肝细胞生长因子对实验性急性胰腺炎细胞凋亡作用的研究

目的:观察外源性肝细胞生长因子(HGF)对小鼠轻症实验性急性胰腺炎的炎症反应及胰腺细胞凋亡的作用。方法:以雨蛙肽腹腔注射诱发小鼠轻症实验性急性胰腺炎。第1组以盐水腹腔注射作为对照,第2、3及4组每小时腹腔注射雨蛙肽诱发急性胰腺炎;第3组在造模前及造模中两次皮下注射重组人肝细胞生长因子(rhHGF);第4组同时皮下注射rhHGF及其单抗。观察HGF对炎症反应的干预作用及对腺泡细胞凋亡的影响。结果:炎症小鼠予每公斤体重4、20μgrhHGF时,与单纯炎症组相比,血清淀粉酶、脂肪酶下降,胰腺组织学炎症评分减少,胰腺腺泡细胞TUNEL凋亡指数增加,caspase3活性增强。予每公斤体重4或20μgrhHGF时,其效应无显著性差异。同时予rhHGF单抗的小鼠,上述指标与单纯炎症组相比差异无显著性。结论:HGF能减轻雨蛙肽诱导的小鼠轻症实验性急性胰腺炎。HGF单抗能消除HGF的生物学作用。HGF可以促进急性胰腺炎时腺泡细胞的凋亡,这可能是其保护胰腺的作用机制之一。     

人胃癌细胞5-氟尿嘧啶耐药机制的研究

目的：探讨人胃腺癌SGC7901／R耐药细胞株产生耐药的机制。方法：以人胃腺癌5-FU耐药细胞株SGC7901／R和其亲本细胞SGC7901为对象，MMT法进行体外药敏实验，：RT-PCR法检测胸腺嘧啶合成酶(TS)，胸腺嘧啶激酶(TK)，乳清酸磷酸核糖转移酶(OPRT)，多药耐药相关蛋白(MRP)，多药耐药基因(mdr-1)的转录情况，流式细胞仪测定肿瘤细胞内药物蓄积浓度。结果：SGC7901／R耐药细胞对5-FU耐药性能确切，并对顺铂(DDP)，柔红霉素(DNR)存在不同程度的交叉耐药。TS，mdr-1在耐药细胞SGC7901／R中表达显著增强，TK表达减少，OPRT在两种细胞中表达无显著差别。MRP在两种细胞都没有表达。耐药细胞SGC7901／R内DNR药物蓄积浓度降低。结论：人胃腺癌5-FU耐药细胞株SGC7901／R耐药机制与嘧啶合成途径中重要的酶TS和TK表达的改变相关，5-FU耐药细胞株具有多药耐药(MDR)的特性，这与mdr-1基因翻译的P-糖蛋白的泵功能增强有关。     

肝细胞生长因子对小鼠轻症急性胰腺炎影响的实验研究

及时、有效地控制轻症急性胰腺炎可防止其向重症急性胰腺炎演变，因而具有重要的临床价值。近年来，肝细胞生长因子(HGF)能否减轻啮齿动物的急性胰腺炎正日益受到关注：目的：观察外源性HGF能否减轻小鼠轻症急性胰腺炎，并探讨其作用机制。方法：以雨蛙肽腹腔注射诱发小鼠轻症急性胰腺炎，在制模前和制模中予各组小鼠皮下注射不同浓度的重组人HGF(rhHGF)，部分小鼠同时皮下注射抗rhHGF、单抗。根据血清淀粉酶、脂肪酶水平、胰腺组织学炎症评分和胰腺超微结构的变化评估炎症程度，并测定胰腺匀浆中花生四烯酸代谢产物血栓素(TX)B2和6-酮(keto)-前列腺素(PG)Fla的水平。结果：与单纯炎症组相比，给予4μg／kg或20μg／kg rhHGF小鼠的血清淀粉酶、脂肪酶水平和胰腺组织学炎症评分显著降低，胰腺匀浆中TXB2水平显著降低，6-keto-PGFla。水平显著增高，但4μg／kg与20μg／kg rhHGF。的疗效无显著差异。给予rhHGF。的同时给予抗rhHGF单抗，小鼠的上述各项参数与单纯炎症组无显著差异。结论：外源性HGF能减轻雨蛙肽诱导的小鼠轻症急性胰腺炎，其机制可能与对花生四烯酸代谢的影响有关。抗HGF。单抗能抵消HGF的生物学作用。     

