超声联合一氧化氮微泡体外干预骨髓间充质干细胞安全性探讨

目的研究超声联合一氧化氮(NO)微泡体外干预大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的安全性。方法体外分离培养大鼠BMSCs,分为超声联合NO微泡组(包括1∶70,1∶50,1∶20浓度亚组)及空白对照组,体外干预后MTT法检测BMSCs增殖,PI染色流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期。结果与空白对照组比较,1∶20浓度组显著抑制BMSCs增殖(P<0.05);1∶50浓度组与1∶20浓度组明显诱导细胞凋亡(P<0.05)。结论超声联合NO微泡体外干预BMSCs,1∶70浓度对其是安全的。     

VEGF基因转染间充质干细胞移植与单纯间充质干细胞移植对大鼠心肌梗死的疗效对比

目的探讨VEGF基因转染骨髓间充质干细胞与单纯骨髓间充质干细胞移植对大鼠心肌梗死的疗效。方法将SD大鼠建立心肌缺血模型,1周后随机取30只采用随机分组法分为3组,A组为联合移植组,B组为单纯干细胞移植组,C组为对照组,通过一系列检测,对比3组的疗效。结果 A组的疗效优于B组和C组,B组的疗效优于C组（P〈0.05）。结论 VEGF基因转染骨髓间充质干细胞移植比单纯骨髓间充质干细胞移植的综合疗效好。     

咯利普兰在骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化中的作用

目的 研究咯利普兰在体外骨髓间充质干细胞向成骨细胞诱导分化过程中的作用.方法 体外分离培养小鼠股骨骨髓间充质干细胞,随机分为咯利普兰10 μmol/L组(A组)和对照组(B组).骨髓间充质干细胞向成骨诱导分化后,检测碱性磷酸酶(ALP)活性;Western blot检测Runx2和骨钙素表达;茜素红染色观察钙结节形成情况.结果 与B组相比,A组ALP活性及Runx2、骨钙素表达均增加(P＜0.01或P＜0.05),钙结节形成更加明显.结论 咯利普兰能提高体外骨髓间充质干细胞向成骨细胞诱导分化的能力.     

自体骨髓间充质干细胞移植治疗兔缺血后肢的研究

目的研究自体骨髓间充质干细胞移植治疗兔缺血后肢的作用。方法16只新西兰大白兔随机分为2组：注射干细胞培养液组（对照组）;移植自体骨髓间充质干细胞组（移植组）。抽取自体骨髓行干细胞体外培养,移植到兔缺血后肢,以ECT检测其血流变化。结果骨髓间充质干细胞成功移植到兔缺血后肢,ECT检测显示在2周后移植组兔后肢血流明显高于对照组。结论自体骨髓间充质干细胞移植能有效改善兔缺血后肢血供。     

低频超声辐射对化学治疗药物致人肺癌A549细胞凋亡作用的影响

目的探讨低频超声辐射是否增加化学治疗（化疗）药物对人肺癌细胞的凋亡作用。方法将人肺癌A549的细胞分成4组：空白对照组常规培养;单纯使用顺氯氨铂组（单纯化疗组,药物终浓度5 mg/L）;单纯低频超声辐射处理组（单纯超声组,频率30 kHz,发射强度2.8 W/cm2,作用时间5 min）以及低频超声辐射联合顺氯氨铂化疗组（超声联合化疗组,超声治疗和化疗方法同单纯超声组和单纯化疗组）。经过各个条件处理的细胞培养36 h后应用流式细胞仪检测A549细胞凋亡率。结果超声联合化疗组A549细胞凋亡率［（7.84±2.74）%］明显高于单纯化疗组［（5.06±0.88）%］、单纯超声组［（2.71±0.99）%］和空白对照组［（2.64±0.99）%］,差异均有统计学意义（P= 0.012,P= 0.004,P=0.010）,同时超声联合化疗组及单纯化疗组A549细胞凋亡率也明显高于空白对照组,差异有统计学意义（P=0.004）,单纯超声组与空白对照组间A549细胞凋亡率差异无统计学意义（P=0.055）。结论体外低频超声辐射可以增加化疗药物对人肺癌细胞的凋亡作用。     

