超顺磁性氧化铁标记间充质干细胞心肌移植的磁共振成像研究

目的探讨应用磁共振（MR）进行干细胞活体心肌内成像的可行性。方法从猪骨髓抽取、分离、培养间充质干细胞（MSC）,用含超顺磁性氧化铁纳米颗粒（铁羧葡胺）的DMEM培养液孵育24h,并用二脒基苯基吲哚（DAPI）和PKH。进行荧光标记。然后将MSC经心外膜直接注入猪急性梗死心肌内,每头猪注射3点。根据每注射点细胞数量以及细胞是否铁标记,12头猪随机分成4组：2×10^6标记细胞组（n=3）、1×10^6标记细胞组（n=3）、5×10^5标记细胞组（n=3）和1×10^6未标记细胞组（n=3）。细胞移植后20—24h行猪心脏1．5TMR成像,1h后处死并根据MR成像图像切取心肌组织行普鲁士蓝染色和免疫荧光检查。结果（1）体外标记：普鲁士蓝染色见标记MSC内大量蓝色颗粒,标记率为100％,电镜证实含铁囊泡位于胞质内。（2）MR成像：注射铁标记细胞的三组（9头猪）进行活体心脏快速小角度翻转梯度回波（T2·WI—Flash 2d）序列成像,发现移植部位均呈明显的低信号,而且注射点信号缺失区的面积大小与回波时间和移植细胞数量有关;而快速自旋回波（T2WI—FSE）序列成像仅隐约可见低信号区甚至难以辨认,但显示梗死病灶和猪心脏结构比T2·WI-Flash 2d序列清晰。未标记细胞组（3头猪）的9个注射点心肌壁均未显示MR低信号区。（3）组织学检查：MR成像低信号区心肌病理学检查见普鲁士蓝染色、DAPI和PKH26三重阳性细胞存在。结论应用磁共振对超顺磁性氧化铁标记的干细胞进行活体心肌内成像是可行的。     

超顺磁性氧化铁活体动态示踪小型猪骨髓间充质干细胞的转归

目的探讨磁共振(MRI)下活体动态示踪小型猪骨髓间充质干细胞(MSCs)经冠脉移植治疗心肌梗死的可行性及移植后8周MSCs的转归。方法采用密度梯度离心法获取小型猪自体骨髓MSCs,用携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒载体转染MSCs,并用超顺磁性氧化铁(SPIO)体外标记MSCs-GFP。采用经皮球囊封堵法制备急性心肌梗死(AMI)模型,随机分为2组,MSCs移植组(n=8),经冠脉移植双标记的MSCs到小型猪心肌梗死区域,对照组(n=5),移植等量生理盐水,移植后24 h、3周、8周在MRI下进行活体动态示踪。8周后离体组织学观察大体形态学改变及移植细胞存留情况。结果普鲁士蓝染色显示25μg Fe/mL SPIO与0.8μl/mL阳离子脂质体联合对MSCs的标记率达95%～100%,标记后细胞活力和增值能力较前改变无统计学差异(P>0.05),对GFP的表达无影响,双标记细胞仍具备成骨、成脂及成心肌分化能力,心肌细胞表面标记物α-MHC和actinin表达阳性。双标记MSCs经冠脉移植后24 h,3周,8周MRI成像均可见梗死区域的室间隔有明显区别于周边组织的低信号,信号强度(SI)改变分别为52.98%±10.74%,21.53%±5.40%,6.23%±2.01%(P<0.05),对照组无可见低信号区域。组织学检查示MSCs移植组心梗瘢痕面积明显缩小(P<0.05),HE染色见心梗区域心内膜下出现再生心肌,普鲁士蓝染色可见有蓝色颗粒聚集,荧光显微镜下同一切片GFP表达阳性,CD68(单核巨噬细胞表面标记物)表达阴性。每高倍镜视野下心梗边缘区和梗死区的蓝色颗粒数分别为36.2±3.8和9.7±2.1(P<0.05)。对照组普鲁士蓝染色阴性。结论 GFP/SPIO双标记MSCs是安全的,且不改变干细胞的生物学特性。经冠脉移植双标记MSCs可在MRI成像下表现出理想的信号强度,示踪时间长达8周,MSCs移植可减小心梗瘢痕面积,促进心肌再生,8周后SPIO主要定居于心梗边缘区,仍存在于MSCs中,SPIO活体动态示踪小型猪骨髓MSCs?     

