单克隆抗体抗日本血吸虫病免疫的研究

单克隆抗体抗日本血吸虫病免疫的研究南京医科大学分子和免疫寄生虫学研究室曹建平，吴观陵，管晓虹血吸虫感染宿主的肝、肠等器官后虫卵肉芽肿（Ｇｒ）形成是日本血吸虫病的主要临床病理因素。研究Ｇｒ形成的调节机理和寻找外源性调节因子，有助于抗病疫苗的研制。本研究...     

Preliminary study on immunotoxin for the prevention of Schistosomiasis japonica

Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｎ (ｂｉｏ ｍｉｓｓｉｌｅ)ｏｎｔｈｅｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎｏｆｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍｉａｓｉｓ ＴｈｅｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙＮＰ11 4 ,ｌｏｃａｔｅｄｉｎｏｕｔ ｌａｙｅｒｍｅｍｂｒａｎｅｏｆａｄｕｌｔｗｏｒｍ ,ｍｅｍｂｒａｎｅｏｆｃｅｒｃａｒｉａｅ ,ｍｅｍｂｒａｎｅｏｆｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍｕｌａ ,ｓｈｅｌｌｏｆｅｇｇａｎｄｍｅｍｂｒａｎｅｏｆｍｉｒａｃｉｄｉｕｍｉｎｅｇｇ ,ｗａｓｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈａｒｔｅｓｕｎａ…     

钙磷脂结合蛋白Ⅱ在人肝细胞癌中的表达

目的：应用抑制差减杂交技术（supression subtractive hybridization,SSH）结合cDNA芯片筛选人肝细胞癌中差异表达基因.进一步探讨所筛选出的钙磷脂结合蛋白（annexinⅡ）在肝细胞中的表达及作用.方法：以肝癌组织和非肿瘤肝组织进行SSH,构建正、反向差减杂交文库,差减片断的PCR产物制备cDNA芯片,筛选出肝癌组织中差异表达基因.进一步应用荧光实时定量技术验证芯片结果,免疫组化方法分析annexinⅡ在肝细胞癌和正常肝组织中的表达.结果：成功构建了肝细胞癌差减杂交文库.芯片结果显示annexinⅡ在肝细胞癌中高表达并经荧光实时定量技术证实.免疫组化结果表明annexinⅡ在肝细胞癌和癌旁肝硬化组织中高表达,在正常肝组织中不表达（P＜0.05）.在低分化肝细胞癌中annexinⅡ的表达有增高趋势.结论：SSH方法构建的肝细胞癌差减杂交文库富含肝细胞癌差异表达基因.肝细胞癌中高表达基因annexin Ⅱ可能与肝细胞的恶性转化,肝癌细胞的转移和侵袭能力有关.     

人源日本血吸虫Fab抗体库的构建及抗独特型抗体的筛选、鉴定

目的:构建人源日本血吸虫Fab抗体库,筛选出日本血吸虫抗独特型抗体并进行初步鉴定。方法:以3名晚期血吸虫患者切除的脾脏为源,构建人源日本血吸虫Fab抗体库。并以日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)及成虫抗原(SWAP)免疫鼠血清IgG包板进行筛选,经ELISA鉴定后,对阳性克隆进行可溶性表达。结果:构建了人源日本血吸虫Fab抗体库,库容为4.3×106,经核苷酸序列分析,证实插入片段为Fab基因片断。经过5轮筛选后,从富集的次级抗体库中随机挑取60个克隆,用ELISA法鉴定得到4个可与免疫鼠血清(Ab1)特异性结合,而不与SEA及SWAP结合的单克隆抗体(A3、B6、C4、C17),其中B6经SDS-PAGE电泳显示插入片断正确。结论:成功构建了人源日本血吸虫Fab抗体库,并从中获得人源日本血吸虫抗独特型抗体B6,为研制用于人体血吸虫病免疫预防的抗独特型抗体疫苗奠定了基础。     

江苏省高邮市血吸虫病防治策略分析

目的:探索新形势下的血吸虫病防治策略,为江苏省血吸虫病防治工作特别是湖沼型血吸虫病的防治工作提供决策依据。方法:通过现场调研、专家咨询等方式,对高邮市防治血吸虫病工作进行调查、总结、分析和评价。结果:高邮市的“血防工作”实现了由传统“消耗型”向现代“开发效益型”的成功转变。结论:高邮市血防工作实行政府主导与市场机制相结合、血防工作与地方经济建设相结合、“开发、灭螺、治水”相结合的防治策略,较好解决了湖沼地区血吸虫病防治问题。     

新民滩血吸虫病防治的成本-效益分析

新民滩位于江苏省高邮市境内，地处淮河入江水道中段，行洪断面10km，总面积4933．36hm^2，其中水面积733．34hm^2，滩面积4200．02hm^2。1976年达到了血吸虫病传播控制标准。高邮市在“八五”、“九五”期间，调动农业、水利、卫生等部门和群众的积极性，开展了“垦殖、治水和血防”相结合的综合治理措施，取得了“治虫、治水、垦殖致富”的结果。各项指标达到了血吸虫病传播阻断标准，并取得了良好的经济效益。本文对1991-2001年新民滩实施“垦殖、治水、血防”相结合的综合治理措施的成本（投入）与效益（产出）进行分析。     