miR-21对绝经后骨质疏松骨髓间充质干细胞成骨能力影响的研究

目的 探讨miR-21对绝经后骨质疏松骨髓间充质干细胞（PMOP-hBMMSC）成骨能力影响.方法 分离培养正常人（H-hBMMSCs）和绝经后骨质疏松患者（PMOP-hBMMSCs）的骨髓间充质干细胞,并对两组细胞的成骨能力进行比较.转染上调PMOP-hBMMSCs中miR-21表达,观察分析其对成骨能力的影响.Real time RT-PCR和Western Blot比较miR-21在三组细胞间的表达差异,同时检测三组成骨标志性基因Runx2和Osterix的表达.结果 PMOP-hBMMSCs组中的miR-21表达水平、ALP的活性以及钙结节染色面积都高于PMOP组（P＜0.05）,与H-hBMMSCs正常对照组差异无统计学意义（P＞0.05）;RT-PCR和Western Blot结果显示成骨诱导7d后,转染后高表达Runx2和Osterix mRNA和蛋白水平均高于PMOP组（P＜0.05,P＜0.01）,与H-hBMMSCs正常对照组差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 转染miR-21后的PMOP-hBMMSCs成骨能力增强.     

CXCR4基因转染对骨髓间充质干细胞体外生物学行为的影响

目的观察对转染CXCR4基因的骨髓间充质干细胞体外生物学行为的影响。方法将培养的骨髓间充质干细胞分为3组,GFP组、CXCR4~+组、CXCR4~-组,转染趋化因子受体CXCR4,并用免疫荧光细胞化学法、流式细胞仪法及Transwell小室细胞趋化实验,体外研究了CXCR4高表达及低表达对MSCs增殖、分化与迁移能力的影响。结果 CXCR4高表达及低表达均不影响MSCs的增殖能力,对其向肺组织分化的能力也没有影响。与GFP-MSCs组相比,CXCR4~+-MSCs组迁移的细胞数量明显升高,而CXCR4~--MSCs组迁移细胞数量差异无显著性。结论 CXCR4高表达及低表达不改变MSCs的增殖、分化能力,然而CXCR4高表达明显增强MSCs向炎症病灶的迁移能力。说明CXCR4高表达的MSCs移植入体后将会更快速、更大量地到达病变区域参与组织修复,明显增强疗效。     

HSV-1体外感染骨髓间充质干细胞的实验研究

目的:在体外原代培养大鼠骨髓间充质干细胞,观察单纯疱疹病毒1型(HSV-1)感染骨髓间充质干细胞情况。方法:分离骨髓间充质干细胞,并对其作鉴定。用HSV-1感染骨髓间充质干细胞,提取总DNA,PCR法扩增骨髓间充质干细胞内的HSV-1特异性片段。结果:骨髓间充质干细胞经14d诱导后,碱性磷酸酶含量增高,形成钙结节,表现出成骨细胞特性。HSV-1感染骨髓间充质干细胞,细胞出现典型的病变,PCR法成功扩增出骨髓间充质干细胞内的HSV-1特异性片段。结论:大鼠骨髓间充质干细胞在体外可以向成骨细胞方向分化,可作为组织工程学的种子细胞。HSV-1可以在体外感染骨髓间充质干细胞。     

Notehl对人脐带问充质干细胞增殖、黏附及迁移影响的体外研究

目的探讨Notchl基因的重组腺病毒转染对人脐带间充质干细胞（humanumbilicalcordmesenchymalstemcells,hUCMSCs）增殖、黏附及迁移能力的影响。方法按照不同腺病毒感染hUCMSCs分为实验组（Ad-Notchl）、阴性对照组（Ad—GFP）与空白对照组。以最佳MOI转染hUCMSCs,观察细胞形态变化以及GFP蛋白的表达。比较3组细胞增殖能力、细胞周期、黏附能力及迁移能力。WesternBolt检测3组细胞Notchl蛋白的表达水平。结果荧光下观察腺病毒成功感染细胞,阴性对照组和实验组均出现了GFP的表达,且随培养时间的延长表达量增高,可见光下观察实验组细胞增殖速度较快。实验组细胞的增殖能力（48、72、96h）、黏附能力（12、16、20h）及迁移能力均较阴性对照组及空白对照组增强（P〈0．05）。WesternBolt检测实验组细胞Notchl蛋白的表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组（P〈0．05）。结论Notchl能明显促进hUCMSCs的增殖、黏附和迁移。     

