白细胞介素17通过上调肌细胞增强因子2C促进PC9细胞程序性死亡配体1表达

目的 研究白细胞介素17(IL-17)促进PC9细胞表达程序性死亡配体1(PD-L1)的分子调控机制。方法 用IL-17 50μg·L^-1刺激PC9细胞0(细胞对照),1,2,3,6和12 h,用逆转录PCR(RT-PCR)和Western印迹法分别检测PC9细胞肌细胞增强因子2C(MEF2C)和PD-L1 mRNA及蛋白表达。构建pIRES2-MEF2C及其对照质粒pIRES2-EGFP和MEF2C短发夹RNA(shMEF2C)及其对照质粒shCTR,分别转染PC9细胞48 h(shRNA质粒转染后加IL-17刺激3 h),即分pIRES2-EGFP和pIRES2-MEF2C组或shCTR,shCTR+IL-17和shMEF2C-4+IL-17组,同上检测MEF2C和PD-L1 mRNA及蛋白表达。另构建PD-L1启动子全长(pGL3-PD-L1-FL)和不同截短的pGL3-PD-L1-1～pGL3-PD-L1-4质粒。先将pGL3-PD-L1-FL与pIRES2-MEF2C共转染PC9细胞48 h或与shMEF2C-4共转染48 h加IL-17刺激3 h,用双...     

BCRP/ABCG2的结构功能及相关抑制剂研究

化学治疗是临床上治疗癌症的一种主要方式.研究发现多重耐药菌(multi-drug resistance,MDR)主要是由一类被称为ABC转运蛋白超家族(ATP binding cassette transporters)的膜蛋白所引起的,它们能够利用ATP水解提供的能量将化学治疗药物排出细胞外,导致肿瘤细胞呈现抗药性.BCRP/ABCG2 (breast cancer resistant protein)属于ABC转运蛋白超家族G亚族的第二位成员,是造成多种癌细胞产生MDR的主要原因之一.     

LINC01518对IL-17诱导非小细胞肺癌细胞增殖的影响

目的：探讨长链非编码RNA01518(long intergenic non-protein coding RNA 01518,LINC01518)基因过表达或沉默对白介素(interleukin,IL)-17诱导非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖的影响。方法：Western blot检测NSCLC细胞系(PC9、H1299和H1975)IL-17受体A(IL-17 receptor A,IL-17RA)的表达后,用IL-17刺激H1299和PC9细胞不同时间,利用CCK-8实验测定细胞的增殖水平。LncRNA芯片筛查IL-17刺激H1299和PC9细胞3 h后LncRNA上调的结果,从中选取某些上调的LncRNA进行RT-PCR和Real-time PCR验证。此外,将构建的pcDNA3.1/LINC01518或shLINC01518质粒转染H1299细胞,用CCK-8、EdU和克隆形成实验检查细胞的增殖情况。结果：3种NSCLC细胞系均有IL-17RA的表达。实验发现,IL-17刺激H1299和PC9细胞后能提高其增殖水平,同时...     

IL⁃17诱导的p300调控NSCLC细胞迁移、侵袭和MMP2表达的作用

目的：探讨IL?17刺激非小细胞肺癌（non?small cell lung cancer,NSCLC）细胞上调腺病毒E1A相关300 kDa蛋白（adenoviral E1A binding protein of 300 kDa,p300）调控其细胞迁移、侵袭及生成基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2,MMP2）的作用。方法：用IL?17刺激 NSCLC细胞（H1299）后行划痕和Transwell实验观察细胞迁移和侵袭的变化。然后用Western blot检查p300和MMP2蛋白的表达。同时,将p300过表达质粒（pcDNA3.1/p300）或shp300干扰质粒分别转染H1299细胞（后者再行IL?17刺激）,用前述方法测定细胞迁移、侵袭和MMP2的表达。结果：用IL?17刺激H1299细胞后能显著诱导其迁移和侵袭,并上调p300和MMP2的表达。过表达p300可增强细胞的迁移与侵袭,并提高MMP2的生成,但沉默p300基因后由IL?17诱导的细胞迁移和侵袭能力及MMP2的表达均显著降低。结论：IL?17上调的p300能促进H1299细胞的迁移与侵袭以及MMP2基因的表达。     

HEK293T细胞中TRAF6多聚泛素化修饰KLF5的方式及其修饰位点的鉴定

目的：研究人胚肾 293T(HEK 293T,简称 293T)细胞中外源性肿瘤坏死因子受体相关因子(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)与Krüppel样因子5(Krüppel-like factor 5,KLF5)的结合及TRAF6多聚泛素化修饰KLF5的方式和修饰的位点。方法：将构建的Flag-TRAF6、HA-KLF5、泛素过表达质粒、shTRAF6小干扰质粒和TRAF6 C70A位点突变质粒行不同组合转染293T细胞48 h。用免疫沉淀(immunoprecipitation,IP)和免疫印迹(immunoblotting,IB)实验检查TRAF6与 KLF5 的结合以及 KLF5 K63 或 K48 多聚泛素化水平。此外,构建 KLF5 全部赖氨酸突变的质粒,分别与 TRAF6 质粒共转染 293T 细胞。用前述 IP/IB 检测 KLF5 K63 连接的多聚泛素化修饰,并确定 KLF5 K63 泛素化修饰的位点。结果：293T 细胞中 TRAF6能与KLF5结合;TRAF6过表达和基因沉默或TRA6酶活性缺失能相应上调或下调KLF5 K63的多聚泛素化;KLF5 被 TRAF6 K63多聚泛素化修饰的位点是其第99位和第100位的赖氨酸。结论：TRAF6能与KLF5相互作用,并对KLF5-K99和 K100进行K63多聚泛素化修饰。