甲状旁腺素羧基端肽段的表达及其对大鼠成骨细胞增殖的影响

目的：探讨 rhPTH1～84、rhPTH37～84及 hPTH1～34对大鼠成骨细胞增殖的影响。方法分子生物学方法克隆表达 hPTH1～84、hPTH37～84重组蛋白。体外培养的大鼠成骨细胞给予不同浓度的 PTH 作用后,采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖。结果获得了浓度约为261．82 mg／L 的 rhPTH1～84和浓度为165．45 mg／L 的rhPTH37～84。10－10～10－7 mol／L 范围的 rhPTH1～84和 hPTH1～34促进大鼠成骨细胞的增殖;rhPTH37～84则抑制大鼠成骨细胞增殖。结论成功获得了高浓度高纯度的 rhPTH1～84及 rhPTH37～84。rhPTH37～84抑制细胞增殖,为进一步研究甲状旁腺激素及其羧基端肽段的功能奠定了基础。     

不同碘营养大鼠血清胰岛素样生长因子I水平的研究

目的研究不同碘营养状态下大鼠血清中胰岛素样生长因子I(IGFl)的浓度及其与甲状腺素水平的相关性。方法复制碘缺乏大鼠动物模型．给予不同的碘营养。分离大鼠血清，以自行建立的双位点夹心ELISA检测IGFl浓度，并同时测定血清甲状腺素的水平。结果与正常大鼠相比较．碘缺乏大鼠血清IGFl浓度明显降低，给予适量的碘补充后可使其恢复至正常水平。并且血清中IGFl浓度与T1的水平密切相关。结论碘缺乏导致骨、脑发育障碍的部分原因可能是因为降低了血清中甲状腺素的水平．因此导致IGFl这一重要发育调节因子的浓度下降所造成的。     

内皮细胞在不同间歇缺氧方式时核因子κB和细胞间黏附分子1的变化

目的测定人脐静脉内皮细胞可传代细胞株ECV304在不同间歇缺氧（IH）程度、频率、时段和恢复时段下核因子κB（NF-κB）和细胞间黏附分子1（ICAM-1）的变化。方法在自制细胞培养舱中程控产生预置的IH／ROX（再氧合）暴露环境，将ECV304细胞暴露于该环境共60次循环。暴露时按IH／ROX时段将细胞分为11组，每组样本数为12。A组：采用21％O215s／21％O2 3分钟45秒（即间歇正常氧）方案；B组：置于标准孵箱中不加暴露（标准孵育）；C组：采用1．5％O2 15s／21％O2 3分钟45秒方案；D组：采用10％O2 15s／21％O2 3分钟45秒方案；以下固定IH方案为1．5％O2 15s和ROX程度21％O2不变，IH／ROX循环频率分别为12S／h（C组）、9S／h（E组）、6S／h（F组）、20S／h（G组）和40S／h（H组）；I组：采用1．5％O2 30s／21％O23分钟45秒方案；C组完成暴露后放回标准孵箱中60min为J组，120min为K组。分别采用酶联免疫吸附（ELISA）法和细胞表面ELISA法测定细胞裂解液中总NF-κB水平和细胞表面ICAM-1浓度，并测定总蛋白含量。结果C组NF-κB和ICAM-1水平分别为（0．82±0．28）、（1562±56）pg／ml，A组分别为（0．37±0.07）、（768±80）pg／ml，两组比较差异有统计学意义（D值分别为225．00、176．04，P分别〈0．01、〈0．05）；D组分别为（0．66±0．22）、（1113±76）pg／ml，与C组比较差异有统计学意义（U值分别为25．00、0．00，P均〈0.01）；I组分别为（0．45±0.16）、（1155±19）pg／ml，与C组比较差异有统计学意义（U值分别为27．00、0．00，P均〈0.01）；同时C组的NF-κB和ICAM-1水平在C、E、F、G和H这5个不同IH频率组的比较亦是相对最高的（X^2分别为35．63、56．89，P均〈0.01）；J组NF-κB水平[（0．6233±0.0534）]与C组比较差异无统计学意义（D=36．00，P〉0．05），而K组NF-κB水平[（0．3050±0．0013）]与C组比较差异有统计学意义（D=234．00，P〈0．01）。结论IH／ROX可对内皮细胞造成程度依赖的炎性损伤且不易恢复，中度频率的IH／ROX将选择性激活细胞炎性通道。而过高频率和过长时段的IH反而激活细胞适应性通道。     

