Axin1调节骨骼肌GLUT4蛋白表达的作用研究

目的：探讨体轴发育抑制因子（Axin1）调节骨骼肌葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)蛋白表达的作用及其机制。方法：利用RNAi干扰的Axin1腺病毒（Ad-siAxin1）感染C2C12小鼠骨骼肌细胞敲低Axin1,荧光显微镜和MTS实验明确Ad-siAxin1最佳感染浓度和时间。分别用携带绿色荧光蛋白的腺病毒（Ad-GFP）、Ad-siAxin1、载体质粒（vector）和Axin1质粒转染C2C12小鼠骨骼肌细胞敲低或过表达Axin1蛋白,Western印迹检测Axin1、端锚聚合酶蛋白（TNKS）和GLUT4蛋白水平。结果：荧光显微镜和MTS实验结果显示,在C2C12小鼠骨骼肌细胞中Ad-siAxin1作用的最佳浓度和时间分别为160μL和48 h。Western印迹结果显示,与Ad-GFP组相比,Ad-siAxin1组中Axin1蛋白降低（t=6.746,P<0.01）。Ad-siAxin1组TNKS蛋白水平降低（t=4.019,P<0.05）,GLUT4蛋白水平下调（t=3.248,P<0.05）。与vector组相比,转染Axin1质粒后,Axin1蛋白水平上...     

药物中微量元素的测定

目的：检测营养制剂善存片中各种微量元素的含量,并就样品前处理及测定进行方法学探讨。方法：采用３ 种不同方法处理善存片样品,然后用电感耦合等离子体发射光谱仪优化测试条件后,测定铁、镁、锌、锰、铬、钼、钙等１１ 种微量元素的含量。结果：各种微量元素的含量与药盒所标数据基本一致。结论：确定了先用硝酸消化,再用石墨炉灰化为最佳样品处理方法。测定时选４ 点作标准工作曲线,既不会使操作太复杂,又能保证测定的精密度     

不同时间持续缺氧对3T3-L1脂肪细胞脂肪因子基因表达的影响

目的:探讨不同时间持续缺氧孵育后脂肪细胞脂联素和瘦素表达的变化。方法:将分化成熟的3T3-L1脂肪细胞随机分为6组,即常氧(21%O2)组和缺氧(1%O2)4、12、24、48、72 h组,实时定量PCR(q RT-PCR)法测定各时间点脂肪细胞中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、葡萄糖转运子1(GLUT-1)、脂联素和瘦素基因表达。结果:与常氧组相比,缺氧12、24、48 h组HIF-1α、GLUT-1 m RNA表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。缺氧24 h时HIF-1α、GLUT-1 m RNA达到最高。各缺氧组脂联素m RNA在12、24、48、72 h缺氧组的表达下降,较常氧组有统计学差异(P<0.05)。各缺氧组瘦素m RNA的表达高于常氧组,并在24 h时达到最高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:缺氧使脂肪细胞HIF-1α、GLUT-1、瘦素m RNA表达升高,脂联素m RNA表达下降,各反应在缺氧24 h时达到最大水平。     

老年人血脂水平与载脂蛋白E等位基因的关系

为了解老年人血脂水平与载脂蛋白Ｅ基因多态性的关系，并探讨载脂蛋白Ｅ等位基因对老年人血脂水平的内在影响，利用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法测定了载脂蛋白Ｅ基因型，并用酶学方法对其血脂水平进行了测定。结果发现存在五种不同基因型：与携有ε３等位基因的人群相比，携有ε４等位基因的人群倾向具有较高的总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平以及较低的甘油三酯水平，而携有ε２等位基因的人群则有较低的低密度脂蛋白胆固醇水平以及较高的     

HBV感染者HBsAg和HBsAb同时阳性的血清学异常模式的研究

目的：分析HBsAg和HBsAb同时阳性的慢性HBV感染者的血清学模式,分析病毒Pre-S/S区基因序列变异或缺失情况对其进行基因分型,并探讨其临床意义。方法采用酶联免疫分析法筛选出HBsAg和HBsAb同时阳性的慢性HBV感染者共100例,采用化学发光微粒子免疫分析确认,用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测其HBV DNA含量,其中HBV DNA阳性者60例, HBV DNA阴性者40例。将60例HBsAg和HBsAb同时阳性的慢性HBV感染者作为实验组,并选取60例HBsAg（＋）HBsAb（-）的慢性乙型肝炎患者作为对照组。采用PCR法体外扩增两组患者HBV Pre-S/S基因序列并测序分析,根据测序结果对患者的基因型进行分型,比较两组Pre-S/S基因变异情况,结合临床资料探讨其临床意义。结果实验组患者中B基因型19例、C基因型41例,对照组患者中B基因型18例、C基因型42例。实验组B基因型患者的年龄[（50.0＆#177;16.3）岁]大于C基因型[（34.0＆#177;13.4）岁],差异具有统计学意义（F=31.6,P=0.0432）。实验组B基因型和C基因型的S区氨基酸突变率分别为10.8%和21.6%,差异具有统计学意义（F=24.31,P=0.046）。同样为C基因型的两组患者,实验组S区氨基酸突变为41.6%,显著大于对照组的氨基酸突变率（3.2%）,差异具有统计学意义（F=85.68,P=0.006）。结论 HBsAg（＋）且HBsAb（＋）并伴有HBeAg（＋）的患者血清中HBV DNA的阳性率显著增高。HBsAg和HBsAb同时阳性的现象与pre-S/S区基因突变具有显著关性,且C基因型的突变率高于B基因型患者的突变率。     

