蛋白质非酶糖基化导致理化性状改变

目的观察蛋白质糖基化后理化特性的改变。方法牛血清白蛋白(BSA)与葡萄糖在体外共同孵育后,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及荧光分光光度计测定荧光值和扫描荧光光谱。结果糖基化BSA荧光光谱改变,糖基化终产物(AGEs)荧光值增加;单体BSA在PAGE上向正极泳动加速,SDS-PAGE近负极段出现新的弥散带。结论蛋白质非酶糖基化可导致棕色变、阴电荷增加、分子量增大、荧光光谱改变。     

Effect of advanced glycosylation end products on activity of protein kinase C in human peripheral blood mononuclear cells

Objectives To investigate the effect of advanced glycosylation end products (AGEs) on the a ctivity of protein kinase C (PKC) in human peripheral blood mononuclear cells (P BMC) and to observe whether aminoguanidine (AG) can influence the effect of AGEs .Methods After PBMC were isolated from human peripheral blood and incubated with differen t concentrations of AGEs-BSA for various periods, total PKC activity in PBMC wa s determined by measuring the incorporation of (32)P from ［γ-(32) P］ ATP into a special substrate using Promega PKC assay kit.Results AGEs-BSA increased the total PKC activity in PBMC from 83.43±6.57 pmol/min/ mg protein to 116.8±13.82 pmol/min/mg protein with a peak at 15 min. AGEs -BSA also increased the total PKC activity in a concentration-dependent manner fro m 83.1±6.4 pmol/min/mg protein (control) to 119.1±13.3 pmol/min/mg prote in (control vs AGEs-BSA 400 mg/L, P<0.01).Furthermore, AGEs-BSA induc ed an elevation of PKC activity in a glycosylating time-related manner, from 80 .9±8.2 (control) to 118.3±11.5 pmol/min/mg protein (glycosylation for 12 wk, P<0.01).The total PKC activity stimulated by AGEs-BSA pretreated wi th AG (100, 200 mg/L) was markedly lower than that of AGEs-BSA group not pretr eated with AG (P<0.05, P<0.01).Conclusions AGEs-BSA increased the total PKC activity in PBMC in a concentration and incuba tion time dependent manner. The ability of AGEs-BSA to stimulate PKC activity was markedly decreased by pretreatment of AGEs-BSA with AG.     

超声联合微泡促进骨髓间充质干细胞迁移的实验研究简

目的 探讨体外超声联合微泡对骨髓间充质干细胞迁移的影响,为超声微泡促进干细胞迁移的体内研究提供依据.方法 体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,分为超声联合微泡组、单纯超声组、单纯微泡组及空白对照组.超声探头频率1 MHz,强度1 W/cm2,进行脉冲超声辐射,采用transwell小室培养法,观察超声联合微泡对骨髓间充质干细胞运动的影响.结果 空白对照组、单纯微泡组骨髓间充质干细胞的迁移能力较低,超声联合微泡组与单纯超声组细胞的迁移能力无显著差异（P〉0.05）,但两者比空白对照组、单纯微泡组迁移能力有显著差异（P〈0.01）.结论 超声及超声联合微泡作用能明显增强间充质干细胞的迁移能力.     

超声微泡增效骨髓干细胞移植效率的实验研究

目的在动物水平研究超声联合微泡增效骨髓干细胞(BMSCs)心肌移植的作用,为临床上提高心肌梗死后BMSCs移植效率提供一种新的思路。方法12只中国家猪分别体外分离纯化BMSCs,超顺磁性氧化铁颗粒标记;介入法建立急性心肌梗死模型,成功后14d经冠状动脉注入自体BMSCs;实验组先注入微泡后再注入BMSCs,同时行超声辐射。术后行磁共振检查;心肌做病理切光镜、透射电镜观察。结果①两组在心肌梗死区和梗死周边区磁共振上均见SPIO标记的BMSCs形成的低密度区;②实验组较对照组普鲁士蓝染色阳性细胞明显增多(P<0.01);③两组心肌超微结构无差异,但B1组见血管内皮间隙增宽。结论超声辐射微泡可增加自体BMSCs心脏的移植效率。     

