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日本血吸虫副肌球蛋白T细胞表位的预测和鉴定 总被引:3,自引:1,他引:2
目的鉴定日本血吸虫副肌球蛋白的T细胞表位。方法用SYFPEITHI软件预测日本血吸虫(中国大陆株)副肌球蛋白的T细胞表位,候选表位分别命名为P20、P21、P22、P23、P24。设计并合成候选表位的编码核苷酸,定向克隆入融合表达载体pET-32c( ),经酶切及测序鉴定出重组克隆。阳性克隆经IPTG诱导表达,表达产物以Ni^2 -NTA柱亲和层析及透析纯化。纯化后的硫氧还蛋白(Trx)融合蛋白体外刺激C3H/HeJ及C57BL/6小鼠腹股沟淋巴结或脾脏单个核细胞,^3H-TdR掺入法检测其增殖。结果候选表位中P20、P21、P22、P23能有效刺激C3H鼠致敏淋巴细胞细胞增殖,P20、P22能刺激C57鼠致敏淋巴细胞增殖。结论P20和P22可能是日本血吸虫副肌球蛋白的通用性T细胞表位。 相似文献
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血吸虫病是一种严重危害人类健康的寄生虫病,为了能及时准确地制定防治措施,必须首先了解该病的实际流行情况。在曼氏血吸虫病和日本血吸虫病的流行病学现场调查和研究过程中,常常通过改良加藤法来检测粪样中的虫卵数,并以此为依据推断个体和人群的感染度(intensity)以及流行率(prevalence)。然而虫卵计量在个体内、个体间均存在明显差异,严重影响了用改良加藤法作为检测手段对实际的感染度和流行率的估计。为了减少这些差异对实际疫情判断的影响,最初通过增加单个粪样的涂片数量或对同一受检者连续多天取样检查来防止漏检,然而,这不仅增加了工作量和操作费用,还可能受到实际工作环境或人为因素的限制。为此科学工作者尝试着将数学模型引入血吸虫病的现场工作中,以期在减少工作量的同时保证检出效率。 相似文献
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应用因特网对SARS病毒M蛋白B细胞抗原表位的预测 总被引:7,自引:1,他引:6
目的:预测SARS冠状病毒M蛋白的B细胞表位。方法:采用EMBOSS软件结合Hopp&woods亲水性参数、Janin可及性参数、极性参数、柔韧性参数及二级结构方案对SARS冠状病毒M蛋白的B细胞表位进行了预测,并用吴玉章等已建立的B细胞表位预测方法进行评述。结果:SARS冠状病毒M蛋白B细胞识别的表位可能位于第3~13和153~166位氮基酸等区域内或附近,这2个被预测的表位均含有β—转角和无规卷曲结构。结论:该研究对应用合成肽抗原进行SARS早期诊断研究及相关抗体的制备具有重要指导意义。 相似文献
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用噬菌体肽库筛选重组日本血吸虫线粒体相关蛋白的表位 总被引:5,自引:0,他引:5
目的:筛选和鉴定重组的日本血吸虫(中国大陆株)线粒体相关蛋白rSj38的表位。方法:用纯化的rSj338/26GST免疫家兔获得抗rSj338/26GST的多克隆抗体IgG,将抗体进一步纯化,获得抗rSj338单特异多克隆抗体IgG。用纯化抗rSj338抗体对噬菌体12肽库进行5轮免疫学筛选,挑取克隆。采用Western blot免疫识别,核苷酸序列测定分析其获得的表位并与rSj338/26GST进行同源性比较。将获得的不同表位的阳性克隆分别免疫小鼠,并采用Western blot及dot-ELISA方法筛选能刺激小鼠产生较高滴度抗rSj338抗体的阳性克隆,并将阳性噬菌体免疫的小鼠血清对纯化的rSj338/26GST,26GST,日本血吸虫成虫及虫卵抗原进行Western blot识别。结果:经5轮免疫学筛选后挑取的32个克隆,用Western blot方法30个克隆能被抗rSj338抗体识别,核苷酸序列分析发现共有11种表位,与rSj338无一级结构的同源性。经动物免疫初步实验筛选。共获得4个免疫原性较强的阳性克隆,其免疫鼠血清均可识别rSj338/26GST,日本血吸虫成虫及虫卵抗原。结论:获得了4种日本血吸虫中国大陆株线粒体相关蛋白rSj338的表位,均为模拟表位,这将为日本血吸虫病的疫苗研究开辟新的途径。 相似文献
