染色质免疫沉淀技术在人巨细胞病毒即刻早期蛋白研究中的应用

染色质免疫沉淀(ChIP)技术是目前研究体内DNA与蛋白质相互作用的最好方法,该技术不仅可以检测体内反式因子与DNA的动态作用,还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系。在研究人巨细胞病毒及其他病毒的基因调控和病毒蛋白与宿主细胞DNA相互作用方面,该技术亦有很好的应用前景。利用该技术研究表明,人巨细胞病毒IE1-72和IE2-86蛋白对组蛋白乙酰化的影响可能是调控病毒转录的重要机制之一。     

人类巨细胞病毒感染对人胚肺细胞HOXB1,HOXB5,HOXB6及HOXB9基因表达的影响

目的 :研究人胚肺 (HEL)细胞HOXB1,HOXB5 ,HOXB6及HOXB9基因的表达状态及人类巨细胞病毒(HCMV)感染对上述基因表达的影响。方法 :采用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术。结果 :①HEL细胞表达HOXB5和HOXB6 ,但不表达HOXB1和HOXB9;②HCMV感染后 ,HEL细胞HOXB6基因的表达上调 ,且被HCMV诱导表达HOXB9T ,而HOXB5基因的表达无明显改变 ,HOXB1基因仍旧不表达 ;③全反式维甲酸 (ATRA)能上调HCMV感染后HOXB9基因的表达 ,但对HCMV感染晚期HOXB6基因的表达有抑制作用。结论 :HCMV能诱导HOXB6和HOXB9基因表达异常 ,这可能在先天性HCMV感染导致胚胎发育畸形中起重要作用     

人类巨细胞病地人胚肺细胞HOX基因表达的影响

应用半定量ＲＴ－ＰＣＲ技术研究人胚肺（ＨＥＬ）细胞ＨＯＸ基因的表达状态及人类巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）对ＨＥＬ细胞ＨＯＸ基因表达的影响。结果发现：ＨＥＬ细胞表达ＨＯＸＢ７基因;ＨＣＭＶ感染后,其表达上调;用全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）处理ＨＥＬ细胞,ＨＣＭＶ对ＨＯＸＢ７基因表达的上调作用更强。提示ＨＣＭＶ可能通过影响ＨＯＸＢ７基因的表达导致胚胎发育畸形。     

同源盒基因与神经系统发育异常

先天畸形包括人类出生时各种解剖结构畸形、功能缺陷及代谢异常。据WHO 1996年的一项研究,中枢神经系统畸形约占全部先天畸形的17％。同源盒基因(homeodox gene。HOX)在神经系统的早期发育分化中起关键性作用,特别是在决定神经纵轴的前后差异．以及尔后个别神经组织的特异化方面。有研究表明HOX基因突变或异常表达可影响中枢神经系统的正常发育。     

单核细胞增多型李氏忒菌诱导小鼠胸腺细胞凋亡

以流式细胞仪 (FCM)分析 ,DNA琼脂糖凝胶电泳分析及细胞形态学改变为指标 ,研究单核细胞增多型李氏忒菌 (LM)感染对小鼠胸腺细胞凋亡的诱导作用。结果发现 ,LM能诱导小鼠胸腺细胞产生典型的细胞凋亡形态学改变 ;FCM分析显示特征性的凋亡峰 ;琼脂糖凝胶电泳分析显示胸腺细胞出现典型的DNA“梯状带” ;胸腺细胞凋亡于LM(5× 10 5CFU)感染后 8h出现 ,48h达高峰 ;胸腺萎缩于LM感染后 16h出现 ,48h达最低水平 ;胸腺细胞凋亡百分率随LM感染剂量增加而增高。提示 ,LM以时间和剂量依赖方式诱导小鼠胸腺细胞凋亡。     

