2009—2010年珠海口岸入境人员中发热病例流感病毒分子流行病学研究

目的研究2009甲型H1N1流感疫情全球大流行期间珠海口岸入境发热旅客流感病毒的分子流行病学特征。方法选择2009年5月至2010年4月经珠海各口岸入境的976例发热旅客(体温≥37.5℃)为研究对象,采集咽拭子样本并提取病毒核酸,采用3个多重RT-PCR实验进行甲型、乙型和2009新甲型H1N1流感病毒的筛查以及甲型流感病毒的分子分型检测。此外,随机选择8株2009甲型H1N1流感病毒进行HA和NA基因全长RT-PCR扩增和序列分析。采用SPSS17.0软件对流行病学和实验数据进行统计学分析。结果976例发热旅客中检出流感病毒阳性病例331例,其中甲型流感占96.98%(321/331),乙型流感占3.02%(10/331);321例甲型流感病毒分子分型结果为新甲型H1N1流感92例,占28.66%,人季节性H1N1流感65例,占20.25%,人季节性H3N2流感164例,占51.09%。序列分析显示珠海口岸输入性新甲型H1N1流感病毒的HA和NA基因与甲型流感典型毒株A/California/04/2009(H1N1)的同源性分别达到99.86%和99.89%。结论本研究所阐明的珠海口岸流感病毒的分子流行病学特征对于指导国境口岸流感的防控具有重要参考价值。     

基于SCI的适配子研究文献计量分析

以科学引文索引（SCI）数据库1995-2012年收录的适配子研究文献为统计源,采用文献计量分析方法,定量分析了适配子研究文献的年代、国家（地区）、作者、学科、来源出版物以及高引频次论文的分布特点,并通过对中国作者论文的关键词词频的分析,揭示了当前国内适配子研究领域的热点。     

阿尼昂尼昂病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

目的 建立阿尼昂尼昂病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法。方法 针对阿尼昂尼昂病毒nsP1基因设计特异性引物和探针,以珠海国际旅行卫生保健中心之前构建的MS2病毒样颗粒为标准品,采用一步法建立实时荧光定量RT-PCR检测方法,并对该方法的检测下限、特异性、精密度、抗干扰能力、符合率进行评价。结果 建立的阿尼昂尼昂病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法线性良好（线性方程Y=-3.746X+46.174,R²=0.988）,检测下限为10³ copies/mL,低于之前文献报道的检测下限;能特异性地扩增阿尼昂尼昂病毒基因片段,而对其他相关病原体,包括同属于甲病毒属的基孔肯雅病毒、引起类似症状的登革病毒和马雅罗病毒、共用同一媒介宿主的疟原虫等无非特异性扩增;精密度良好,批内精密度测试时Ct值为32.92~35.40,变异系数CV 为2.10%;批间精密度测试时Ct值为31.89~35.49,变异系数CV为3.41%;在存在溶血、脂血等干扰因素时Ct值与正常样本的Ct值差值分别为0.37、0.71,表明其能有效对抗溶血、脂血等干扰因素的影响;盲样检测时能检出4例阳性和12例阴性,同预期结果完全一致,阴阳性符合率可达100%。结论 本研究建立的检测方法,灵敏度高、特异性好、精密度高、抗干扰能力强,可为阿尼昂尼昂病毒检测提供可行的方法。     