菲立磁标记猪骨髓间充质干细胞自体肝内移植的MR成像

目的:探索标记细胞肝内移植后磁共振威像技术.方法:获取猪自体骨髓间充质干细胞,分离、培养.应用菲立磁(Feridex)标记细胞,普鲁士蓝染色鉴定,标记细胞组n=6)和未标记细胞组(n=4)行经门静脉行肝内移植,分别于移植前,移植后6h、3 d、7d行磁共振T1WI,T2WI,T2*WI序列成像,同时行组织切片普鲁士蓝染色结果:普鲁士蓝染色表明MSCs的标记率达接近100%,磁标记MSCs肝内移植后行磁共振T2*WI序列呈明显低信号改变,并持续至细胞移植后7 d,组织切片普鲁士蓝染色显示7 d后肝内仍有移植的磁标记细胞存在于肝实质及肝血窦中.结论:利用Feridex可以在体外成功标记猪骨髓间充质干细胞,肝脏移植后行磁共振可以对标记细胞进行活体成像.     

微泡破坏及骨髓间充质干细胞移植治疗犬急性心肌梗死模型的有效性

目的探讨超声介导的微泡破坏联合骨髓间充质干细胞移植到梗死区治疗犬急性心肌梗死的有效性。方法造模组犬随机分为磷酸盐缓冲液(PBS)组、微泡破坏+PBS组、骨髓间充质干细胞(BMSCs)组、微泡破坏+BMSCs组4组。术后28 d,用心肌声学造影(MCE)检测心功能和灌注缺损面积占左室总灌注面积的百分比(DA%),NBT染色检测心肌梗死面积,用免疫组化检查BrdU染色阳性的细胞数来测定BMSCs梗死区归巢数,用免疫组化检测α-肌动蛋白评估心肌细胞的收缩功能。结果 BMSCs的移植能够显著改善心功能,缩小心肌梗死面积。其中,超声+微泡+BMSCs组心功能的改善最显著(P<0.05),梗死区域BrdU染色阳性的细胞数最多(P<0.05),α-肌动蛋白阳性细胞数目最多,心肌梗死面积小于其他各组(P<0.05)。结论诊断超声介导微泡破坏同BMSCs的移植能够使更多的BMSCs归巢,使心肌梗死面积缩小,改善心功能。     

微泡破坏促进骨髓间充质干细胞归巢治疗犬心肌梗死

目的通过诊断超声介导微泡破坏联合冠状动脉内移植促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)归巢梗死心肌,为临床治疗心肌梗死探索新的方法。方法急性心肌梗死(AMI)造模成功犬随机分为4组,每组6只,造模7 d后,分别给予磷酸盐缓冲液(PBS)、超声+微泡+PBS、BMSCs、超声+微泡+BMSCs。28 d后,评估心功能和灌注缺损区域占左心室灌注区的百分比(DA%),评估心肌梗死面积占左心室心肌横断面面积的百分比,BMSCs分化的心肌细胞数量及是否出现α-肌动蛋白。结果超声+微泡+冠状动脉移植BMSCs和单纯冠状动脉移植BMSCs均可缩小心肌梗死面积和灌注缺损面积、改善心功能和室壁运动异常指数(WMSI)、促进BMSCs在心肌内存活,但前者效果更显著;两者均可表达α-肌动蛋白,但前者α-肌动蛋白染色阳性的细胞数多于后者。结论诊断超声介导微泡破坏联合冠状动脉内移植可以促进BMSCs归巢梗死心肌,使更多的BMSCs抵达梗死区域分化为有功能的心肌细胞,从而降低心肌梗死面积并改善心脏功能。     

