鼠尿蛋白、BUN、Scr下降,免疫组化分析及实时荧光定量PCR显示nephrin表达升高、COX-2表达降低.结论 全反式维甲酸可以减轻肾脏病理损害,减少蛋白尿,其机制可能通过上调nephrin表达、下调COX-2表达来发挥肾保护作用.     

PLK1基因siRNA的构建及对甲状腺未分化癌细胞增殖和凋亡的影响

目的构建保罗样激酶-1（PLK1）基因小干扰RNA（siRNA）,并观察其对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法设计合成5个PLK1siRNA（S1、S2、S3、S4、S5）,转染人甲状腺癌ARO细胞后,采用实时定量RT—PCR方法筛选下凋PLK1mRNA效果最好的siRNA;然后以该siRNA转染ARO细胞后,分别以实时定量RT—PCR和Western blot检测各组细胞PLK1基因表达情况;以MTT法检测对各组细胞增殖的影响;分别以caspase-3活性和TUNEL方法明确甲状腺癌细胞凋亡情况。结果5个siRNA均明显下调PLK1mRNA水平,以S4效果最好,抑制率达91．5％。MTT结果显示,S4siRNA转染对甲状腺癌细胞增殖均有明显的抑制作用,且呈浓度和时间依赖性（P〈0．05）。与对照组比较,S4siRNA转染组癌细胞caspase-3活性明显升高,且呈浓度和时间依赖性（r=0．919;r=0．957）;TUNEL结果显示,S4 siRNA转染组出现明显的凋亡现象,且呈浓度依赖性（r=0．932）。结论PLK1基因在甲状腺未分化癌细胞增殖中具有重要的调控作用。PLK1 siRNA转染可明显抑制癌细胞增殖,诱导凋亡是其重要机制之一。     

Graves病患者外周血单个核细胞GITR mRNA表达水平的变化和意义

目的探讨Graves病(GD)患者糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)mRNA表达水平的变化及意义。方法用实时荧光定量PCR法检测22例GD未治疗组、23例GD临床缓解组及18例健康对照组外周血单个核细胞(PBMC)GITR mR-NA相对表达水平;用化学发光法测定各组血浆中甲状腺激素水平,并评价GD未治疗组GITR mRNA相对表达水平与甲状腺激素水平的相关性。结果GD未治疗组GITR mRNA相对表达水平明显低于临床缓解组和健康对照组(χ2=18.48,P<0.01;χ2=18.26,P<0.01),而GD临床缓解组与健康对照组差异无统计学意义(χ2=0.12,P>0.05)。GD未治疗组GITRmRNA相对表达水平与FT3、FT4水平均呈负相关(r=-0.509、r=-0.483,P均<0.05),而与TSH呈正相关(r=0.458,P<0.05)。结论GD的发生可能与GD患者体内GITR基因表达下调有关。     

MicroRNAs 在糖尿病肾病中的研究进展

糖尿病肾病（DN）是引起终末期肾病的最主要原因之一，其发病机制未完全明确，临床患者预后欠佳。 微RNAs（microRNAs, miRNAs）是近年来新发现的非编码单链RNA 分子，许多miRNAs 被证实在DN 中表达 异常且与DN 的发病相关。该文根据参与发病的机制的不同将近年来新发现的与DN 相关的miRNAs 作一综 述。     

人RORγtm RNA实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

目的: 建立检测人RORγt(retinoid-related orphan receptor gammat) mRNA的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR, qRT-PCR)方法.方法: 根据人RORγt mRNA的保守序列设计特异性引物,提取经PMA和离子霉素刺激的人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)总RNA,并逆转录成cDNA,与pMD-18T载体连接构建质粒标准品.采用qRT-PCR方法检测RORγt mRNA水平,并评价该方法的线性、特异性及重复性.应用该方法检测Graves病(Graves′ disease, GD)患者外周血中RORγt mRNA的相对表达.结果:该方法标准曲线的相关系数为0.998,融解曲线分析显示单个峰,pMD18T-RORγt质粒标准品高、低拷贝数的批内、批间变异系数分别为6.5%,8.4%和9.6%,11.2%.初步研究表明GD患者组RORγt mRNA的相对表达水平明显高于健康对照组(t=-3.72, P<0.01).结论: 建立的检测人RORγt mRNA的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法灵敏、特异且重复性好,为临床应用提供了实验基础.     