珠海口岸2016-2019年入境人群传染病流行情况及风险分析

目的 了解珠海口岸常见传染病流行情况及风险,为口岸传染病防控措施的制定提供科学依据。方法 收集2016-2019年经珠海三大口岸入境的发热或有疫区流行病学史人员的咽拭子、痰液、肛拭子、呕吐物、血液、尿液等标本,利用聚合酶链式反应(PCR)、细菌培养、血清学鉴定等方法检测常见呼吸道病原体、虫媒病原体、腹泻病原体等,最后利用R分析不同症候群的阳性病例的流行病学特征。结果 2016-2019年珠海3个口岸共收集12 824例样本,检出阳性样本3 968人次,病原体9种,总体检出率为30.94%(3 968/12 824)。三大症候群中检出最多的分别为流感病毒、致泻大肠杆菌、登革病毒。每年的流感病毒阳性数均占总病原体检测阳性数的90%左右,冬春及初夏季节(χ²=237.88,P<0.05)、40～60岁的流感检出率较高(χ²=176.88,P<0.05),差异均有统计学意义。腹泻症候群的阳性病原体以细菌性感染腹泻病原体为主,未检测到病毒性腹泻的病原体,同时腹泻病例中存在双重感染性细菌或感染性细菌与呼吸道病毒感染。虫媒热带病症候群中,登革热...     

食源致病菌96 微孔板DNA 诊断芯片的研制及在一起食物中毒突发事件中的应用

目的研制能同时检测9种常见食源致病菌的96微孔板DNA诊断芯片。方法针对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌O157:H7(Stx1和Stx2)、志贺氏菌、产单核细胞李斯特菌、蜡样芽胞杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌、副溶血弧菌、霍乱弧菌等9种最常见的食源性致病菌,首先选择合适的保守基因,设计种特异性的PCR引物(5'端标记生物素)和检测探针,通过参数优化建立一管多重PCR扩增体系;然后按5×5的阵列格式将探针点制到96微孔板的微孔内,通过条件优化建立稳定的PCR产物与固化探针的微孔杂交体系;采用链霉抗生物素蛋白碱性磷酸酶和化学显色底物NBT/BCIP来检测特异性的PCR杂交产物。结果20株标准菌株验证已建立的食源致病菌微孔板DNA诊断芯片,获得比较特异和稳定的实验结果。在一起食物中毒事件中,该芯片在采样后12h内检出金黄色葡萄球菌,与传统的细菌分离培养和生化鉴定的结果相符。结论本研究建立的新型食源致病菌96微孔板DNA诊断芯片具有快速、准确、自动化和高通量等特点,为快速应对食物中毒等突发公共卫生事件提供了非常有价值的检测技术。     

一步法多重RT-PCR快速筛查A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒

目的 建立能同时筛查A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒的多重RT-PCR技术.方法 针对A型流感病毒的M基因、B型流感病毒的NS基因设计通用扩增引物,针对新型甲型H1N1流感病毒的HA基因设计特异性扩增引物,采用一步法建立多重RT-PCR反应体系.通过盲法实验与实时荧光RT-PCR进行比对来评价方法的准确性,并应用于临床评价方法的实用性和有效性.结果 琼脂糖凝胶电泳分析多重RT-PCR产物,结果显示目的扩增片段条带清晰明亮,没有非特异性产物出现,可见该方法扩增效率高,特异性强.50份样本的盲法实验结果显示两种方法检测结果完全一致,符合率为100%.结论 建立的多重RT-PCR方法能通过一次实验快速、准确地同时筛检A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒,是一项成本低廉、对流感的疫情监测和早期诊断具有实用价值的筛检技术.

Abstract：

Objective To developed a multiplex RT-PCR assay for simultaneous screening of type A, B and novel A (H1N1)influenza viruses. Methods Two pairs of universal primers in were designed for amplifying the M gene and NS gene of type A and B influenza viruses, respectively. A pair of specific primers of HA gene was designed to detect novel A (H1N1) influenza virus. A one-step method was used to establish the multiplex RT-PCR system. A blinded experiment was carried out to validate the accuracy of this assay in comparison with the results of real-time fluorescence RT-PCR. The clinical practicability and efficacy of this assay was also evaluated. Results The RT-PCR products were analyzed using agarose gel electrophoresis,which yielded distinct bands of the target fragments without non-specific reactions, suggesting the high efficiency and specificity of the multiplex RT-PCR. Blinded study of 50 samples demonstrated a concordance rate of 100%. Conclusion This multiplex RT-PCR assay allows one-step simultaneous detection of type A, B and novel A (H1N1) influenza viruses rapidly and accurately, and provides a valuable low-cost screening technique for influenza epidemic monitoring and early diagnosis.     