IGF-Ⅰ对破骨细胞骨吸收的促进作用依赖于成骨细胞的协同

目的 探讨胰岛素样生长因子Ⅰ (IGF-Ⅰ)对破骨细胞骨吸收的促进作用是否需要成骨细胞的协同.方法 体外培养MC3T3小鼠成骨细胞及NF-κB受体的配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)诱导分化成熟的破骨细胞,分别给予重组人胰岛素样生长因子Ⅰ(rhIGF-Ⅰ)进行干预,Western印迹检测IGF-Ⅰ受体的活化情况.以0、10 ng/ml的rhIGF-Ⅰ直接干预破骨细胞或与成骨细胞在Transwell双层培养板中共培养的破骨细胞,MTT法测定破骨细胞增殖;流式细胞仪检测破骨细胞凋亡率;实时PCR检测组织蛋白酶K基因的表达.将不同方式干预的破骨细胞接种在骨磨片上,光镜观察骨吸收陷窝的形成.结果 在成骨细胞、破骨细胞表面均检测到可被IGF-Ⅰ激活的IGF-Ⅰ受体.仅在成骨细胞、破骨细胞共培养时rhIGF-Ⅰ能够促进破骨细胞活细胞的增殖(P＜0.05);抑制破骨细胞的凋亡(P＜0.05);上调组织蛋白酶K基因的表达(P＜0.05);增加骨吸收陷窝的数量及面积.IGF-Ⅰ对单独培养的破骨细胞则作用不明显.结论 IGF-Ⅰ对破骨细胞骨吸收的促进作用需要成骨细胞的协同.     

Fa基因多态性与自身免疫性肝病的相关性

自身免疫性肝炎(AIH)和原发性胆汁性肝硬化(PBC)均是由免疫介导的病因不明的慢性肝脏炎症性疾病,表现为严重的肝脏病变,并可以进展为肝硬化Ⅲ.为探寻自身免疫性肝病的遗传易感性,我们分析了自身免疫性肝病患者的Fas基因多态性.     

全反式视磺酸对树突状细胞分化及抗原提呈的抑制作用与NF-κB信号通路相关

目的 研究全反式视磺酸(atRA)对树突状细胞(DC)抗原提呈作用的影响是作用在骨髓细胞向DC的分化过程还是作用在已分化形成的DC,以及NF-κB信号通路是否参与到此调节过程.方法 以MOG35-55免疫C57BL/6J小鼠,给予或不予atRA干预.分离小鼠脾脏DC及CD4细胞进行交互培养,同时给予IL-12或IL-23干预CD4细胞的分化.测定CD4细胞向Th1及Th17细胞的分化情况及相应细胞因子的产生能力.分离小鼠骨髓细胞(BMC),IL-4及GM-CSF诱导其向DC分化,并在不同时间点给予RA干预.比较DC表面分子CD11c、MHCⅡ的表达情况及其提呈抗原对效应细胞的激活作用;Western blot检测DC中NF-κB p65的磷酸化及p65向胞核转位的情况.最终比较RA对DC的影响是否可以被选择性RA受体(RAR)拮抗剂所拮抗.结果 RA体内干预显著降低脾脏DC的抗原提呈作用;在体外RA则可抑制BMC向DC分化过程,降低CD11c及MHCⅡ分子在细胞表面的含量,并抑制DC的抗原提呈功能;但是对已分化形成的DC却没有类似效应.RA可显著抑制DC中NF-κB p65的磷酸化及胞核中NF-κB p65的含量,并伴随着DC抗原提呈功能的减弱;其作用可被RARβγ拮抗剂所拮抗.结论 RA可抑制DC的提呈功能,其作用环节可能在于DC的分化过程并与NF-κB信号通路密切相关.     

