丝氨酸蛋白酶抑制因子Kazal1型在人肺腺癌组织表达上调并促进肺腺癌细胞的增殖

目的探讨肺腺癌组织丝氨酸蛋白酶抑制因子Kazal 1型(SPINK1)表达与生存时间的关系及其对肺腺癌细胞生长的影响。方法用Real-time PCR法、免疫组织化学法检测285例肺腺癌组织和癌旁组织SPINK1的表达,并分析其表达水平与临床病理特征及预后的关系。利用SPINK1慢病毒表达载体及小干扰RNA(si RNA),处理人肺腺癌细胞系,光学显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)表达情况,ELISA或Real-time PCR检测SPINK1表达水平,细胞计数和集落形成法检测肺腺癌细胞生长情况。结果肺腺癌组织SPINK1 mRNA和蛋白表达均上调(均P0. 0001),SPINK1高表达组患者总生存时间短于低表达组(50. 0个月vs 64. 5个月,P0. 001)。SPINK1过表达组,肺腺癌细胞上清液SPINK1蛋白高表达(P 0. 05),增殖与克隆形成能力均上调(P 0. 05);SPINK1敲减组,肺腺癌细胞SPINK1 mRNA表达下调,增殖能力下调(P0. 05)。结论肺腺癌组织SPINK1高表达提示患者预后不良; SPINK1促进人肺腺癌细胞的增殖。     

三维重建技术在肺腺癌新分类标准诊断中的价值

目的探讨三维重建技术对肺腺癌新分类标准在术前外科诊断中的应用价值,助力于开发人工智能在肺癌辅助诊疗方面的深度学习模型系统。方法回顾性分析2018年10月至2020年6月我院收治的173例经手术病理证实且肿瘤直径≤2 cm肺磨玻璃结节患者的临床资料,其中男55例、女118例,中位年龄61(28~82)岁。同一患者不同部位肺结节视为独立事件,共纳入181例研究对象。按照病理类型新分类标准,将其分为浸润前病变[不典型腺瘤样增生(AAH)和原位腺癌(AIS)]、微浸润腺癌(MIA)及浸润性腺癌(IAC),利用多平面重建(multiplanar reconstruction,MPR)和容积重建(volume reconstruction,VR)等技术,分析研究三维重建相关参数与肺腺癌不同病理亚型之间的关系及其诊断价值。结果肺腺癌不同病理类型肺结节的直径(P<0.001)、平均CT值(P<0.001)、实性成分比值(P<0.001)、结节类型(P<0.001)、结节形态(P<0.001)、胸膜凹陷征(P<0.001)、空气支气管征(P=0.010)、结节内有无血管出入(P=0.005)、TNM分期(P<0.001)差异均有统计学意义,而结节生长部位差异无统计学意义(P=0.054)。同时还发现随着肺腺癌不同病理亚型侵袭性增加,各组参数显性征象比例也逐渐升高。多因素logistic回归分析结果显示,结节直径和平均CT值或实性成分比值是浸润前病变进展为IAC的独立危险因素。结论三维重建下肺小结节各种影像征象,包括结节直径、平均CT值、实性成分比值、形态、类型、血管出入情况、空气支气管征、胸膜凹陷征对肺腺癌新分类标准的诊断具有重要价值,在临床能够为患者个性化治疗提供指导。     

中国汉族人群TRAIL基因多态性的研究

目的 探讨中国汉族人群中TRAIL基因的分布情况及其在相关疾病发生中的作用.方法 应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)技术,对265例中国汉族人TRAIL基因第5外显子3′-非编码区1595位点(以mRNA为标准)进行检测,分析基因型频率和等位基因频率在不同性别人群中的分布.结果 Hardy-Weinberg平衡吻合度检验显示,本组各等位基因频率期望值和观察值无显著差异,且其基因多态性分布无性别差异,与日本人相比无显著差异(P>0.05),等位基因频率与非洲及美洲高加索人相比均有显著差异(P<0.05).结论 PCR-RFLP方法 检测TRAIL基因型特异性高,成熟、稳定;中国汉族人群TRAIL基因第5外显子3′-非编码区1595位点存在C/T突变.     