基于同源加尾系统的4种腹泻病毒的多重RT-PCR检测方法

目的针对轮状病毒、诺如病毒、星状病毒和扎如病毒四种常见腹泻病毒,建立基于同源加尾(Homo-Tag AssistedNon-Dimer,HAND)系统的一步法四重RT-PCR检测方法。方法根据4种病毒基因组保守序列设计引物并在5’端加上同源尾巴序列。通过优化通用尾巴引物和特异性加尾引物的浓度等PCR参数构建四重RT-PCR反应体系,并系统评价其稳定性、特异性和灵敏度。结果成功建立基于HAND系统的4种腹泻病毒一步法多重RT-PCR检测方法。特异性分析显示四种病毒间无交叉反应,灵敏度分析显示轮状病毒、诺如病毒、星状病毒和扎如病毒的检测下限分别达到48、9.6、1.92和48 pg。结论所建立的基于HAND系统的4种腹泻病毒多重RT-PCR检测方法简便快速、灵敏特异稳定、成本低廉,非常适用于基层医学实验室。     

四会市α和β地中海贫血的分子流行病学调查

目的调查广东省四会市人群中α和β地中海贫血(地贫)的人群发生率和突变基因构成比。方法采集四会市1 007例新生儿脐带血和1 524例婚检成人的外周静脉血,并进行α和β-地贫的分子流行病学调查。α地贫初筛的诊断标准为:Hb Bart's阳性;β地贫的表型诊断标准为:平均红细胞体积(MCV)<80fl和HbA2≥3.5%。对α和β地贫表型阳性样品进一步进行α和β-珠蛋白基因型的DNA分析,对表型阳性而未查出中国人已知突变基因型的样品进行β-珠蛋白基因DNA序列测定。此外,所有脐带血样品均进行2种静止型α地贫基因(-α3.7和-α4.2)的筛查。结果1 007例脐带血样品中检出110例α地贫基因携带者、3例Hb H病和1例Bart's水肿胎,人群中α地贫基因携带率11.72%(118 / 1 007)。人群中共检出3种缺失型α地贫基因,其构成比依次为53.4%(--SEA)、34.7%(-α3.7)和11.9%(-α4.2)。1 524例成人外周静脉血样品中检出β地贫携带者59例,所有样品均确定了基因型,检出7种突变类型,人群中β地贫基因携带率为3.87%(59 / 1 524)。在59例β地贫携带者中,有11例(占阳性样品的18.64%)为β地贫复合α地贫病例,人群检出率为0.72%(11 / 1 524)。该地区3种最常见的突变-βCD41-42(-CTTT)移码突变,βIVS-2-654(C→T)剪接突变和β-28(A→G)转录突变占突变基     

一种诺如病毒快检试剂盒的评价

目的系统评价一种诺如病毒快检试剂盒的检测性能。方法收集130份非轮状病毒感染的腹泻样本,分别采用德国拜发公司生产的RIDA快速检测试剂盒和检验检疫行业标准中推荐的RT-PCR方法平行检测诺如病毒,统计分析两种方法的检测结果 ,并用RT-PCR测定快检试剂盒的最低检测下限。结果在130例腹泻样本中,快检试剂盒检出21例诺如病毒阳性,检出率为16.2%,RT-PCR检出24例诺如病毒阳性,检出率为18.5%。两种检测方法的符合率为97.7%(127/130),两种方法的检测结果差异无统计学意义(P=0.25),快检试剂盒的最低检测下限可达到1 000拷贝数。结论基于固相膜免疫测定的诺如病毒快检试剂盒具有较高的特异性和灵敏度,可以用于临床病毒性腹泻样本的快速筛检和国境口岸的应急检测。