磁共振成像对猪不同心脏状态下经冠状动脉干细胞移植后体内再分布的评价

目的 探讨磁共振成像在停跳与不停跳两种心脏状态下,对猪心肌梗死模型经冠状动脉注射骨髓间充质干细胞后全身各主要脏器干细胞早期再分布中的应用价值.方法 用带球囊导管经股动脉选择性插管至雌猪左冠状动脉前降支,在第二对角支的近端将球囊扩张90 min建立急性心肌梗死模型.模型建立后7 d,随机分为4组,分别为不停跳心脏细胞移植组(不停跳组,n=6)与对照组(n=6),停跳心脏细胞移植组(停跳组,n=6)与对照组(n=6).超顺磁氧化铁颗粒(SPIO)标记的干细胞移植3 d后,行磁共振T2*WI示踪检查.取动物心、肝、脾、肺、肾脏的标本,用实时定量聚合酶链反应检测雄性细胞特异性的SRY基因,切片进行普鲁士蓝染色,观察细胞在体内的分布和形态.结果 除肾脏外,心、脾、肝中干细胞移植组T2*值较对照组差异均有统计学意义,但移植组在不同心脏状态下不停跳组与停跳组心肌T2*值差异无统计学意义[(-7.81±2.03)ms比(-6.56±1.72)ms,P＞0.05],而不停跳组脾脏及肝脏的T2*值明显低于停跳组[脾脏:(-16.72±2.83)ms比(-22.18±3.98)ms,P＜0.01,肝脏:(-2.40±0.44)ms比(-5.32±3.40)ms,P＜0.05],在肾脏中两组差异无统计学意义.SRY基因在不停跳组及停跳组的脾脏及肝脏的表达差异有统计学意义,病理学检查见移植细胞呈普鲁士蓝染色阳性.结论 干细胞SPIO标记后,磁共振成像可以作为方便而有效的手段在移植早期活体示踪干细胞,评价其在体内的分布情况.经冠状动脉途径注射骨髓间充质干细胞后,许多细胞流向心脏以外的器官,尤其是脾脏.心脏停跳与不停跳状态下经冠状动脉注射骨髓间充质干细胞对干细胞在心脏的滞留无明显差别.     

粒细胞集落刺激因子动员大鼠骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的实验研究

目的 运用粒细胞集落刺激因子诱导骨髓间充质干细胞（MSC）移植归巢到急性心梗区域，研究不同环境下MSC在心肌内的分化状态及程度。方法 选用SD雄性大鼠，体重200～250g，随机分为4组：急性心肌梗死（AMI）干绷胞移植＋粒细胞集落刺激因子（G—CSF）动员组（20只）、AMI干细胞移植组（20只）以及单纯G-CSF组（20只）以及单纯对照组（10只）。于治疗4w后取材，检测心肌梗死区及其周围的血管密度值。免疫组化染色检测抗体增殖细胞核抗原（PCNA）、肌浆蛋白（myogenin）、肌球蛋白（myosin）、缝管连接蛋白43（Cx43）及结蛋白（desinmim）在移植骨髓间充质干细胞中的表达。并用共聚焦免疫荧光双标染色方法标测PCNA、myogenin。结果 胶体金标记的MSC经G-CSF诱导移植到心脏内在梗死部位与心肌生长为一体，颜色为黑色，存HE切片中移植细胞的胞浆呈现紫红色，极易识别。血管密度检测结果显示G-CSF＋MSC移植组心肌梗死区血管密度明显高于其他各组。免疫组化染色检测抗体PCNA、myogenin、myosin、Cx43及desinmim在G-CSF＋MSC移植组心肌梗死区中的表达明显。其他各组未见明显表达。结论 G-CSF能够明显动员MSC归巢，促进梗死区血管新生，在梗死区分化成新的心肌。     

超声结合微泡在干细胞移植治疗急性心肌梗死中的研究进展

干细胞治疗急性心肌梗死的应用日益广泛,结合超声微泡可辅助干细胞在心肌梗死区靶向归巢,增加局部血管新生;微泡联合基因修饰干细胞,可进一步提高移植效率,改善心脏功能。同时,也有许多问题待研究解决。     

骨髓间充质干细胞不同移植方法对心肌梗死大鼠心脏的保护作用

目的对比研究经尾静脉和心外膜直视注射移植骨髓间充质干细胞（MSCs）对心肌梗死大鼠的心脏保护作用。方法结扎左冠状动脉前降支制备大鼠心肌梗死模型,采用同种异体MSCs体外分离、纯化、培养和标记,在梗死后2周,A组经尾静脉植入MSCs,B组心外膜直视注射MSCs,C组尾静脉注入等量DMEM培养液为对照。4周后测定心功能,并行免疫组织化学检测。结果移植组心肌组织中可以观察到DAPI标记细胞存在,免疫组化显示阳性标记细胞α-Actin肌动蛋白检测阳性。与对照組相比,A和B组左心功能显著改善（P<0.05）,A和B组梗死面积明显缩小[分别为（45±2）%,（40±4）%和（41±3）%,P<0.05]。结论MSCs经静脉移植和心外膜植入都能够归巢至心肌梗死区,对梗死大鼠的心脏都具有保护作用。     