日本血吸虫鸡尾酒式DNA疫苗与蛋白疫苗联合应用增强免疫保护作用的研究

目的 探讨日本血吸虫鸡尾酒式DNA疫苗与蛋白疫苗联合应用以增强免疫保护作用的效果。方法分别大量制备质粒DNA：pcDNA3．1-SjC23、pcDNA3．1-SjCTPI、pcDNA3．1-（CDR3）6和重组蛋白SjC23-HD、SjCTPI、NP30。pcDNA3．1-SjC23、pcDNA3．1-SjCTPI、pcDNA3．1-（CDR3）6等量混合后即为鸡尾酒式的混合DNA疫苗，重组蛋白SjC23-HD、SjCTPI、NP30等量混合后即为鸡尾酒式的混合蛋白疫苗。70只BALB／c小鼠随机分为A、B、C、D、E5组，每组14只。A组为自然感染组；B组（空质粒对照组）每只小鼠分别在第0、3、6周经股四头肌注射100μlpcDNA3．1；C组（空质粒＋混合蛋白对照组）每只小鼠分别在第0、3、6周经股四头肌注射100μlpcDNA3．1，第9周每鼠经背部皮下多点注射100μl混合蛋白疫苗＋100μl福氏完全佐剂（FCA）；D组（混合DNA组）每只小鼠分别在第0、3、6周经股四头肌注射100μl混合DNA疫苗；E组（混合DNA＋混合蛋白组）每只小鼠分别在第0、3、6周经股四头肌注射100μl混合DNA疫苗，第9周每鼠经背部皮下多点注射100μl混合蛋白疫苗＋100μlFCA。DNA免疫组末次免疫后4周，蛋白加强组末次免疫后2周，所有小鼠同时经腹部皮肤感染（40±1）条尾蚴。攻击感染后42d剖杀小鼠，计数成虫及肝脏虫卵数。首次免疫前2d及感染前2d分别经尾静脉采血，分离血清检测IgG抗体水平、抗体亚类IgG1及IgG2a，并取小鼠脾脏制备单个脾细胞，检测细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ的水平。结果C、D组和E组的减虫率分别为17．70％、32．88％和45．35％，D组和E组的减虫率均显著高于C组（P均〈0．01），且E组的减虫率显著高于D组（P〈0．01）；C、D组和E组的减卵率分别为9．39％、36．20％和48．54％，D组和E组的减卵率均显著高于C组（P均〈0．01），且E组的减虫率也显著高于D组（P〈0．05）。C、D、E3组小鼠血清都检测到特异性IgG抗体，?     

全人源抗肝癌重组免疫毒素的制备及其对肝癌细胞的杀伤作用

目的:构建及表达全人源抗肝癌MAGE鄄A1单链抗体(A3)与相思子毒素A链(Abrin鄄A)的原核表达载体,并检测其对人BEL7402肝癌细胞系的杀伤作用。方法:应用PCR方法体外扩增A3基因,经测序后重组入原核表达载体pBAD/gⅢ鄄Abrin鄄A相应位点上,将构建正确的pBAD/gⅢ鄄A3/Abrin鄄A表达质粒转化E.coliTOP10,左旋阿拉伯糖诱导表达。表达产物经蛋白纯化及活性鉴定,采用MTT法检测其对BEL7402细胞的体外杀伤作用。结果:构建的重组免疫毒素表达载体pBAD/gⅢ鄄A3/Abrin鄄A,诱导表达产物主要以包涵体形式存在,分子量约60kD;纯化的pBAD/gⅢ鄄A3/Abrin鄄A对BEL7402细胞的最大杀伤率为70.17%,IC50为3.12μg/ml。结论:构建、表达的全人源抗肝癌A3/Abrin鄄A融合免疫毒素对肝癌细胞有较明显的杀伤作用。     

寄生虫与临床——八、寄生虫与眼病

人体寄生虫的原虫、蠕虫和昆虫,有不少寄生于人眼,引起眼寄生虫病。金大雄(1957)曾总结我国人眼部的寄生虫共有七种。绦虫三种:裂头蚴、猪囊尾蚴和棘球蚴;线虫二种:结膜吸吮线虫和刚棘腭口线虫;昆虫二种:蝇     

感染鼠肝石蜡切片免疫酶染色法诊断血吸虫病的研究

本研究应用福尔马林固定的感染鼠肝石蜡切片免疫酶染色法。检测109例血吸虫病病人血清,阳性率达95.41%;141例正常人血清的假阳性率为1.42%,表明该法有较高的敏感性及特异性,具有一定的诊断价值。实验中并对所应用的底物及有关步骤作了比较及改进。