多平面重建联合容积再现重建对肺小结节早期诊断的价值研究

目的 探索多平面重建（MPR）联合容积再现重建（VR）对肺小结节（直径≤1.0cm）的早期诊断价值。方法 回顾性分析159例患者经手术病理确诊肺小结节的术前CT薄层扫描（TSCT）、MPR和VR图像表现,采用ROC曲线比较分析MPR联合VR与TSCT诊断肺小结节的灵敏度、特异度和正确率,并对阅片医师与病理金标准的一致性及阅片医师之间的一致性进行分析评价。结果在毛刺征、分叶征、血管集束征以及胸膜牵拉征的显示上,MPR联合VR均优于TSCT,差异有统计学意义（P＜0.05或0.01）。3位阅片医师（A、B、C）采用MPR联合VR诊断的灵敏度和正确率均明显优于采用TSCT,差异均有统计学意义（均P＜0.05）,而特异度差异均无统计学意义（均P＞0.05）;MPR联合VR诊断结果与病理金标准的一致性（A：κ=0.773,B：κ=0.754,C：κ=0.783）以及阅片医师之间的一致性（A和B：κ=0.743,B和C：κ=0.789,A和C：κ=0.751）均优于TSCT。结论MPR联合VR能显著提高对直径≤1.0cm肺小结节早期诊断效能。     

含微乳头结构肺腺癌CT重建征象特征及上皮间质转化相关基因表达

目的 探讨含微乳头结构（MPP）肺腺癌具有的CT重建征象特征,上皮间质转化（EMT）相关分子表达情况以及它们之间的关系。 方法 选取含MPP侵袭性肺腺癌（IAC）37例、不含MPP 80例及其对应的癌旁组织,比较临床病理特征、CT重建征象;应用Real-time PCR及Western blotting检测EMT有关标识分子表达变化情况。 结果 含MPP组淋巴结转移比例较高、毛刺、胸膜凹陷征、实性及分叶比例较高（均P<0.001）。 含MPP组E-钙黏蛋白（cadherin）及β-连环蛋白（β-catenin）表达均下调（P<0.05）,N-cadherins、波形蛋白（vimentin）、Snail及转化生长因子（TGF）-β表达均上调（P<0.05）。有毛刺组E cadherin及β-catenin表达下调者所占比例较高,而vimentin表达上调者所占比例较高（均P<0.05）;实性结节组E-cadherin表达下调者所占比例较高,而N-cadherin及vimentin表达上调者所占比例较高（均P<0.05）。 结论 含MPP浸润性肺腺癌具有特征性CT重建征象,发生了EMT改变。其CT重建征象与EMT相关分子表达存在联系。     

肺鳞癌患者纵隔淋巴结转移的危险因素分析

目的 探究肺鳞癌患者纵隔淋巴结转移的相关危险因素,为评估淋巴结转移风险提供重要参考。方法 回顾性分析浙江省舟山医院胸心外科2015年1月～2020年4月收治的192例肺鳞癌患者的病例资料,根据有无淋巴结转移将患者分为观察组(n=43)和对照组(n=149),观察组患者有淋巴结转移,对照组患者无淋巴结转移。对比两组患者的临床病理特征,即性别、年龄、吸烟史、原发灶直径、病灶位置分布、病灶肺叶分布、CT征象、病灶CT值、病灶同侧纵隔最大淋巴结短径和长径、肿大的淋巴结数量及术前血清肿瘤标志物[包括癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、鳞状上皮细胞癌抗原(squamous cell carcinoma antigen,SCC)]的差异。采用单因素和多因素Logistic回归模型分析肺鳞癌纵隔淋巴结转移的相关危险因素。结果 单因素Logistic回归分析结果显示,性别(P=0.041)、原发灶直径(P=0.018)、病灶位置分布(P=0.005)、病灶同侧纵隔最大淋巴结短径(P＝0.019)、病灶同侧纵隔最大淋巴结长径(P=0.015)可能与肺鳞癌患者纵隔淋巴结转移有关;多因素Logistic回归分析结果显示,性别(P=0.002)、病灶位置(P＝0.003)和病灶同侧纵隔最大淋巴结短径(P＝0.009)是肺鳞癌患者纵隔淋巴结转移的独立危险因素。结论 性别、病灶位置及病灶同侧纵隔最大淋巴结短径可能是肺鳞癌患者纵隔淋巴结转移最直接的危险因素。进一步分析得出,男性、中央型、病灶同侧纵隔最大淋巴结短径≥0.6cm的肺鳞癌发生纵隔淋巴结转移的可能性更大。     