磁共振成像示踪观察脑缺血大鼠脑室内移植神经干细胞的实验研究

目的探讨MRI示踪观察脑缺血大鼠脑室内移植的标记神经干细胞的分布和迁移的可行性。方法选取16只雄性SD大鼠制做脑梗死模型,随机分为标记组和未标记组,每组8只,分别于脑梗死对侧侧脑室内立体定向移植超顺磁性氧化铁纳米颗粒标记和未经标记的神经干细胞。移植细胞后,不同时间点分别进行MRI连续成像观察,之后进行大鼠脑组织冷冻切片的普鲁士蓝染色。结果标记组移植后即刻的MRI即可观察到大鼠侧脑室内的移植标记细胞,移植后7天脑梗死皮质下即可见到低信号影,各对应时间点组织切片的普鲁士蓝染色与MRI结果相符。结论MRI能够在活体内连续无创的示踪观察大鼠侧脑室移植的标记神经干细胞的迁移及分布情况。     

氟伐他汀动员内皮祖细胞促进大鼠梗死心肌血管新生的作用

目的观察氟伐他汀动员急性心肌梗死（AMI）大鼠内皮祖细胞（EPCs）,促进梗死心肌血管新生,减小梗死面积的效果。方法①成年Wistar大鼠左前降支结扎造模,随机分为空白组（A组）、假手术组（B组）、AMI组（C组）和氟伐他汀治疗AMI组（D组）。②流式细胞技术检测不同时段大鼠外周静脉血EPC动态变化。③4周末处死大鼠,心肌切片Masson染色,左室心肌正中线弧长方法计算梗死面积。④CD31单克隆抗体免疫组化法标记心肌新生血管内皮细胞并计算各组梗死、梗死周边及非梗死区新生血管数。结果①造模后第7天D组EPCs（37．13±3．44／2×10^5MNCs）显著高于A组（19．88±4．91／2×10^5MNCs）、B组（22．33±5．43／2×10^5MNCs）和C组（26．56±3．17／2×10^5MNCs）,差异具有统计学意义（P〈0．05）;C组较A组有少量增加（P〈0．05）,B组较A组无明显升高（P〉0．05）,B组和c组差异无统计学意义（P〉0．05）。造模后第14天D组EPCs（45．5-±4．99／2×10^5MNCs）同样显著高于A组（17．25±7．17／2×10^5MNCs）、B组（22．78±2．91／2×10^5MNCs）和C组（26．88±3．76／2×10^5MNCs）（P〈0．05）;B组和C组较A组有少量增加（P〈0．05）,B组和C组差异无统计学意义（P〉0．05）。第7天和第14天各组变化比较,A、B、C三组EPCs变化无统计学意义（P〉0．05）,D组则明显增加（P〈0．05）。②D组梗死区新生血管计数（10．75±1．61／mm。）明显多于C组（5．09±2．33／mm。）（P〈0．01）,梗死周边区新生血管计数D组（17．53±2．35／mm^2）同样明显多于C组（8．55±2．40／mm^2）（P〈0．01）。③D组梗死面积[（31．41±2．59）％]小于C组[（35．67±5．22）％]（P〈0．01）。结论①氟伐他汀能动员急性心肌梗死大鼠内皮祖细胞进入外周血循环,使其数量增加并促进梗死周边区血管新生。②心肌梗死后大鼠应用氟伐他汀可以限制梗死面积。     

细胞磁共振成像不能区分磁标细胞的存活状态

目的探讨不同状态下磁标记间充质干细胞(MSCs)的体内外磁共振(MR)成像特点,明确MR对细胞存活状态是否有鉴别诊断价值。方法分离培养猪骨髓MSCs,用超顺磁性铁纳米颗粒(SPIO)标记细胞24h。对未标记MSCs、存活的SPIO-MSCs、死亡的SPIO-MSCs、单纯SPIO进行体外凝胶内1.5TMR成像;开胸结扎前降支建立猪心肌梗死模型,于梗死交界区心肌内直接注射未标记MSCs、存活的SPIO-MSCs、死亡的SPIO-MSCs和单纯SPIO,然后进行体内T2*WI-flash序列MR成像。结果存活的SPIO-MSCs、死亡的SPIO-MSCs和单纯SPIO在体内外T2*WI-flash序列MR图像上均显示为低信号区,单凭图像无法区分。结论细胞MR成像无法区分组织磁标细胞、游离铁和含铁病变,因此对长期细胞示踪结果的解读应该慎重。     