骨髓间充质干细胞异体移植对大鼠肝细胞增殖影响的实验研究

目的探讨骨髓间充质干细胞治疗急性肝衰竭的机制。方法全骨髓贴壁法培养扩增原代SD大鼠骨髓干细胞,传代培养,形态学、生长曲线及免疫表型鉴定骨髓间充质干细胞,移植治疗D-氨基半乳糖联合脂多糖致肝衰竭大鼠,观察干预治疗后1d、3d、5d、7d肝组织病理学改变、肝组织PCNA蛋白、CyclinDlmRNA表达量。结果原代培养大鼠骨髓间充质干细胞传代后,形态较均一,为梭形或纺锤形,高表达CD90（94．3％）,CD29（99．4％）,不表达CD11b／c（5．7％）,CD45（3．2％）。骨髓间充质干细胞移植减轻肝脏组织病理损伤（P〈0．05）。BMSCs治疗组PCNA的蛋白表达高于对照组（P〈0．01）。干预后不同时间点治疗组细胞周期蛋白D1的mRNA表达高于对照组（1．182±0．248VS0．468±0．053、0．858±0．114vs0．218±0．178）,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论骨髓间充质干细胞移植减轻肝脏病理损伤,上调细胞周期蛋白DlmRNA的表达,促进肝再生,对急性肝衰竭有治疗作用。     

骨髓间充质干细胞对兔实验性自体免疫性葡萄膜炎的影响

目的研究骨髓间充质干细胞(BMSCs)对兔实验性自体免疫性葡萄膜炎(EAU)的治疗作用及其发挥作用的可能机制。方法从5只新西兰大白兔股骨骨髓中分离、培养BMSCs并进行传代,第3⁴代细胞用于实验。将24只新西兰大白兔采用随机数字表法随机分为正常对照组、模型对照组和BMSCs干预组,每组8只。正常对照组不作任何处理,模型对照组和BMSCs干预组建立EAU模型。造模成功后将0.1 ml细胞数为2×106/ml的BMSCs悬液经双眼玻璃体腔注射给BMSCs干预组。模型对照组经双眼玻璃体腔注射0.1 ml磷酸盐缓冲液。比较3组新西兰大白兔的眼部表现、组织病理学分级和血清/房水中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果培养的细胞呈梭形生长,经流式细胞仪检测:CD105(+),CD34和CD45(-)。正常对照组眼前节、眼底表现、B超及苏木素-伊红染色结果未见异常。BMSCs干预组眼前节炎症反应评分及组织病理学分级均低于模型对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型对照组血清/房水中TNF-α水平与正常对照组相比升高,差异有统计学意义(P<0.05)。BMSCs干预组血清/房水中TNF-α水平与模型对照组相比下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BMSCs对兔EAU有治疗作用,其机制可能是通过降低血清/房水中炎性因子TNF-α的水平。     

骨髓间充质干细胞对急性肝衰竭大鼠肠源性内毒素血症的保护作用

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对硫代乙酰胺(TAA)所致急性肝衰竭大鼠肠源性内毒素血症(IETM)的保护作用。方法取雄性Wistar大鼠的骨髓贴壁培养获得BMSCs,取30只雌性Wistar大鼠随机分为正常组、TAA模型组和BMSCs治疗组,每组10只。TAA300mg/kg灌胃建立急性肝衰竭模型,24h后重复灌胃,正常组给予磷酸盐缓冲液(PBS)2ml灌胃,第2次灌胃后将BMSCs经尾静脉注射到BMSCs治疗组中,正常组和TAA模型组给予等量PBS注射。BMSCs治疗72h后处死。腹主动脉采血,检测血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)以及血浆内毒素含量,取部分肝组织及回肠作常规病理切片检查。结果与正常组比较,TAA模型组大鼠血清ALT,AST活性以及血浆内毒素水平均显著上升(P<0.05),BMSCs治疗组大鼠血清ALT,AST活性以及血浆内毒素水平与模型组相比均显著降低(P<0.05)。肝脏病理切片显示BMSCs能够明显减轻TAA对肝组织的炎症性破坏。结论 BMSCs尾静脉移植对TAA引起的急性肝衰竭大鼠IETM有一定的保护作用。     

