龟板含药血清对骨髓间充质干细胞增殖细胞核抗原表达的影响

目的：观察益肾龟板血清对大鼠骨髓间质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC）体外增殖过程的增殖细胞核抗原（Proliferation cell nuclear antigen,PCNA）表达的影响。方法：使用密度梯度法分离大鼠骨髓间质干细胞进行培养,经Brdu标记和CD44染色及两者双重染色鉴定后,观察在培养液中添加不同浓度龟板血清条件下MSC增殖过程。用免疫组织化学方法和原位杂交方法检测MSC的PCNA及其mRNA表达;免疫荧光细胞化学法结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测PCNA蛋白表达的变化。结果：龟板血清以浓度依赖方式促进MSC的PC-NA及其mRNA表达阳性细胞数和PCNA蛋白表达,与对照组比较有显著性（P〈0.05）。结论：龟板血清促MSC增殖作用可能与上调PCNA表达有关。     

龟板体外抗氧化活性的研究

目的研究龟板的体外抗氧化活性,为抗衰老药物的筛选提供参考。方法将龟板分别用石油醚、乙酸乙酯、95%乙醇等极性依次递增的溶剂进行提取得不同提取部位溶出物,用DPPH法进行体外抗氧化活性检测,并与抗坏血酸进行比较。结果龟板95%乙醇提取部位溶出物与石油醚、乙酸乙酯部位提取物相比抗氧化活性均存在显著性差异(P<0.01),且以95%乙醇提取部位溶出物体外抗氧化活性最强,其EC50与抗坏血酸比较相差2.38个数量级。结论龟板95%乙醇提取部位溶出物具有很强的体外抗氧化活性,可作进一步研究。     

龟板体外抗氧化活性研究

目的:研究中药材龟板的体外抗氧化活性,为抗衰老药物的筛选提供参考。方法:将龟板分别用石油醚、乙酸乙酯、95%乙醇等极性递增的溶剂提取得不同提取部位溶出物,用1,1—二苯基—2—苦基肼基游离基法(DPPH法)进行体外抗氧化活性检测;并与抗坏血酸(VitC)进行比较。结果:龟板95%乙醇部位提取物与石油醚、乙酸乙酯部位提取物的抗氧化活性存在显著性差异(P<0.01);95%乙醇部位提取物的体外抗氧化活性最强,其清除半数DDPH所需样品用量(EC50)与VitC相比相差2.38个数量级。结论:龟板95%乙醇部位提取物具有很强的体外抗氧化活性,可进一步进行研究并加以开发利用。     

骨形成蛋白4诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元的能力

目的骨形成蛋白 4( bone morphogenetic protein 4,BMP4)体外诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元的能力. 方法采用 BMP4体外定向诱导第五代骨髓间充质干细胞,免疫组化鉴定神经丝蛋白( NF)、胶质纤维酸性蛋白( GFAP)的表达. 结果成年大鼠骨髓间充质干细胞受 BMP4诱导后出现神经元样细胞 ,细胞免疫组化显示诱导出的神经元样细胞 NF表达阳性,诱导后 5 h, 12 h, 1 d, 3 d, 5 d和 7 d的 NF神经样细胞阳性率分别为 (40± 7)%, (71± 6)%, (58± 3)%, (53± 6)% , (37± 5)%, (13± 2)% ,诱导后 12 h,NF神经元样细胞阳性表达到高峰 ,与诱导后 5 h比较,差别有显著性 (t=1.380～ 2.621,P< 0.05). 结论 BMP4可以在体外诱导成年大鼠骨髓间充质分化为神经元.     

龟板提取物上调维生素D受体表达促骨髓间充质干细胞向成骨分化

目的 探讨龟板提取物诱导大鼠骨髓间充质干细胞 (mesenchymal stem cells, MSCs) 向成骨分化和对维生素D受体 (VDR) 表达的影响。方法 从大鼠骨髓中分离 MSCs,体外培养,利用流式细胞术检测 MSCs 表面抗原 CD44 细胞标志,体外培养 MSCs 分成不同的组观察其向成骨分化,在培养基中不加任何处理的作为对照组,培养基中加成骨诱导液诱导 MSCs 向成骨分化作为阳性对照组,龟板提取物组在培养基中加龟板提取物,诱导 7 d 后,通过免疫化学染色、Western blotting、原位杂交、RT-PCR 等方法观察龟板提取物对原代培养的 MSCs 向成骨分化的成骨分化标记分子碱性磷酸酶 (ALP)、骨桥蛋白 (OPN) 及 VDR 阳性表达及 VDR mRNA 的表达情况。结果 免疫组化染色显示,龟板提取物组成骨分化标记分子 ALP、OPN 和VDR 的阳性百分比明显高于对照组,Western blotting 结果也显示龟板提取物组的 ALP、OPN和 VDR 的蛋白表达水平高于对照组;同时原位杂交、RT-PCR 结果表明,龟板提取物诱导MSCs 向成骨分化过程可明显促进 VDR mRNA 的表达。结论 龟板提取物可促 MSCs 向成骨分化,其机制可能与 VDR 的上调有关。     