骨髓间充质干细胞通过调节LPS-TLR4通路抑制肝星形细胞活化的作用机制

目的研究人骨髓间充质干细胞（BMSC）是否可通过干预LPS-TLR4通路,调控肝星状细胞（HSC）LX2活化,阐明BMSC在肝纤维化形成中的作用。方法体外共培养BMSC、LX2,分为BMSC＋LX2（LPS刺激）组、TLR4阻断剂＋LX2（LPS刺激）组、LX2（LPS刺激）组、BMSC（LPS刺激）组、LX2（无LPS刺激）组,培养6、12、36、48 h;收集上清,ELISA检测IL-8及TGFβ表达,RT-PCR检测LX2的TLR4、Myd88及NF-κB的表达,Western Blot检测TGFβ、SMA、ColⅠ、MyD88、TLR4表达。免疫荧光检测NF-κB细胞内表达情况。结果 LPS可以刺激LX2活化,活化的LX2分泌IL-8及TGFβ增多,TGFβ、SMA、ColⅠ、MyD88、TLR4表达增加,NF-κB p65主要为核内表达。与BMSC共培养后,LPS导致的LX2活化减弱,LX2的TGF-β、SMA、ColⅠ、MyD88、TLR4的表达下降,NF-κB p65胞浆表达为主。结论 BMSC可以通过干预LPS-TLR4通路抑制LX2的活化。     

小型猪骨髓间充质干细胞超顺磁氧化铁、增强型绿色荧光蛋白双标记及体外磁共振成像示踪的研究

目的 探讨超顺磁氧化铁(SPIO)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)体外双标记、磁共振成像(MRI)示踪1型糖尿病(T1DM)小型猪骨髓间充质干细胞(BMSCs)的可行性和标记方法.方法 采集T1DM小型猪骨髓,密度梯度离心和贴壁培养法分离BMSCs.选用携带EGFP慢病毒(LV)颗粒转染BMSCs.选用SPIO和左旋多聚赖氨酸(PLL)复合物标记LV-EGFP转染的BMSCs.对SPIO标记细胞进行普鲁士蓝染色、透射电镜观察和体外MRI.结果 LV-EGFP与BMSCs转染复数(MOI)为30∶1转染后96 h荧光表达最强,阳性转染率43.2%.Fe3+标记浓度为25 mg/L BMSCs阳性标记率93.1%.透射电镜检测发现,SPIO粒子密集于BMSCs细胞质,次级溶酶体内多见.MRI显示,Fe3+标记浓度为25 mg/L、1×104/ml细胞浓度标记后3周和6周在快速自旋回波序列(TSE)T1WI、TSET2WI及快速小角度激发成像(FLASH)T2*WI信号强度变化率(△SI)依次为12%、41%、63%和7%、28%、46%,均为后二者大于前者(分别P＜0.01和P＜0.05),提示SPIO该标记浓度和细胞密度标记后3周和6周在T2WI及T2*WI呈现较明显的信号变化.结论 采用体外EGFP和SPIO双重标记的方法,结合MRI和细胞化学染色法可以稳定地对T1DM小型猪BMSCs进行体外示踪.

Abstract：

Objectives To track bone marrow stem cells (BMSCs) labeled by enhanced green fluorescent protein (EGFP) and superparamagnetic iron oxide ( SPIO ) -poly-L-lysine (PLL) compound by MRI in vitro for autotransplantation into pancreas of type 1 diabetes miniature pigs. Methods The BMSCs were isolated by density gradient centrifugation and attachment culture from type 1 diabetes minipigs' bone marrow. Expressional intensity of EGFP in BMSCs transfected lentivirus-EGFP with a multiplicity of infection Different magnetic resonance scanning protocols were carried out on various density BMSCs labeled by different concentration of SPIO in various time-point in vitro. Results When SPIO concentration was 25mg/L (count in Fe3 + ), the positive Fe3+ -labeling rate of BMSCs was 93. 1%. Most of SPIO particles in BMSCs' cytoplasm were observed in secondary lysosomes, but they were not detected in important organelle as cell nucleus. Comparing with gelatin the MRI of BMSCs labeled with SPIO in the condition with 1 ×104/ml cells density and 25 mg/L Fe3+ concentration in vitro, the signal intensity changes (△SI) after BMSCs labeled with SPIO 3 weeks and 6 weeks in TSE T1WI, TSE T2WI and FLASH T2 * WI sequences were 12%, 41%, 63% and 7%, 28%, 46% respectively (P ＜ 0.01 and P ＜ 0.05, respectively).Conclusions The data showed that the porcine BMSCs labeled with SPIO and EGFP could be traced successfully in vitro by MRI in the suitable sequences.     

