B细胞淋巴瘤石蜡包埋组织克隆性重链基因重排检测

目的 探讨克隆性重链基因重排检测在B细胞淋巴瘤(B—NHL)诊断中的价值。方法 用半巢式聚合酶链反应(semi—nested PCR)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及银染技术，检测经形态学及免疫组织化学确诊的23例B—NHL石蜡包埋组织标本的克隆性免疫球蛋白第三互补决定区(IgHCDR3)重排基因，对照组为7例T细胞淋巴瘤(T—NHL)及6例反应性增生或肉芽肿性淋巴结炎。结果 B—NHL IgHCDR3检出的阳性率87．0％(20／23)，假阳性率7．7％(1／13)，假阴性率13．0％(3／23)。结论 检测克隆性IgHCDR3重排为B—NHL的诊断及鉴别诊断提供有效的辅助手段。     

人外周血单核细胞和脐血CD34+细胞来源的树突细胞比较

目的比较从人外周血单核细胞及脐血CD34+细胞诱导树突细胞(DC)的方法及其特性.方法用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,贴壁法获得单核细胞;经GM-CSF及IL-4诱导获得DC.磁性活化细胞分选系统(MACS)分选脐血CD34+细胞,以GM-CSF、IL-4、TNF-α、SCF、FL、TPO等细胞因子诱导获得DC.用电镜、普通显微镜观察DC形态;流式细胞仪分析DC表型;同种混合淋巴细胞反应(allo-MLR)观察DC刺激T淋巴细胞增殖的能力.结果外周血单核细胞在因子GM-CSF、IL-4、TNF-α,脐血CD34+细胞在GM-CSF、IL-4、TNF-α、SCF、FL、TPO等因子作用下,可生成DC,并表达相应的DC分化抗原CD14、CD80、CD83、CD86、HLA-DR.脐血CD34+细胞具有较强的扩增能力,经2周诱导,体系细胞数可增加173.8士26.7倍,两种来源的DC均能刺激同种异体淋巴细胞的增殖反应.结论外周血单核细胞与脐血CD34+细胞,在体外均可诱导成DC,并具有相应的DC分化抗原和功能.     

趋化因子受体CXCR4在乳腺癌中表达的研究

目的探讨趋化受体CXCR4在乳腺癌中的表达及其与肿瘤转移的关系,以及脂多糖(LPS)对其表达的影响.方法采用流式细胞仪和RT-PCR法检测23例乳腺癌患者的癌组织、癌旁组织、正常组织以及MDA-MB-231细胞中CXCR4在蛋白质和mRNA水平的表达情况,以及LPS对MDA-MB-231细胞 CXCR4表达的影响;用Transwell板检测经LPS作用前后MDA-MB-231对趋化因子SDF-1趋化活性的影响.结果乳腺癌组织MDA-MB-231细胞的趋化因子受体CXCR4在蛋白质和mRNA水平的表达均显著高于癌旁组织和正常组织(P<0.05),并且CXCR4的表达与乳腺癌的转移密切相关;脂多糖(LPS)能下调CXCR4的表达,经LPS作用后乳腺癌细胞趋化活性降低.结论趋化因子受体在乳腺癌的转移中起重要作用,下调乳腺癌细胞CXCR4的表达水平,可减少或抑制其转移.     

生长因子受体结合蛋白-2抑制肠癌细胞HT29增殖

目的 研究Grb2 shRNA转染对肠癌细胞HT29增殖相关信号通路的影响,探讨以Grb2为肠癌治疗靶点的可行性.方法 应用shRNA慢病毒质粒系统,将Grb2 shRNA转染至293T细胞,获得5株不同序列Grb2 shRNA慢病毒颗粒,并感染肠癌HT29细胞,分别获得的5株感染Grb2 shRNA慢病毒颗粒的肠癌HT29细胞系为实验组(即感染Grb2 shRNA的细胞HT29/shGrb2-69、HT29/shGrb2-70、HT29/shGrb2-71、HT29/shGrb2-72、HT29/shGrb2-73),以eGFP shRNA慢病毒感染肠癌HT29细胞为阴性对照组.MTT法检测细胞增殖情况,RT-PCR检测Grb2 mRNA表达,Western blot检测Grb2、P42/44 ERK、磷酸化P42/44 ERK、Akt、磷酸化Akt(P-Akt)和STAT5等信号通路分子表达的改变.结果 感染shGrb2病毒72 h,HT29/shGrb2-69、HT29/shGrb2-73两株细胞在mRNA和蛋白水平均出现抑制现象.HT29/shGrb2-69、HT29/shGrb2-73细胞在感染后24h A值分别为0.176±0.045,0.186±0.013,感染48 h后为0.347±0.048、0.382±0.041均显著高于空白对照、阴性对照(P ＜0.001),72 h为0.934±0.038、0.983±0.205高于空白对照、阴性对照(P＜0.01);感染后72 h,phospho-P42/44 ERK、Akt、phospho-Akt明显下降,而ERK、STAT5表达不受影响.结论 在HT29细胞,Grb2 mRNA和蛋白水平上明显抑制,可诱导HT29细胞增殖和相关信号传导通路分子表达下调.     