重组大鼠TSHα亚基在大肠杆菌中表达的实验研究

目的：通过构建重组大鼠TSHα链原核表达系统及表达产物的纯化工作,获得重组GST-—rrTSHα融合蛋白,以备作为免疫原制备抗大鼠TSHα链的抗体。方法：提取大鼠垂体组织总RNA,RT—PCR扩增大鼠TSHa链编码序列,构建pGEX-3X／TSHα融合表达质粒转化人大肠杆菌中进行诱导表达。亲和层析纯化重组蛋白并以SDS—PAGE及Western Blot进行鉴定。结果：DNA序列分析表明重组pGEX-3X／TSHα质粒含有读码框正确的髑H仅链编码序列,纯化产物的SDS—PAGE及Western Blot结果表明所获得的目的蛋白与预期分子量相符且可与抗GST抗体发生免疫识别。结论：成功获得重组GST—rrTSHα融合蛋白,为下一步的抗体制备奠定了基础。     

Chemerin基因在自发性2型糖尿病大鼠脂肪组织中表达的研究

目的：研究网膜及皮下脂肪组织中Chemerin在自发性2型糖尿病OLETF大鼠中的基因表达水平,探讨Chemerin与肥胖、胰岛素抵抗及2型糖尿病发病关系的机制。方法：4周龄正常不出现糖尿病的LETO大鼠10只作为对照组,4周龄OLETF大鼠10只,2型糖尿病的OLETF大鼠9只,于42周时处死。取网膜及皮下脂肪组织,以实时荧光定量法检测网膜及皮下脂肪组织Chemerin基因的表达水平。皓果：模型组的网膜及皮下脂肪组织Chemerin的基因表达明显高于LETO对照组（P〈0．01）;模型组大鼠网膜脂肪组织Chemerin的基因表达明显高于皮下脂肪组织（P〈0．01）。结论：脂肪因子Chemerin基因表达水平的变化是肥胖、胰岛素抵抗和2型糖尿病发病的机制之一。     

OLETF大鼠脂肪组织chemerin及其受体1的基因表达

用实时定量PCR检测OLETF大鼠脂肪组织中chemerin及其受体1 mRNA的表达,结果两者表达水平较对照组明显升高(P<0.05或P<0.01),且网膜脂肪组织高于皮下脂肪组织(P<0.05或P<0.01),说明脂肪因子chemerin及其受体1基因表达的变化可能是肥胖、胰岛素抵抗和2型糖尿病发病的机制之一.     

破骨细胞对IGF-1诱导成骨细胞骨同化的促进作用

目的 探讨破骨细胞(osteoclast, OC)存在时IGF-1对成骨细胞(osteoblast, OB)活性的影响。方法 体外培养MC3T3小鼠成骨细胞及RANKL诱导分化成熟的破骨细胞。以10ng/ mL的rhIGF-1直接干预单独或与破骨细胞共育的成骨细胞, 并设空白对照组,培养12h,检测成骨细胞的增殖、凋亡及碱性磷酸酶活性;培养8d后Von kossa钙化染色法观察矿化结节的形成。结果 成骨细胞、破骨细胞共培养时,rhIGF-1作用12h能够明显促进成骨细胞增殖(P<0.05),抑制成骨细胞的凋亡(P<0.05),使细胞内ALP活性升高(P<0.05),8d时钙化结节的个数及面积百分比升高(P<0.05);与单独培养的成骨细胞组有显著性差异。结论 破骨细胞可明显促进IGF-1所诱导的成骨细胞骨同化作用。