凝血酶激活的纤溶抑制物编码区基因多态性与心肌梗死相关性探讨

目的：探讨TAFI编码区基因单核苷酸多态性与心肌梗死（MI）的关系。方法：应用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性分析技术（PCR-RFLP）检测100例MI患者和90例正常对照者的CPB2基因2个位点G505A和C1040T的多态性。结果：CPB2基因G505A位点的3种基因型（G505G、G505A、A505A）频率在MI组和对照组分别为35（35%）、54（54%）、11（11%）和32（35.6%）、46（51.1%）、22（24.4%）,等位基因G、A频率在MI组和对照组分别为124（62.0%）、76（38.0%）和110（61.1%）、70（38.9%）;C1040T位点的3种基因型（C1040C、C1040T、T1040T）频率在MI组和对照组分别为32（32%）、53（53%）、15（15%）和31（31.4%）、49（54.4%）、10（11.2%）,等位基因C、T频率在MI组和对照组分别为117（58.5%）、83（41.5%）和111（61.7%）、69（38.3%）,2组之间基因型及等位基因频率分布差异无统计学意义（G505A位点：χ^2=1.6757,P=0.8524;χ^2=0.7881,P=0.6973;C1040T位点：χ^2=0.6482,P=0.3958;χ^2=0.7231,P=0.5291）。结论：编码TAFI的CPB2基因2个位点G505A和C1040T的基因多态性与MI没有明显关系。     

不同年龄段慢性肝衰竭患者自体骨髓干细胞体外增殖能力观察

目的观察不同年龄段慢性肝衰竭患者自体骨髓间充质干细胞体外增殖能力的特点。方法在慢性肝衰竭患者30例和非肝病患者30例，各分3个组，即A组为20～35岁，B组为35～55岁和c组为〉55岁。取骨髓血50毫升，采用密度梯度离心法分离出单个核细胞，接种于56．7cm2培养皿内，观察细胞生长情况，并在第7天计数集落形成单位；当贴壁细胞融合后进行传代，计算增至治疗所需细胞数量的传代时间和细胞增殖率。结果在慢性肝衰竭患者，A组为6例，B组为18例，C组为6例；在非肝病组，分别为7、12和11例；在肝衰竭患者A组、B组和C组每皿细胞集落单位分别为15.3±8．7×10^6、8．6±5．2×10^6和4．2±3．6×10^6，而在非肝病患者则分别为14．7±7．1×10^6、13．5±7．4×10^6和10-3±4．9×10^6（P〈0．05）；第一代细胞倍增时间比较，肝衰竭患者A组、B组和C组分别为178．7±79．6h、264．1±102．3h和457．7±155．6h，而非肝病患者则分别为1563±62．5h，192．7±88．6h和311．6±142．8h（P〈0．05）；第二代细胞倍增时间比较，肝衰竭患者也明显比非肝病患者延长。结论大于55岁的慢性肝衰竭患者自体骨髓十细胞体外增殖能力明显降低。在选择千细胞移植治疗时，宜选择其他来源的细胞。     

苯那普利对缺氧复氧心肌心胞内钙离子的影响及机制研究

目的研究苯那普利对乳鼠缺氧复氧心肌细胞内钙离子浓度的影响及作用机制。方法采用纯化培养的乳鼠心肌细胞复制缺血再灌注模型。实验分为4组,每组8例：空白对照组、单纯缺氧复氧组（H／R）、缺氧复氧＋苯那普利（1×10^6mol／L）组、缺氧复氧＋苯那普利（1×10^6mol／L）＋缓激肽B2受体拮抗剂（HOE140）（1×10^6mol／L）组。细胞缺氧1h,复氧2h后取细胞培养液测定乳酸脱氢酶（LDH）,取细胞测定超氧化物歧化酶（SOD）的活性和丙二醛（MDA）含量,测定细胞内钙浓度。结果单纯缺氧复氧组与对照组比较,LDH、MDA、[Ca^2＋]i含量升高,SOD活性下降（P〈0．01）;苯那普利组与缺氧复氧组比较,LDH、MDA、[Ca^2＋]i含量降低,SOD活性升高（P〈0．01）;苯那普利＋HOE140组与苯那普利组比较,LDH、MDA、[Ca^2＋]i含量升高,SOD活性下降（P〈0．01）。结论苯那普利能降低细胞内钙离子浓度,有明显保护心肌的作用。其作用可能与激活激肽-缓激肽释放系统、抑制缓激肽的降解有关。     