血管内超声指导下行冠状动脉左主干介入治疗

目的探讨应用血管内超声(IVUS)对冠状动脉无保护左主干(ULMCA)检查并行介入治疗的效果及安全性。方法在IVUS指导下植入支架治疗ULMCA病变21例(A组),未行IVUS检查经冠脉造影确诊行支架植入术49例(B组),比较两组患者近期疗效及术后6个月的随访结果。结果两组患者住院期间病死率、非致死性心肌梗死率、急诊冠脉旁路移植术率均无显著性差异,胸痛复发和再狭窄率A组低于B组(P<0.05)。结论应用IVUS指导ULMCA支架植入有助于选择适应证和合适的支架、实时评价支架扩张的满意度以达到最佳植入效果,且相对安全。     

64层螺旋CT与冠状动脉造影同步评价冠状动脉支架置入后血管再狭窄☆

背景：支架置入后复查冠状动脉造影对判定再狭窄有重要参考价值，而目前其微创性和价格等因素均影响了造影复查率。 目的：以选择性冠状动脉造影为“金标准”，分析64层螺旋CT在冠状动脉支架置入后再狭窄评价中的应用价值。 设计、时间及地点：回顾性病例分析，于2007-03/2008-07在东南大学附属中大医院完成。 对象：选择门诊复查和住院的冠心病患者22例，于支架置入后同步进行64层螺旋CT冠状动脉成像和选择性冠状动脉造影检查。男12例，女10例；平均年龄（68.0±9.6）岁。 方法：采用64层螺旋CT对22例冠心病患者的38个冠状动脉支架进行检查和重建分析，对支架的再狭窄情况进行评价，与“金标准”选择性冠状动脉造影结果进行对照。 主要观察指标：64层螺旋CT图像和选择性冠状动脉造影评价血管再狭窄情况。 结果：64层螺旋CT可以清晰的显示冠状动脉主干及其主要分支，对置入的支架均能清楚显示。在置入的38枚支架中，CT显示32枚支架保持通畅，并与常规“金标准”冠状动脉造影结果相吻合；另有6枚支架64层CT显示存在不同程度的再狭窄。与选择性冠脉造影结果对照后发现其中有4枚互相吻合，而另外2枚再狭窄未得到选择性冠状动脉造影的证实。64层CT诊断支架再狭窄的敏感性和特异性分别为100%和94.18%。 结论：64层螺旋CT在评估冠心病支架置入后的再狭窄问题上有很高准确性，能较准确地区分支架开通和闭塞。     

糖尿病小鼠血清糖基化终产物水平增高

DCCT[1 ] 和 UKPDS[2 ] 研究均证明长期持续高血糖与糖尿病慢性血管病变的发生密切相关。高血糖导致血管病变发生发展的机制尚不完全清楚 ,蛋白质非酶糖基化形成的糖基化终产物 (advanced glycation end products,AGEs)可能发挥重要作用 [3 ]。为了从整体水平研究 AGEs与糖尿病慢性并发症之间的关系 ,我们运用酶联免疫吸附试验 (EL ISA)测定糖尿病小鼠血清 AGEs水平 ,并分析其与肾功能、尿蛋白及尿微量白蛋白排泄之间的关系 ,现报告如下。材料和方法一、材料1.试剂 :牛血清白蛋白 (BSA)为 BM产品 ,人血清白蛋白(HSA)、明胶、四…     