减轻异基因造血干细胞移植GVHD增强GVT的研究

异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)是一种有效治疗恶性肿瘤及非恶性疾病的方法,近年来成为治愈某些恶性血液性肿瘤疾病的主要手段之一,明显提高了患者的长期生存率[1];但移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)仍然是allo-HSCT的主要并发症,是移植相关死亡及影响患者生存质量的重要原因。GVHD是由移植物中所含供者T细胞识别宿主抗原而攻击宿主组织器官所产生的病理损伤,并导致宿主多脏器损伤的一个疾病过程。以T细胞为靶点的免疫抑制剂及T细胞去除术的应用是目前GVHD…     

KIR不相合的NK细胞对乳腺癌细胞的体外杀伤作用

放化疗导致的淋巴细胞减少，改变了免疫细胞亚群的格局，启动了免疫细胞的内源性增殖，重建了一个新的免疫微环境。其机制主要与抑制肿瘤免疫的调节性T细胞比例与功能显著下调；内源性细胞因子IL-7、IL-15等供应增多，淋巴细胞高效扩增；抗原提呈细胞功能增强和以非对称性为特点的淋巴细胞自稳性增生的改变等相关。经历了淋巴细胞减少状态下肿瘤免疫格局的改变后，机体消除了抑制肿瘤免疫的重要因素，打破了肿瘤免疫耐受。肿瘤放化疗后选择合适时间点与生物治疗联合治疗，可以诱导出优于单一生物治疗的抗肿瘤效应，部分修正了以往认为放化疗导致的淋巴细胞减少不利于抗肿瘤免疫生物治疗的观念，为临床攻克肿瘤开辟新的治疗途径。     

Grb2的抑制在抗肿瘤治疗中的意义

生长因子受体连接蛋白-2（Grb2）是一种广泛表达的衔接蛋白，在多种肿瘤细胞中过度表达，对肿瘤的发生和发展具有重要影响，从而成为肿瘤治疗的靶向位点之一。因此，抑制Grb2在抗肿瘤治疗中具有广泛前景。     

脐血CD34+细胞向巨核系定向扩增的初步探讨

目的探讨不同细胞因子组合定向诱导CD34 细胞向巨核系分化的能力。方法利用免疫磁珠法(MACS)分离纯化脐血CD34 细胞,在无血清培养体系中以1×105/ml每孔接种,经不同细胞因子组合诱导培养。结果收集5份脐血标本,平均体积为95ml,CD34 细胞的比例为2.18%±0.89%,经过MACS分选后,CD34 细胞纯度平均可达81.55%。在细胞生长因子的刺激培养下,MK3组有核细胞数,CD34 细胞数,CD41a 细胞数在培养第16天分别达277.4倍、6.89倍、66.79倍,高于其它各组。结论脐血CD34 细胞体外在相关细胞生长因子的刺激下可向巨核细胞系定向分化。     

杀伤细胞免疫环蛋白样受体与肿瘤免疫治疗

杀伤细胞的免疫环蛋白样受体（Killer cell immunoglobulin-like receptor, KIR）基因定位于人类19号染色体上，编码激活性受体和抑制性受体，表达于NK细胞和部分T细胞亚群表面，其有重要的生物学意义。近年来关于杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）的研究，为异基因造血干细胞移植等肿瘤免疫治疗模式提供了新的理论基础和研究方向。全文对杀伤细胞免疫球蛋白样受体在血液肿瘤及实体瘤免疫治疗方面的进展作一综述。     

MICA蛋白在肿瘤生物治疗中的作用

近年,NK细胞的活化性受体NKG2D已成为研究热点,作为NKG2D配体的MICA(人类MHC-Ⅰ类分子链相关基因A)蛋白越来越受关注.机体内MICA以膜型和分泌型两种形式存在.膜型MICA与NKG2D相互作用在肿瘤免疫监视中起着非常重要的作用;与此相反,分泌型MICA不仅下调NKG2D受体的表达,而且下调其细胞毒活性,对免疫细胞抗肿瘤起阻碍作用,可能是肿瘤免疫逃逸的一种新的机制.因此,可以利用这些特点发挥MICA蛋白在肿瘤生物治疗中的应用价值.