委陵菜黄酮衍生物促进L6细胞GLUT4的转位活性

目的:筛选出具有促进骨骼肌细胞L6表面GLUT4转位活性的委陵菜黄酮衍生物。方法:将实验细胞分成空白对照组,胰岛素组(以胰岛素刺激20 min)和黄酮衍生物组(加不同衍生物刺激24 h),用类ELISA法测定细胞膜上GLUT4的量。结果:对黄酮衍生物1~14影响L6大鼠骨骼肌细胞GLUT4转运的实验结果表明,衍生物1、5、6、8~11在10μg/mL作用浓度下,促进GLUT4转位的量分别为空白对照组的(3.60±0.30)倍、(3.66±0.26)倍、(2.87±0.49)倍、(3.97±0.37)倍、(2.82±0.45)倍、(3.37±0.67)倍、(4.43±0.61)倍(P<0.05)。化合物6与胰岛素叠加作用为空白对照组的(4.31±0.22)倍(P<0.05)。结论:委陵菜黄酮衍生物促进GLUT4转位的作用为首次报道。黄酮衍生物1、5、6、8~11有明显地促进L6表面GLUT4转位的作用;化合物6与胰岛素有协同作用。     

p38 MAPK及其抑制剂在胰岛素调节GLUT4活性中的作用

目的:探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)及其抑制剂SB203580在胰岛素调节葡萄糖转运子4(GLUT4)活性机制中的作用。方法:分别测定胰岛素和SB203580孵育条件下骨骼肌细胞p38 MAPK的磷酸化水平和活性;检测p38 MAPK或SB203580是否与GLUT4直接结合;并测定SB203580对光化学标记细胞膜上的GLUT4的影响。结果:与胰岛素孵育0min时相比,100nmol/L胰岛素使p38 MAPK磷酸化水平增加,最大值为0min时的(2.43±0.21)倍;胰岛素还使p38α和p38βMAPK的活性分别增加了(10.13±0.48)和(7.92±2.17)倍;SB203580可抑制胰岛素的作用;p38 MAPK在体内不与GLUT4直接结合;SB203580仅抑制胰岛素刺激下的GLUT4光化学标记。结论:p38MAPK或SB203580不直接与GLUT4结合;对SB203580敏感的分子参与了胰岛素调节GLUT4活性的作用。     

脂肪细胞缺氧对骨骼肌细胞胰岛素作用的影响

目的：观察脂肪细胞缺氧对骨骼肌细胞胰岛素作用的影响。方法：缺氧（5％CO2、85％N2、10％H2或200μmol／L CoCl2）处理小鼠3T3-L1脂肪细胞,制备条件培养基孵育小鼠骨骼肌细胞。通过对胰岛素信号通路中关键蛋白的磷酸化水平和葡萄糖转运子4（GLUT4）转位得以检测骨骼肌胰岛素作用的改变。结果：缺氧处理的3T3-L1脂肪细胞条件培养基抑制骨骼肌胰岛素信号通路,其中胰岛素受体底物10RS1Set307）磷酸化水平呈显著增高,相反蛋白激酶B（AktSer473）磷酸化水平呈显著下降,最终显著抑制了胰岛素刺激的GLUT4myc转位（p〈0．05）。结论：抑制胰岛素刺激的GLUT4myc转位,其机制与IRSt的Ser307的磷酸化水平升高和Akt的Ser473的磷酸化水平降低有关。     

DNP增加胰岛素刺激骨骼肌细胞摄取葡萄糖作用的机制研究

目的：观察2,4二硝基酚（DNP）增加胰岛素作用的机制。方法：分别测定在胰岛素或,和DNP不同孵育条件下骨骼肌细胞AMP激活的蛋白激酶（AMPK）、胰岛素受体底物（IRS1）、蛋白激酶B（AKT）及其底物（AS160）和核糖体S6蛋白激酶（S6K）的磷酸化水平。结果：相对于基础组,DNP刺激AMPK的磷酸化,胰岛素刺激Akt和AS160的磷酸化,DNP可以使胰岛素刺激的IRS1丝氨酸磷酸化降低并增加Akt和AS160的磷酸化。结论：DNP刺激L6骨骼肌细胞株（L6-GLUT4myc）成肌细胞AMPK的活性,降低S6K活性,从而降低IRSI丝氨酸磷酸化,增加胰岛素信号分子Akt和AS160的活性,提示DNP可以通过刺激AMPK,增加胰岛素刺激葡萄糖摄取的作用。     

急性脑梗死患者血浆Hcy、eNOS、sTM、hs－CRP、vWF的变化及意义

目的：探讨血浆生物标志物检查诊断急性脑梗死患者的特异性和敏感度,以辅助临床诊断和病情随访。方法分别测定150例急性脑梗死患者（观察组）和50例健康查体者（对照组）的血浆同型半胱氨酸（ Hcy）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、可溶性血栓调节蛋白（sTM）、超敏C反应蛋白（hs－CRP）及血管性假血友病因子（vWF）水平。结果观察组血浆Hcy、eNOS、sTM、hs－CRP、vWF水平均显著高于对照组（ P均＜0．05）。根据ROC曲线得出当Hcy临界值为9．11μmol／L时诊断急性脑梗死的敏感性为95．2％、特异性为76％,eNOS临界值为437．30μmol／L时诊断的敏感性为79％、特异性为96％,sTM临界值为7．43μmol／L时诊断的敏感性为75．2％、特异性为96％,hs－CRP临界值为3．38 mg／L时诊断的敏感性为81．9％、特异性为90％,vWF临界值为194．85 ng／mL时诊断的敏感性为75．2％、特异性为80％。结论血浆Hcy、eNOS、sTM、hs－CRP、vWF水平可作为急性脑梗死诊断的辅助指标。