MRI evaluation of local myocardial treatments: epicardial versus endocardial (Cell-Fix catheter) injections

AIMS: We compared two procedures for local myocardial treatment: transepicardial versus transendocardial catheter injection. Transepicardial injections were performed under direct surgical visualization whereas transendocardial injections were performed using electrophysiological guidance. METHODS: A left ventricle (LV) myocardial infarction (MI) was surgically created in 14 sheep. At 3 months, gadolinium was injected IV followed by the injection of super paramagnetic iron oxide (SPIO) into MI. Animals were divided in two groups: transepicardial injection (Group I) versus transendocardial (Group II) using "Cell-Fix" catheter injection. This catheter was developed to identify by electrophysiology the infarcted area and to stabilize injections suctioning the device to the endocardium. Postgadolinium delayed-enhancement magnetic resonance imaging (MRI) was performed to stain the infarct size. SPIO injections were used to assess the magnitude of the treated area. The ratio between SPIO black stained treatment areas and white gadolinium stained infarcted areas was calculated using MRI. RESULTS: The electrophysiological recordings by the catheter for the MI versus normal LV wall were: R wave amplitude 4.16 versus 12.08 mV (P = 0.003), slew rate (slope of the signal) 0.36 V/s versus 1.04 V/s (P = 0.008). The ratio of the SPIO diffusion into the MI was 41.2 +/- 8.1% for surgical and 63.7 +/- 8.2% for percutaneous endocardial injections (P = 0.0132). CONCLUSION: MRI allows evaluation of the extent of local myocardial treatments. The differences shown between epicardial and endocardial injections concerning the distribution of SPIO can be justified by the methodology of injection and by a more precise MI detection by electrophysiology. In conclusion, electrophysiological recordings to guide injections is superior to direct surgical visualization in terms of injecting into infarcted tissue.     

甘露醇预处理后骨髓间充质干细胞移植对血管性痴呆大鼠认知功能及脑源性神经生长因子表达的影响

目的探讨甘露醇预处理后骨髓间充质干细胞（BMSCs）静脉移植对血管性痴呆（VD）大鼠认知功能及脑组织中脑源性神经生长因子（BDNF）表达量的影响。方法全骨髓培养结合细胞贴壁法分离纯化大鼠BMSCs。取健康雄性sD大鼠79只,随机分为假手术组（10只）和模型组（69只）。采用间隔3d分别结扎双侧颈总动脉法制备VD模型。造模后4周,将纳入的32只模型组大鼠随机分为甘露醇预处理BMSCs移植组（简称甘露醇预处理组;尾静脉注射甘露醇1．5g／kg,预处理10～30min后,经尾静脉注射1×10^6／ml BMSCs 1ml）、BMSCs移植组（注射等量的BMSCs,不注射甘露醇）和培养基对照组（注射等量的基础培养液）。剔除死亡大鼠,上述3组分别有9、11、8只,假手术组7只纳入统计。干预后4周,采用Morriss水迷宫实验检测大鼠认知功能,酶联免疫吸附法检测大鼠脑组织中BDNF的含量。结果（{）4组相同时间点的比较,BMSCs移植组比培养基对照组逃避潜伏期缩短（均P〈0．01）,平台象限滞留时间延长（P〈0．05）;甘露醇预处理组比BMSCs移植组逃避潜伏期明显缩短（P〈0．01）,平台象限滞留时间延长（P〈0．05）,且均与假手术组水平接近（P〉0．05）。②在额叶皮质和海马区,BMSCs移植组的BDNF含量均高于培养基对照组（P〈0．01）;甘露醇预处理组则高于BMSCs组（P〈0．01）,但均低于假手术组的水平（P〈0．01）。结论与单独静脉注射BMSCs比较,甘露醇预处理后BMSCs静脉移植治疗VD大鼠模型,认知功能改善程度更佳;额叶皮质和海马中BDNF的表达量更高。