突变型人白细胞介素-2基因在大肠杆菌中的表达

目的：建立突变型人白细胞介素-2（rhIL-2）基因大肠杆菌表达系统，为rhlL-2的生产及临床应用奠定基础。方法：自人胎盘组织中提取总RNA，逆转录PCR（RT-PCR）扩增突变型人IL-2基因cDNA，通过对下游引物的设计将编码125位半胱氨酸（c125）的密码子TGT更改为编码丝氨酸的密码子TCT。构建表达型重组质粒pBV-IL-2，温度诱导表达．表达产物行SDS一聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE）及WesternBlot鉴定。结果：DNA序列分析证实，重组质粒pBV-IL-2含有突变型人IL-2编码序列及正确的开放读码框架。SDS-PAGE显示，诱导表达碎菌后的沉淀中有分子质量大小约为16．5ku的外源蛋白产生。经Western印迹（WesternBlot）证明为rhlL-2。结论：成功构建了突变型人白细胞介素-2大肠杆菌表达系统。表达产物主要以包涵体的形式存在于碎菌后的沉淀中。     

TNF-a与2型糖尿病胰岛素抵抗的关系

目的:探讨血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平以及TNF-α基因多态性与2型糖尿病胰岛素抵抗的关系。方法:选取2型糖尿病肥胖患者50例,非肥胖患者50例,健康对照50例,应用酶联免疫法检测血清中TNF-α水平,并应用PCR-RFLP方法检测TNF-α-308启动子区基因多态性,所有数据以SPSS 10.0软件进行分析。结果:糖尿病肥胖组血清TNF-α水平较非肥胖组及对照组明显增高,在糖尿病组中TNF-α-308A等位基因携带者体质指数(BMI)及胰岛素抵抗均高于TNF-α-308G等位基因携带者。结论:TNF-α与BMI和胰岛素抵抗明显相关。携带TNF-α-308A等位基因者更易于发生胰岛素抵抗。     

甲状旁腺素羧基端肽段的表达及其对大鼠成骨细胞增殖的影响

目的：探讨 rhPTH1～84、rhPTH37～84及 hPTH1～34对大鼠成骨细胞增殖的影响。方法分子生物学方法克隆表达 hPTH1～84、hPTH37～84重组蛋白。体外培养的大鼠成骨细胞给予不同浓度的 PTH 作用后,采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖。结果获得了浓度约为261．82 mg／L 的 rhPTH1～84和浓度为165．45 mg／L 的rhPTH37～84。10－10～10－7 mol／L 范围的 rhPTH1～84和 hPTH1～34促进大鼠成骨细胞的增殖;rhPTH37～84则抑制大鼠成骨细胞增殖。结论成功获得了高浓度高纯度的 rhPTH1～84及 rhPTH37～84。rhPTH37～84抑制细胞增殖,为进一步研究甲状旁腺激素及其羧基端肽段的功能奠定了基础。     

不同碘营养状态对大鼠肝组织Ⅰ型5′脱碘酶的影响

目的研究不同碘营养状态对大鼠肝组织甲腺氨酸Ⅰ型5′脱碘酶（DI）表达水平及活性的影响。方法正常1月龄Wistar大鼠根据碘摄入量不同分为6组，饲养3个月后处死。放免法测定血清甲状腺激素水平。提取肝组织总RNA，以β—actin为内对照，半定量RT-PCR分析DI基因的表达水平。Chopra氏方法测定肝组织匀浆液中DI的脱碘活性。结果LI组TT4和FT4显著低于其他5组（P〈0．05），100HI组TT3和FT3显著低于其他5组（P〈0．05），100HI组TT4和FT4显著低于NI、5HI、10HI和50HI组（P〈0．05）。大鼠肝组织DI基因mRNA表达量6组间差异有统计学意义（P〈0．01），LI组显著高于其他5组（P〈0．05），不同剂量HI组和NI组相比差异均无统计学意义（P〉0．05）。大鼠肝组织DI活性6组间差异有统计学意义（P〈0．01），LI组显著高于其他5组（P〈0．05），50HI组和100HI组显著低于其他4个组（P〈0．05）。结论在碘缺乏状态下。大鼠出现以低T4为主要表现的甲状腺功能减退（甲减），DI活性和DI基因表达水平代偿性上调，使机体维持足够的T3水平，以避免周围组织出现器官性甲减。高碘仅在转录后水平影响DI，表现为直接抑制DI的活性。使血清TT3和FT3下降，机体出现失代偿性周围组织器官性甲减。DI对碘过量有一定的耐受能力，这种耐受性有一定的阈值。     