HCMV IE1和pp65在人神经胶质瘤U251细胞中的时序表达

目的:研究人神经胶质瘤U251细胞对人巨细病毒(human cytomegalovirus, HCMV)的容许性,并探讨病毒蛋白IE1及pp65的时序表达特点.方法:HCMV感染U251细胞,以透射电镜观察U251细胞的形态学改变,以PCR方法检测HCMV核酸,于不同的时间点分别用抗蛋白IE1及蛋白pp65单克隆抗体进行免疫细胞化学染色,检测IE1及pp65的表达水平.结果:受染的U251细胞出现了明显的形态学改变,并用PCR方法检测到了HCMV核酸.免疫细胞化学染色表明,蛋白IE1在感染后30min～2h无表达,4h开始表达,14h达高峰,随后下降;蛋白pp65在感染后1 h为入侵型pp65,4～96h一直呈低水平表达,至120h表达急剧升高.结论:U251细胞是HCMV的容许细胞,HCMV在其中的表达具有时序性,但是其时序表达较在人成纤维细胞中延迟.     

应用PCR和ELISA法研究新生儿巨细胞病毒感染

人类巨细胞病毒 (ｈｕｍａｎｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ,ＨＣＭＶ)是先天性病毒感染的重要病因之一 ,在人群中感染极为普遍。发达国家孕妇ＨＣＭＶ感染率在 5 5 %以上[1,2 ] ,我国多数学者报道孕妇ＨＣＭＶ感染率为 90 %以上[3 ,4 ] 。孕妇的原发性感染或复发性活动性感染均可能导致胎儿的先天性感染 ,造成死胎、流产、小头畸形、脑钙化、耳聋、神经系统发育异常等病理损害 ,对人口素质的提高构成严重的威胁。本研究采用聚合酶链反应 (ＰＣＲ)技术检测脐血、新生儿尿液中的ＨＣＭＶ ＤＮＡ ,用于诊断ＨＣＭＶ感染 ,与血清免疫学方法 (ＥＬＩＳＡ)检测ＨＣＭＶ ＩｇＭ作比较。1　材料与方法     

一种银离子过氧化氢手消毒液消毒性能的研究

摘要〓目的〓研究一种银离子过氧化氢手消毒液的消毒性能及安全性。方法〓采用悬液定量杀菌试验和动物试验方法,对该消毒液杀灭微生物的效果和安全性进行观察。结果〓该消毒液中银离子含量为100 mg/L，过氧化氢含量为质量分数0.752%。以该消毒液原液作用0.5 min,对悬液内金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的杀灭对数值均＞5.00,对悬液内白色念珠菌的杀灭对数值＞4.00,对流感病毒、副流感病毒及新城疫病毒有明显的灭活作用。以该消毒液原液作擦拭消毒作用1 min,对手上自然菌的杀灭对数值＞1.00。该消毒液小鼠急性经口毒性试验LD50＞5 000 mg/(kg·bw)|其原液对家兔完整皮肤刺激指数为0,对小鼠骨髓嗜多染红细胞无致微核作用。结论〓该手消毒液能快速杀灭细菌繁殖体、真菌和病毒,属于无毒级物质。     

人巨细胞病毒UL123基因全长及其外显子4的克隆与表达

【目的】克隆人巨细胞病毒（HCMV）UL123基因cDNA全长（iel）及其外显子4（iel-exon4），构建原核表达重组质粒，诱导立即早期蛋白1（IE1）及其C-端86-491氨基酸（IE1-C86-491）表达，并鉴定表达产物。【方法】分别用RT-PCR和PCR法将iel和iel-exon 4从感染了HCMV的人胚肺成纤维细胞（HEL）中扩增出来，再分别克隆入原核表达载体pTWIN1上intein2的N端，转化大肠杆菌，经PCR、限制性酶切和测序鉴定阳性重组子，在低温和低IPTG浓度下诱导重组子表达可溶性重组融合蛋白rIE1／intein2和rIE1-C86-491／intein2，用SDS-PAGE和Western Blotting对表达产物进行鉴定。【结果】经PCR、限制性酶切和测序鉴定重组质粒pTWIN1／iel和pTWIN1／iel-exon4构建成功，sDS-PAGE和Western Blotting分析表明融合蛋白在大肠杆菌中表达。【结论】成功克隆并表达了iel和iel-exon4。