电压门控钠通道亚单位在大鼠肠易激综合征模型中变化的研究

背景：电压门控钠通道（VGSC）在神经元动作电位的产生和传递中起着极为重要的作用。近年来它与内脏高敏感性的关系越来越受到重视。目的：探讨VGSC亚单位的变化与大鼠肠易激综合征（IBS）内脏高敏感性之间的关系。方法：以新生大鼠直肠内气囊扩张制作IBS的动物模型，在其成年后取L6-S2脊髓背根神经节，采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）半定量法对背根神经节细胞表面VGSC Nav1．1、Nav1．6、Nav1．7、Nav1．8和Nav1．9五种α亚单位mRNA的含量进行检测．并以原位杂交的方法对Nav1．8的表达进一步加以确认；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法对大鼠肠道组织神经生长因子（NGF）的含量进行检测。结果：背根神经节细胞表面仅亚单位Nav1．8mRNA的表达增加，而Nav1．1、Nav1．6、Nav1．7和Nav1．9的表达没有改变，原位杂交定性分析也证实造模组Nav1．8含量增加；造模组肠道组织NGF的含量显著高于对照组。结论：新生大鼠直肠内气囊扩张使其脊髓背根神经节细胞Nay1．8mRNA的表达增加，而其他几种常见仅亚单位的含量均未发生改变。这种变化可能与肠道组织NGF表达的增加有关。     

抵抗素样分子-α在急性胰腺炎继发急性肺损伤中的表达和作用

背景:抵抗素样分子-α(RELM-α)是一个富含半胱氨酸的分泌蛋白,具有促进肺血管生成和收缩、抗细胞凋亡、诱导肺成纤维细胞分化和细胞外基质沉积的功能。然而,RELM-α在急性胰腺炎(AP)继发急性肺损伤中的作用尚未完全明确。目的:探讨RELM-α在AP继发急性肺损伤中的表达和作用。方法:45只Sprague-Dawley大鼠随机分为急性坏死性胰腺炎(ANP)组、急性水肿性胰腺炎(AEP)组和正常对照组,分别以3.5%牛磺胆酸钠和20%L-精氨酸建立ANP和AEP模型。光学显微镜下观察肺组织病理学表现;测定肺湿/干重系数、支气管肺泡灌洗液炎性细胞数量以及血清CRP、淀粉酶水平;蛋白质印迹法和免疫组化法检测肺组织RELM-α的表达和定位。结果:ANP组肺组织病理学评分、肺湿/干重系数、支气管肺泡灌洗液炎性细胞数量、血清CRP和淀粉酶水平、肺组织RELM-α表达水平均较AEP组和正常对照组显著升高(P0.05)。Spearman等级相关系数分析显示,肺组织RELM-α表达水平与肺组织病理学评分、肺湿/干重系数、支气管肺泡灌洗液炎性细胞数量呈正相关(P0.01)。线性回归模型分析显示,肺组织RELM-α表达水平与血清CRP、淀粉酶水平呈正相关(P0.05)。结论:RELM-α在AP急性肺损伤的肺组织中表达增高,其作为促炎细胞因子,参与激活炎性细胞,介导急性肺损伤发生,可作为监测AP预后的生物学标记物。     