稳定高表达小鼠Tim-4巨噬细胞系RAW264.7-T4的建立

目的建立研究小鼠Tim-4功能的细胞模型。方法常规分离小鼠腹腔巨噬细胞，RT-PCR扩增Tim-4全长基因片段，构建含Tim-4全基因片段的真核表达载体pcDNA3.0-Tim-4, 通过BamHⅠ、HindⅢ双酶切及测序鉴定其正确性。利用脂质体将pcDNA3.0和pcDNA3.0-Tim-4分别转染小鼠巨噬细胞系RAW264.7，通过G418加压筛选，建立稳定高表达Tim-4的RAW264.7，并采用RT-PCR、流式细胞术和免疫细胞化学染色法检测Tim-4 mRNA和蛋白的表达水平。结果RT-PCR扩增产物经BamHⅠ、HindⅢ双酶切，与pcDNA3.0连接构建的重组体经酶切和测序，结果与GenBank报道序列一致。RT-PCR结果显示，RAW264.7 T4细胞表达Tim-4 mRNA的水平显著高于对照组，流式细胞术显示RAW264.7-T4高水平表达Tim-4蛋白，免疫细胞化学染色表明Tim-4主要表达于胞膜。结论成功构建了携载小鼠Tim-4全基因的表达载体，并用该重组体建立了稳定高表达Tim-4 mRNA和蛋白的小鼠巨噬细胞系，为进一步探讨Tim-1与Tim-4的相互作用及对免疫细胞功能的影响奠定基础。     

Hcmv-miR-UL112荧光定量RT-PCR检测方法的建立

目的建立一种能快速准确检测hcmv-miR-UL112的方法。方法根据miRBase网站中公布的hcmv-miRUL112基因序列,通过设计引物、探针及优化反应条件,建立了一种实时荧光定量PCR方法对hcmv-miR-UL112进行定量检测,并进行敏感度、重复性和特异性实验,同时对PCR产物进行测序验证。结果获得了1条特异性茎环反转录引物,一条特异性PCR正向引物和通用反向引物。PCR最佳反应条件为95℃10min,53℃2min;95℃15s,57℃40s,共40个循环。该方法的批内变异系数CV和批间CV均<5%,相关系数R2均>0.99,扩增效率均>90.0%。结论成功建立了一种敏感度高、特异性强、重复性好并且简便快速的hcmv-miR-UL112荧光定量qRT-PCR检测方法。     

microRNA-205在人非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的检测人非小细胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)组织中microRNA-205表达的变化及分析肺腺癌有淋巴结转移患者组织中microRNA-205与EMT相关标志基因表达的相关性。方法收集2011年12月~2013年10月笔者医院收治的NSCLC患者75例,每例患者另取癌旁组织作为对照,荧光定量PCR法检测肿瘤组织microRNA-205的表达及有淋巴结转移患者肺癌组织中EMT相关基因Slug、Snail、vimentin mRNA的表达情况。结果NSCLC癌组织microRNA-205的表达在<3cm肿瘤患者(19.56±10.81 vs 29.36±10.37)、有淋巴结转移(15.46±7.03 vs 37.98±10.35)或临床分期为Ⅰ~Ⅱ(19.09±9.23 vs 30.21±8.96)患者组织中相对低表达,在肿瘤大小、淋巴结转移或临床分期之间差异具有统计学意义(P<0.05),且29例淋巴结转移肺腺癌患者癌组织microRNA-205与EMT重要转录因子Slug和Snail的表达呈显著负相关(Pearson r=-0.417, P=0.024;Pearson r=-0.388, P=0.038)。结论NSCLC癌组织microRNA-205的表达与淋巴结转移密切相关,可能通过调控Slug和Snail分子参与肺腺癌的侵袭转移过程,将为寻找治疗肺癌转移的策略提供新靶点。