褪黑素对大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的影响

目的探讨褪黑素(MT)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成脂分化的影响,以及MT的作用机制。方法取大鼠骨髓分离培养BMSCs,经传代脂向分化,分组进行干预。对照组为单纯脂向分化(模型)组;实验A组用MT进行干预;实验B组用MT和其受体拮抗剂2-苯基-N-乙酰色胺(LZD)共同干预。检测脂肪细胞的比例来比较各组的脂化程度,并应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测各组细胞中成脂转录因子过氧化物酶体增殖体激活受体γ(PPARγ)mRNA的表达。结果实验A组脂化程度明显低于对照组和实验B组(P<0.05)。结论MT能抑制BMSCs向成脂方向分化,并通过其受体机制起作用。这可能与骨质疏松的病因学有关。     

骨髓间充质干细胞调控肝星状细胞增殖和胶原合成的实验研究

目的研究骨髓间充质干细胞（BMSCs）对肝星状细胞（HSCs）增殖、胶原合成的影响。方法 （1）BMSCs对HSCs增殖的影响：利用transwell共培养体系,按1：1细胞比例在6孔塑料培养板上室接种BMSCs（1×105cells/well）,下室接种HSCs;对照组成纤维细胞代替BMSCs接种于上室;空白组为HSCs单独培养。培养24、48、72h后MTT法检测HSCs增殖抑制率;（2）BMSCs对HSCs胶原合成的影响：实验分为3组,A：HSCs组,B：HSCs＋TGF-β1组,C：共培养＋TGF-β1组。按上述方法进行BMSCs、HSCs共培养,培养液中加入TGF-β1诱导活化。培养72h后,取出BMSCs并换液,24h后收集培养液,用ELISA方法测定Ⅰ型胶原浓度,收集HSCs,RT-PCR检测HSCsα-SMA以及Ⅰ型胶原的基因表达。结果培养24、48、72 h后,共培养组较对照组可明显提高HSCs增殖抑制率（P〈0.01）;比较B组,C组Ⅰ型胶原浓度显著下降（P〈0.01）,同时HSCsα-SMA及Ⅰ型胶原基因表达出现显著下调（P〈0.01）。结论 BMSCs在体外可明显抑制HSCs增殖以及抑制TGF-β1诱导的α-SMA表达和Ⅰ型胶原合成。     

电针协同BMSCs移植治疗对脑出血大鼠MAP-2表达的影响

目的探讨电针（Ea）协同骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植治疗对脑出血大鼠微管相关蛋白（MAP-2）表达的影响。方法采用大鼠脑尾核壳注射胶原酶与肝素制备脑出血动物模型,并分为Ea组、Ea—BMSCs组、BMSCs组和生理盐水（NS）组．分别给予Ea刺激、Ea刺激协同BMSCs移植、BMSCs移植和注射生理盐水,免疫组织化学方法观察各组在不同时间点MAP-2的表达。结果MAP-2表达在NS组各时间点之间无明显差异,在Ea组、BMSCs组和Ea—BMSCs组于第5天时达高峰。各组同-时间点比较,Ea组（1d除外）、BMSCs组和Ea-BMSCs组的MAP-2表达高于NS组（P〈0．05）,Ea—BMSCs组高于Ea组及BMSCs组（P〈0．05）。结论Ea协同BMSCs移植较单纯Ea刺激或BMSCs移植更能促进脑出血大鼠MAP-2蛋白表达。提示Ea协同BMSCs移植有助于脑组织结构重塑。     