内皮细胞在不同间歇缺氧方式时核因子κB和细胞间黏附分子1的变化

目的测定人脐静脉内皮细胞可传代细胞株ECV304在不同间歇缺氧（IH）程度、频率、时段和恢复时段下核因子κB（NF-κB）和细胞间黏附分子1（ICAM-1）的变化。方法在自制细胞培养舱中程控产生预置的IH／ROX（再氧合）暴露环境，将ECV304细胞暴露于该环境共60次循环。暴露时按IH／ROX时段将细胞分为11组，每组样本数为12。A组：采用21％O215s／21％O2 3分钟45秒（即间歇正常氧）方案；B组：置于标准孵箱中不加暴露（标准孵育）；C组：采用1．5％O2 15s／21％O2 3分钟45秒方案；D组：采用10％O2 15s／21％O2 3分钟45秒方案；以下固定IH方案为1．5％O2 15s和ROX程度21％O2不变，IH／ROX循环频率分别为12S／h（C组）、9S／h（E组）、6S／h（F组）、20S／h（G组）和40S／h（H组）；I组：采用1．5％O2 30s／21％O23分钟45秒方案；C组完成暴露后放回标准孵箱中60min为J组，120min为K组。分别采用酶联免疫吸附（ELISA）法和细胞表面ELISA法测定细胞裂解液中总NF-κB水平和细胞表面ICAM-1浓度，并测定总蛋白含量。结果C组NF-κB和ICAM-1水平分别为（0．82±0．28）、（1562±56）pg／ml，A组分别为（0．37±0.07）、（768±80）pg／ml，两组比较差异有统计学意义（D值分别为225．00、176．04，P分别〈0．01、〈0．05）；D组分别为（0．66±0．22）、（1113±76）pg／ml，与C组比较差异有统计学意义（U值分别为25．00、0．00，P均〈0.01）；I组分别为（0．45±0.16）、（1155±19）pg／ml，与C组比较差异有统计学意义（U值分别为27．00、0．00，P均〈0.01）；同时C组的NF-κB和ICAM-1水平在C、E、F、G和H这5个不同IH频率组的比较亦是相对最高的（X^2分别为35．63、56．89，P均〈0.01）；J组NF-κB水平[（0．6233±0.0534）]与C组比较差异无统计学意义（D=36．00，P〉0．05），而K组NF-κB水平[（0．3050±0．0013）]与C组比较差异有统计学意义（D=234．00，P〈0．01）。结论IH／ROX可对内皮细胞造成程度依赖的炎性损伤且不易恢复，中度频率的IH／ROX将选择性激活细胞炎性通道。而过高频率和过长时段的IH反而激活细胞适应性通道。     

IL-6与肥胖和胰岛素抵抗的关系

目的：探讨血清IL-6水平以及IL-6基因多态性与肥胖和胰岛素抵抗（IR）的关系。方法：选取肥胖2型糖尿病患者55例（肥胖组），非肥胖2型糖尿病患者49例（非肥胖组），健康对照50例（对照组），应用酶联免疫法检测血清中IL-6水平，并应用PCR-RFLP方法检测IL-6-174启动子区基因多态性。结果：肥胖组血清IL-6水平较非肥胖组及对照组明显增高．在糖尿病组中IL-6-174G等位基因携带者体质量指数（BMI）及IR均高于IL-6-174C等位基因携带者。结论：IL-6与BMI和IR有关，携带IL-6-174G等位基因者更易于发生IR。     