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目的大量获得纯化的日本血吸虫22.6kDa重组抗原.方法用PCR方法将其编码基因序列经改造后亚克隆入载体质粒pGEx-1λT进行表达.结果得到了融合表达的蛋白抗原.此融合蛋白表达量大,用凝血酶酶切后易大量制备纯化的重组22.6kDa抗原.结论以此融合蛋白免疫的小鼠抗血清进行免疫印迹试验,表明Sj22.6/Sj26GST融合重组蛋白具有与Sj22.6蛋白一样的免疫学活性. 相似文献
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目的:对pGSj24克隆化基因进行核苷酸序列分析,了解其编码蛋白的属性。方法:常规制备pGSj24克隆化基因并重组入测序载体M13mp19,以DYEPRIMER荧光测序试剂盒进行核苷酸序列测定。分别以DNASIS和GOLDKEY软件对序列资料进行分析。结果:pGSj24克隆化基因长840bp,含一开放阅读框,可编码一分子量为22.6kDa的蛋白质。开读框上游和下游均有终止密码子。该基因与已发表的日本血吸虫22.6kDa蛋白的编码基因同源性达95%,编码区同源性达99.7%。在该基因内有一段典型的EF-Hand钙结合区序列,并有内质网导肽、微体导向信号等功能位点。预测该蛋白质内可能的抗原决定簇位置为第29-32、63-68和87-101等氨基酸片段。结论:pGSj24克隆化基因为日本血吸虫22.6kDa抗原编码基因。 相似文献
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日本血吸虫(中国大陆株)22.6kDa重组抗原对小鼠免疫保护性的初步研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:为研究日本血吸虫(中国大陆株)22.6kDa抗原的免疫保护性。方法:将其编码cDNA经PCR扩增后亚克隆入载体质粒PGEX—1λt进行表达,并用重组抗原免疫了一批昆明鼠。结果:与对照组相比,重组抗原免疫小鼠获得了38.93%的减虫率。结论:证明重组的日本血吸虫22.6kDa抗原可诱导宿主抗血吸虫感染的部分保护力。 相似文献
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目的:构建大鼠胰岛素原基因的真核细胞表达质粒pCMV/proinsulin并进行序列测定。方法:实验选用雄性SD大鼠1只,从大鼠胰腺组织中提取总RNA,通过RT-PCR法获得胰岛素原基因cDNA全长序列,并采用现代分子生物学技术,借助真核细胞表达质粒pCMV-Scriptvector具有多克隆酶切位点的特点,选择适当的限制性酶切位点(EcoRⅠ和HindⅢ),并使大鼠胰岛素原基因cDNA两端带有相同的酶切位点,利用其黏性末端进行定向克隆,从而将大鼠胰岛素原基因准确地插入到表达质粒pCMV上。结果:经RT-PCR法扩增并通过DNA核酸序列测定获得大鼠胰岛素原基因。经PCR法及酶切法初步筛选阳性克隆重组子,并进一步进行DNA核酸序列测定(双脱氧末端终止法),确定其序列与目的基因序列完全一致。结论:成功构建重组质粒pCMV/proinsulin,为进一步进行胰岛素原基因转染糖尿病大鼠和非胰岛β细胞,使之产生胰岛素、建立类胰岛β细胞系的研究奠定了扎实的基础。 相似文献
10.
吴海玮 《国际医学寄生虫病杂志》1998,(3)
多数真核生物的核糖体RNA(rRNA)基因的构成相似,即多个头-尾重复序列由非转录间隔区(NTS)将前体编码区域隔开而组成。已发现,基因的间隔区或NTS中的重复序列与前体核糖体RNA(pre-rRNA)转录的调节有关。 作者以利什曼原虫总DNA为探针,对 相似文献