骨髓间充质干细胞对脓毒症急性肺损伤大鼠肺内NF-κB影响的研究

目的 建立大鼠脓毒症急性肺损伤模型,探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）在脓毒症大鼠急性肺损伤中的肺保护作用及可能机制,为临床治疗脓毒症急性肺损伤提供新的理论和实验依据。方法 全骨髓培养法制备BMSCs。36只成年Wistar大鼠（150±15）g随机分为3组,Sham组、CLP组和BMSCs组,每组12只,CLP组和BMSCs组采用盲肠结扎穿孔术（CLP）建立脓毒症急性肺损伤模型,盲肠根部丝线结扎,盲肠切口5mm,肠内容物漏出,将其回纳入腹腔,关腹。Sham组大鼠仅翻动盲肠,不结扎穿孔。BMSCs组术后经尾静脉注射BMSCs细胞悬液1ml（1×10^6／ml）。实验结束后,应用ELISA测定血浆IL-10、MIP-2水平,左肺采用Western blot测定肺内NF-κB的表达水平,右肺制作病理切片,HE染色,并在光镜下观察肺组织病理结构改变。结果 CLP组的血清MIP-2水平明显高于Sham组和BMSCs组,BMSCs组的血清MIP-2水平明显高于Sham组,差异有统计学意义（P〈0．05）;3组的血清IL-10水平比较差异无统计学意义（P〉0．05）：3组的NF-κB表达水平比较差异有统计学意义（P〈0．05）。肺组织病理结果 示CLP组和BMSCs组肺内大量炎症细胞浸润、肺间质水肿、肺内出血,BMSCs组症状较CLP组明显减轻。结论 脓毒症急性肺损伤时。血浆MIP-2表达明显升高,肺内出血、水肿、大量炎症细胞浸润。BMSCs通过调控肺内炎症细胞NF-κB入核,使其促炎细胞因子MIP-2表达减少。减少中性粒细胞浸润起肺保护作用,暂不能说明BMSCs对IL-10有影响。     

三七总皂甙对大鼠骨髓基质细胞OPG/RANKL表达比的影响

目的观察三七总皂甙（PNS）对大鼠骨髓基质细胞中骨保护素（OPG）/核因子Kappa B受体活化因子配体（RANKL）表达的影响,探讨三七总皂甙防治骨质疏松的作用机制。方法分离、培养大鼠骨髓基质细胞（BMSCs）,取P3代细胞,分成4组,各PNS组终浓度分别为50、100、200 mg/L;对照组不进行特殊处理。培养7 d后,采用RT-PCR和Western Blotting检测OPG、RANKLmRNA和蛋白的表达并计算OPG/RANKL比值。结果 RT-PCR显示：PNS组（50、100、200 mg/L）和对照组OPG/RANKLmRNA表达比分别为（0.40±0.07）、（0.41±0.08）、（0.78±0.11）和（0.23±0.05）;蛋白印迹实验显示PNS组（50、100、200 mg/L）和对照组OPG/RANKL蛋白表达比分别为（0.25±0.06）、（0.64±0.13）、（0.28±0.09）和（0.13±0.03）。在mRNA和蛋白水平,PNS组OPG/RANKL比值均明显高于对照组,100 mg/L PNS组最高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论三七总皂甙可增加骨髓基质细胞中OPG的表达,减少RANKL的表达。     

多聚赖氨酸修饰SPIO标记骨髓间充质干细胞体外磁共振成像研究

目的利用多聚赖氨酸（PLL）修饰的超顺磁性氧化铁粒子（SPIO）,即超顺磁性氧化铁纳米粒子（SPIO-PLL）标记大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）,探讨其对BMSCs生物学特性的影响以及3．OT磁共振成像（Mm）上T2信号的改变。方法将传代培养BMSCs与不同铁浓度的SPIO—PLL溶液共同孵育24h后行普鲁士蓝染色。观察BMSCs对不同浓度SPIO-PLL的摄取。确定SPIO—PLL标记干细胞的最佳浓度。同时采用四唑盐比色法分析不同浓度SPIO—PLL溶液对大鼠BMSCs生长活性的影响。取最适浓度的SPIO-PLL标记BMSCs．经3．0TMRI,观察T2WI信号的改变。结果SPIO．PLL标记BMSCs生物活性没有明显影响,与未标记细胞的生长活性比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;同时铁浓度不同（10、40、80μgFe／mL）的SPIO-PLL溶液标记细胞成像可使T2WI图像信号降低,3种浓度的信号变化率比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论SPIO—PLL可以标记BMSCs,且对BMSCs的生物学活性没有影响,MRIT2WI序列可敏感显像磁性标记的干细胞．有望为MRI和光学成像活体示踪BMSCs提供技术基础。