肝细胞生长因子治疗重型急性胰腺炎的实验研究

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)有效治疗实验性重型急性胰腺炎(SAP)的可能性。方法72只雄性SD大鼠随机分为假手术组、对照组、治疗组和单抗组。对照组、治疗组和单抗组均灌注5%牛黄胆酸钠复制SAP模型;治疗组制模后即分别给予1、2、10μg/kg的重组人HGF(rhHGF)静脉注射,3h后重复1次;单抗组在制模并给予2μg/kg体重rhHGF的同时皮下注射0.8mg/kg的抗rhHGF单抗。各组分别于制模后3、6h取大鼠腹水、血、胰腺及肺脏组织,评价炎症程度。另取30只雄性SD大鼠随机分为对照组和治疗组,制模及制模后早期3h处理同前,制模3h后2μg/kg体重rhHGF每8h皮下注射给药,72h后比较两组大鼠存活率。结果给予2、10μg/kg体重rhHGF的治疗组大鼠,制模后3、6h血浆淀粉酶、脂肪酶水平和胰腺组织学炎症评分均低于对照组,制模后6h急性肺损伤较轻。制模72h后治疗组大鼠存活率为73.3%,对照组存活率为26.7%(P<0.01)。结论HGF治疗大鼠SAP,可以减轻炎症反应,提高早期预后。     

PIAS1基因沉默对雨蛙肽诱导胰腺腺泡细胞凋亡的影响

活化STAT蛋白抑制物(PIAS)1基因沉默可增强雨蛙肽诱导的胰腺腺泡细胞炎症反应。目的:探讨PIAS1基因沉默对雨蛙肽刺激胰腺腺泡细胞凋亡的影响。方法:AR42J胰腺腺泡细胞在Lipofectamine~(TM)2000介导下转染PIAS1-siRNA和阴性siRNA。将细胞分为PIAS1-siRNA+雨蛙肽组、阴性siRNA+雨蛙肽组、脂质体+雨蛙肽组、PBS+雨蛙肽组和对照组。以DNA Ladder、Hoechst 33258染色检测细胞凋亡情况,流式细胞术测定细胞周期和细胞凋亡率,RT-PCR和蛋白质印迹法检测1353、Bax、Bcl-2、caspase-3 mRNA和蛋白表达。结果:与其余各组相比,PIAS1-siRNA+雨蛙肽组DNA梯度裂解条带明显增加,荧光着色阳性细胞数增多;G1期细胞数增多,S期细胞数减少,细胞凋亡率增加;p53、Bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达明显上调,Bcl-2 mRNA和蛋白表达下调(P均0.05)。结论:PIAS1基因沉默可增强雨蛙肽活化的caspase-3凋亡途径诱导的胰腺腺泡细胞凋亡,为通过调控PIAS1表达治疗急性胰腺炎提供新的理论依据。     

靶向封闭EEF1A2对胰腺癌细胞凋亡的作用及其机制研究

目的 观察靶向封闭EEF1A2基因对胰腺癌细胞株凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 体外转录制备2对EEF1A2 siRNA,应用脂质体技术转染胰腺癌细胞株BxPC-3,半定量RT-PCR、蛋白质印迹法检测转染前后EEF1A2基因表达的变化.运用膜联蛋白V/碘化丙啶法检测细胞凋亡率;蛋白质印迹法检测细胞中caspase-3、caspase-8、caspase-9、聚二磷酸腺苷核糖多聚酶(PARP)细胞色素C和Bid等凋亡相关蛋白表达变化.结果 2对EEF1A2 siRNA均能有效降低BxPC-3细胞中EEF1A2的表达,其中第2对siRNA静默效果更佳,EEF1A2在mRNA和蛋白质水平的表达抑制率均达75%左右.抑制BxPC-3细胞中EEF1A2的表达后,细胞的早期凋亡率为15.28%±3.65%,显著高于阴性对照组的10.11%±3.05%和空白组的9.41%±4.14%,同时伴随出现caspase-3、caspase-8、caspase-9、PARP和Bid的蛋白活化增强和细胞色素C表达增加.结论 抑制EEF1A2表达能明显诱导胰腺癌细胞BxPC-3的凋亡,而死亡受体途径和线粒体途径的激活可能均参与凋亡的发生.