壳聚糖-明胶-碱性成纤维细胞生长因子 三维大孔支架对骨髓间充质干细胞 增殖的影响**☆

背景：干细胞的分化潜能与培养条件有密切关系，改变支架材料的表面特性，三维结构，增加生长因子均可实现对干细胞增殖分化的控制。 目的：制备适合骨髓间充质干细胞附着生长的、具有最佳孔隙率和孔隙结构的药物缓释组织工程支架——三维大孔支架，提供能促进多能干细胞生长的微环境。 设计：重复测量设计。 单位：广州中医药大学基础医学院解剖教研室。 材料：实验所用健康成年SD大鼠由广州中医药大学实验动物中心提供。壳聚糖、碱性成纤维细胞生长因子购自Sigma公司。 方法：实验于2003-03/2006-12主要在广州中医药大学基础医学院解剖教研室完成。采用冷冻干燥的方法，用不同比例的壳聚糖-碱性成纤维细胞生长因子-明胶依次混匀，通过控制冷冻、复温和干燥时间处理使其具有最佳孔隙率和孔结构，制备具缓释碱性成纤维细胞生长因子功能的三维大孔支架。取SD大鼠股骨和胫骨骨髓，分离、培养骨髓间充质干细胞并移植于缓释碱性成纤维细胞生长因子的三维大孔支架上进行三维培养，与无碱性成纤维细胞生长因子的支架对照。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。 主要观察指标：用ELISA和扫描电镜观察支架的三维结构和缓释性能，用苏木精-伊红染色、MTT、细胞计数及扫描电镜方法观察缓释碱性成纤维细胞生长因子的三维大孔支架对骨髓间充质干细胞生长状态和细胞活力的影响。 结果：含有碱性成纤维细胞生长因子的三维大孔支架有碱性成纤维细胞生长因子缓释性能，孔隙尺寸与不含碱性成纤维细胞生长因子的支架三维结构相比，差异无显著性意义（P > 0.05）。含有碱性成纤维细胞生长因子的三维大孔支架能提高在支架上立体培养的骨髓间充质干细胞存活率，促进骨髓间充质干细胞黏附、增殖和活力，与不含碱性成纤维细胞生长因子的支架相比，差异有显著性意义（P < 0.05）。 结论：含有碱性成纤维细胞生长因子的三维大孔支架能缓释碱性成纤维细胞生长因子，有利于在支架上立体培养的骨髓间充质干细胞存活，为其在组织工程中的应用打下基础。     

针刺内关穴对心肌缺血调整作用的机理研究

[目的]家兔蓝斑区注射P物质（substanceP,SP)及其拮抗剂，观察其在心肌缺血及电针过程中的效应。[方法]结扎兔冠左室支制作心肌缺血模型，采用脑立体定位仪定位蓝斑，动态观测心电图ST段电位的变化和心肌的形态学改变。[结果]P物质注入蓝斑有促进急性心肌缺血恢复的作用，且能加强电针内关对缺血心肌的改善，但被P物质拮抗剂注入蓝斑所阻断。[结论]结果提示SP在电针内关穴减轻急性心肌缺血损伤过程中起重要作用。可能是内关与心脏相关联系的重要介质。     

我院高等中医护理教育改革的实施

针对我院高等中医护理教育发展过程中的问题进行多方位的改革,包括基础设施的完善、师资体系的构建、操作课程教学模式的改革,取得阶段性成效。     

小鼠高迁移率族蛋白B1启动子的构建与转录活性检测

【目的】构建小鼠高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box 1 protein,HMGB1)启动子全长序列的荧光素酶报告基因用于药物筛选。【方法】采用PCR技术扩增小鼠HMGB1基因启动子全长序列,用GV238载体构建报告质粒GV238-HMGB1-P-Luc,以pGL3-basic作为阴性对照质粒,与内参质粒pRL共转染Hela细胞,以内毒素(LPS,0.2μg/mL)作为激活剂,以正丁酸钠(SB,10 mmol/L)作为抑制剂,分组处理24 h后检测荧光素酶活性。【结果】经酶切、PCR及测序鉴定证实克隆的HMGB1基因启动子全长2 140 bp,DNA序列正确无突变。与pGL3-basic组比较,GV238-HMGB1-P-Luc组荧光素酶活性显著增强(P0.05);与GV238-HMGB1-P-Luc组比较,LPS组荧光素酶活性显著增强(P0.01);与LPS组比较,SB组荧光素酶活性显著降低(P0.01)。【结论】HMGB1基因启动子报告基因构建成功,LPS可以增强其表达,SB则可以抑制LPS刺激下的HMGB1启动子表达增强,可为下一步筛选具有调控HMGB1启动子活性的药物奠定基础。     

龟板含药血清体外诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元

【目的】观察龟板含药血清体外诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元的能力。【方法】采用龟板含药血清体外定向诱导第五代骨髓间充质干细胞，免疫组化鉴定神经丝蛋白(NFP)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。【结果】成年大鼠骨髓间充质干细胞受龟板血清诱导后神经元样细胞NF表达阳性，诱导后12h，神经元样细胞NF阳性表达达到高峰。【结论】龟板含药血清可以在体外诱导成年大鼠骨髓间充质分化为神经元。