铜绿假单胞菌外膜蛋白OprF基因的克隆与原核表达

[目的]克隆铜绿假单胞菌OprF基因,并进行原核表达,以期进一步开展铜绿假单胞菌基因工程疫苗的研究. [方法]利用PCR技术从铜绿假单胞菌基因组中扩增出OprF基因.采用T-A克隆构建pMD18-T-OprF重组质粒,测序正确后经BamH Ⅰ、Hind Ⅲ双酶切获得OprF片段,插入到表达载体pET32a,获得pET32a-OprF重组表达质粒并在表达宿主菌E.Coli BL21中诱导表达,利用Ni-NTA柱对目的蛋白进行纯化,通过SDS-PAGE电泳和蛋白质印迹进行鉴定. [结果]克隆OprF基因(459 bp)并经DNA测序证实,表达重组蛋白OprF并获得纯化蛋白,经SDS-PAGE电泳和蛋白质印迹鉴定正确.[结论]成功克隆了OprF基因并获得原核表达物,为铜绿假单胞菌的致病性研究和开展基因工程疫苗的研制奠定了基础.     

2型糖尿病三种胰岛素治疗方法的比较

目的 观察三种胰岛素治疗方法对新发2型糖尿病病人的胰岛β 细胞功能和血糖控制的影响。方法将94例新诊断2型糖尿病人随机分为三组，进行诺和灵R胰岛素泵持续皮下输注治疗（A组，CSⅡ组）、诺和灵R联合诺和灵N（低精蛋白锌人胰岛素）每天多次皮下注射治疗（B组，MSⅡ组）和诺和灵30R每天2次预混胰岛素注射治疗（c组），比较治疗2周后血糖控制水平、胰岛素的分泌、日均胰岛素用量、低血糖发生率及日均费用。探讨3种不同胰岛素治疗方法对2型糖尿病的降糖作用。结果A、B两组患者治疗2周后血糖控制水平、胰岛素的分泌、血糖达到良好控制的时间，日均胰岛素用量，低血糖的发生均优于C组（P〈0．01）。A、B两组血糖控制水平，胰岛素的分泌无差异，而血糖达到良好控制的时间及日均胰岛素用量，A组优于B两组。日均费用B组则明显低于A组。结论 胰岛素泵强化治疗和胰岛素多点注射强化治疗都可以使初诊2型糖尿病患者的胰岛细胞功能和血糖得到同样程度的改善，胰岛素泵具有更加快速、稳定、安全性好的作用，胰岛素多点注射则具有治疗费用相对较低的优点。     

microRNA与自身免疫疾病研究进展

<正>MicroRNA(miRNA)是一类新发现的非编码单链RNA分子,主要作用于转录后基因水平。其与靶基因结合,导致mRNA完全或部分降解,借以调控基因的表达。在过去二十年里,miRNA已作为关键调节分子调控机体细胞的增殖、分化、代谢、凋亡等一系列生物学活动[1]。miRNA在免疫系统稳态的维持和自身免疫性疾病的发病方面都发挥重要作用,本文就近年来二者关系的研究进展作一综述。     

概述长链非编码RNA的T细胞调控功能及其在自身免疫性甲状腺疾病中的作用

自身免疫性甲状腺疾病(autoimmune thyroid disease,AITD)的典型代表有桥本甲状腺炎(Hashimoto's thyroiditis,HT)及格雷夫斯病(Graves disease,GD)等,是临床常见的自身免疫性疾病,其发病机制未明,患者预后欠佳。长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)是近年来新发现的长度大于200 nt的非编码单链RNA分子,可参与细胞分化、增殖、染色体修饰等多种生物学过程,近年来许多研究证实lncRNA与AITD及免疫细胞存在相关性。文章就近年来lncRNA与AITD发生发展的关系作一综述。     

microRNA在多发性硬化症中的研究进展

多发性硬化症(MS)是一种累及中枢神经系统的自身免疫性疾病,发病机制复杂,免疫系统的失调在MS的发病过程中起着重要作用。小RNA(miRNA)是一类短序列、非编码小分子单链RNA,主要通过转录翻译抑制参与基因表达调控,miRNA作为核内关键调控分子参与多种机体细胞的增殖、分化、凋亡等生物学行为。近来研究发现miRNA参与MS的发病过程,主要作用于MS患者的中枢神经细胞和免疫细胞。miRNA有望成为一个新的生物诊断和治疗靶点,现就miRNA生物学特性及在MS中研究进展进行综述。