超声联合微泡对内皮祖细胞体外增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的:体外探讨超声联合微泡对内皮祖细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响,为进一步体内研究提供科学依据.方法:体外提取、分离和培养猪骨髓内皮祖细胞,随机分为对照组、超声组、超声微泡组,干预后24 h分别采用CCK-8检测细胞增殖活性,PI染色流式细胞仪分析细胞凋亡坏死及细胞周期.结果:(1)低声强超声(0.25～1.0 W·cm-2)联合微泡作用下对内皮祖细胞增殖活性无明显影响;较高声强(﹥1.0 W·cm-2)作用下,随声强逐渐增大,细胞增殖活性逐渐降低.(2)与对照组比较,超声微泡组(频率1 MHz,输出功率1.0 W·cm-2,辐照90 s)对内皮祖细胞凋亡坏死及细胞周期无明显影响,而同样条件下超声组细胞凋亡坏死明显增加,同时显著抑制细胞DNA合成.结论:1.0 W·cm-2超声联合微泡干预内皮祖细胞对细胞增殖活性、凋亡坏死及细胞周期无明显不良影响,为进一步应用超声微泡体内干预内皮祖细胞移植的研究提供可能.     

超声波促骨髓间充质干细胞心肌内归巢的实验研究

目的探讨超声微泡造影剂介导对猪骨髓干细胞（BMSC）心肌内移植归巢的影响。方法选取8只2月龄中国家猪随机分为对照组（A组，4只）和实验组（B组，4只）。分别抽取骨髓，体外分离、纯化，培养BMSC，超顺磁性氧化铁颗粒（SPIO）标记；介入法建立急性心肌梗死模型。B组超声微泡作用下移植Busc（1MHz，2W／cm^2，90s辐射）；A组不采用超声微泡干预BMSC移植过程。两组动物于术后24h活体行磁共振检查，对比BMSC移植，随后处死动物，取心肌梗死区、梗死周边区、正常区做病理切片，行HE染色及普鲁士蓝染色，心肌消化后涂片普鲁士蓝染色后计数BMSC。结果①SPIO成功标记干细胞，因此，活体行磁共振示踪BMSC成为可能。②磁共振：A组及B组在心肌梗死区和梗死周边区均见SHO标记的BMSC形成的低密度区，低信号区B组较A组多。③普鲁士蓝染色：两组心肌消化涂片染色，BMSC在B组较A组有明显地增加（P〈O．05）。结论超声联合微泡剂介导的猪自体BMSC心肌内移植有所增强，该方法为提高干细胞移植归巢效率提供一种新的思路。     

超声联合一氧化氮微泡对大鼠心肌组织的生物学效应

目的:本研究旨在探讨超声联合一氧化氮(NO)微泡的作用对大鼠心肌组织局部基质衍生因子-1(SDF-1)的影响,及其对心肌组织作用的安全性?方法:将32只SPF级SD雄性大鼠随机分为4组,每组8只?第1?2?3组分别经尾静脉输入1 ml的NO微泡?普通脂质微泡以及PBS,并采用频率为1 MHz?强度为1 W/cm2的超声辐照大鼠心前区,辐照时间为10 min;第4组为空白对照组?4 h后每组处死4只大鼠,留取心肌组织进行HE染色,观察局部的炎症反应情况;同时留取血清标本用于检测肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)和肌钙蛋白I(TnI)的含量?1周后处死剩余大鼠,取心肌组织进行RT-PCR和Western blot分别检测SDF-1的基因及蛋白相对表达量?结果:辐照4 h后留取心肌组织行HE染色显示各组均可见少量炎性细胞浸润,组间没有明显差异;血清学指标检测显示,第1组与第2组血清CK和LDH高于第3组和第4组,且差异有统计学意义(P < 0.05);第1组血清TnI低于第2组,但高于第3组和第4组,且差异有统计学意义(P < 0.05);辐照1周后留取的心肌组织行RT-PCR和Western blot分析结果均显示第1组SDF-1相对表达量最多,各组间进行两两比较,差异均有统计学意义(P < 0.05)?结论:超声联合NO微泡辐照大鼠心肌组织,与内含全氟显气体的普通脂质微泡一样,对心肌组织无明显破坏;但能使大鼠心肌组织SDF-1表达增加,其程度高于应用超声联合普通脂质微泡,因此,NO微泡应用于干细胞归巢将优于目前普通脂质微泡?