发育期缺碘大鼠骨发育障碍的病理学观察

目的观察缺碘对大鼠甲状腺功能及骨发育的影响。方法复制两代碘缺乏大鼠动物模型．测定血清中TT3、TT4水平，拍摄X线片，并作股骨远端骨切片观察骨发育情况。结果20日龄缺碘大鼠的体质量明显低于对照组，甲状腺相对质量明显高于对照组；补碘组与正常组无明显差别、碘缺乏大鼠血清TT3水平与对照组相比无明显变化．但TT4。水平显著降低。X线片中可见．碘缺乏大鼠的长骨较同日龄正常大鼠短且细．骨间隙增大，钙化不良。股骨远端骨骺病理切片显示，缺碘大鼠次级骨化中心形成迟缓且小，骨骺生长板中几个软骨细胞区域层次混乱，储备细胞数目减少，增殖区宽度较正常大鼠减少，生后补碘可以部分纠正上述改变。结论发育期碘缺乏会导致大鼠发育迟缓，骨骺软骨发育不良．钙化障碍。生后给碘缺乏大鼠补碘可以改善骨骼发育。     

不同碘营养大鼠血清胰岛素样生长因子I水平的研究

目的研究不同碘营养状态下大鼠血清中胰岛素样生长因子I(IGFl)的浓度及其与甲状腺素水平的相关性。方法复制碘缺乏大鼠动物模型．给予不同的碘营养。分离大鼠血清，以自行建立的双位点夹心ELISA检测IGFl浓度，并同时测定血清甲状腺素的水平。结果与正常大鼠相比较．碘缺乏大鼠血清IGFl浓度明显降低，给予适量的碘补充后可使其恢复至正常水平。并且血清中IGFl浓度与T1的水平密切相关。结论碘缺乏导致骨、脑发育障碍的部分原因可能是因为降低了血清中甲状腺素的水平．因此导致IGFl这一重要发育调节因子的浓度下降所造成的。     

缺碘性甲状腺功能低下大鼠脑中微量元素的研究

目的验证碘缺乏病(IDD)是一种涉及多种微量元素的疾病,探讨缺碘大鼠脑中微量元素的变化.方法复制缺碘致甲状腺功能低下(甲低)大鼠模型,同龄正常大鼠为对照,取不同脑区行冰冻切片,置聚碳酸酯膜上干燥后,用同步辐射X射线荧光分析法,测定各脑区的微量元素.用SPSS软件包数据处理.结果①大鼠模型血中T4和FT4分别为(3.50±0.66)nmol/L和(0.59±0.12)pmol/L,明显低于正常组的相应值(104.68±20.10)nmol/L和(16.86±2.70)pmol/L;②碘的同族元素氯溴在低碘组含量以(counts,c)计与正常者相比在海马分别是78c46c和20c15c;在皮质中含量分别为50c35c和9c7c,均显著升高;上丘脑中则降低.其它元素P、S、K、Ca、Mn、Fe、Cu、Zn、Br和Rb在低碘组海马和皮质中普遍升高,而上丘脑中降低.特别是Zn,低碘鼠中比正常鼠升高1倍或近1倍(海马中为110c56c;皮质中为105c54c),而在上丘脑中则相差不大.这与甲状腺激素受体数目的分布和变化相符,因为低碘鼠海马和皮质中T3受体含量显著升高(见另文).而T3受体恰是细胞核内的含Zn蛋白,故Zn含量受碘营养状况的影响最敏感.但无核红细胞在甲低时其Zn含量也升高,是值得进一步研究的有趣现象.结论缺碘组海马与皮质中所测P、S、Cl、K、Ca、Mn、Fe、Cu、Zn、Br和Rb等元素均有升高,而且上丘脑大部分元素降低.结果表明IDD致甲低会对其它微量元素的代谢产生深刻影响.