祖先信息标记在关联研究中的应用

关联分析方法被越来越多的用于疾病相关基因的定位，它的关键是选择合适的正常对照群体，因为存在病例组与对照组两群体间的差异会导致假阳性结果。近来，人们通过分析一些与疾病不相关的遗传标记在两组人群间的分布是否存在显著差异来判定样本间的层化程度，以鉴定疾病关联结果的真实性。祖先信息标记（ancestry informative markers，AIMs），     

低强度激光照射诱导大鼠胸主动脉金属硫蛋白的生成

目的：观察低强度红激光照射对大鼠脑主动脉金属硫蛋白（metallothionein,MT)生成的影响，探讨激光照射的细胞保护机制。方法：取24只大鼠的胸主动脉，将其制成厚度为0．5mm的薄片，置于含10％胎牛血清Krebs-Henseleit液6孔培养板，经95％O2－5％CO2、37℃孵育。设对照组及3个实验组，对照组不照射激光，3个实验组分别以功率密度为3、6和12J／cm^2的632nm波长的激光照射。采用竞争性RT－PCR法测定胸主动脉内MT的mRNA水平变化，以^109Cd牛血红蛋白饱和法测定MT的含量。结果：3个实验组MT1 mRNA水平分别比对照组增加175％（P＞0.05)、418．6％（P＜0．05）和668．2％（P＜0．01）；MT2 mRNA水平分别比对照组增加163．9（P＞0．05）、615％、（P＜0．01）和1087％（P＜0．01）；相应的MT蛋白含量分别比对照组增加142．8％（P＜0．05）、170．8％（P＜0．05）和142．1％（P＜0．05）。     

apoE基因敲除小鼠主动脉尾加压素Ⅱ受体GPR14表达的变化

目的：观察apoE敲除小鼠主动脉组织尾加压素Ⅱ受体-GPR14表达的变化，以探讨UⅡ及其受体系统在动脉粥样硬化发病中的作用。 方法： 取不同周龄（18、28 和38周）的apoE基因敲除及同龄对照C57BL/6J小鼠（各亚组n=6只），取主动脉，提取mRNA，行竞争RT-PCR。 结果： apoE敲除小鼠GPR14表达分别较同龄对照增加54.2%（18周，P<0.05）、50.0%（28周，P<0.05）、97.0%（38周，P<0.01）。取28周apoE基因敲除及同龄对照小鼠（各8只）主动脉行［125I］-尾加压素Ⅱ放射性配基实验，apoE基因敲除组最大结合力（Bmax）较对照组增大64%（P<0.01），而解离常数Kd值无明显变化（P>0.05）。 结论： 尾加压素Ⅱ/GPR14通路可能参与动脉粥样硬化的发病过程。     

智力低下和孤独症男童脆性X基因突变的研究

目的应用改良基因检测方法,探讨脆性X综合征致病基因(fragileXmentalretardation"1,FMR1)在中国人群智力低下和孤独症中的作用。方法收集2002～2006年小儿神经、遗传代谢门诊诊断的男性孤独症患儿44例、非家族性智力低下男性患儿40例,建立适用于男性的FMR1基因突变检查方法,对检查阳性者以pfxa3探针进行Southern杂交。结果在44例孤独症患儿中,发现1例pfxa3杂交片段约0.2kb,为FMR1前突变;40例智力低下患者中FMR1基因未见异常。结论在孤独症人群中发现的1例FMR1基因前突变,其致病意义有待进一步阐明。     

尾加压素Ⅱ促进大鼠主动脉合成和分泌内皮素1的机制研究

目的 研究尾加压素Ⅱ刺激大鼠主动脉组织产生和分泌内皮素1的作用及其细胞内信号机制.方法 将大鼠主动脉组织薄片和不同浓度尾加压素Ⅱ(10-10～10-7 mol/L)共孵育3 h或6 h,采用放射免疫法测定组织和孵育液中内皮素1含量;向孵育液中加入不同阻断剂,观察对尾加压素Ⅱ诱导内皮素1合成效应的影响,初步探讨尾加压素Ⅱ作用的细胞内机制.结果 尾加压素Ⅱ明显刺激内皮素1的分泌(孵育液含量)和产生(孵育液和组织内皮素1含量总和),呈现时间和浓度依赖性(10-10～10-7 mol/L).孵育3 h后,尾加压素Ⅱ(10-8 mol/L)组内皮素1分泌量较对照组高1.46倍 (P＜0.01),产生总量较对照组高87.9% (P＜0.01);孵育6 h后,尾加压素Ⅱ刺激组(浓度分别为10-10、10-9、10-8 mol/L和10-7 mol/L)内皮素1分泌量分别较对照组增加59.2%,108.0%,159.6%和178.0%,产生总量分别较对照组增加40.6%,68.4%,103.1% 和105.7%(P＜0.01).尾加压素Ⅱ促进内皮素1产生的作用能分别被Ca2 通道阻断剂尼卡地平、蛋白激酶C阻断剂H7、丝裂素活化蛋白激酶抑制剂PD98059、mRNA抑制剂放线菌素D以及蛋白合成抑制剂环磷酰胺所抑制,其中对内皮素1分泌作用的抑制率分别为34.1%,24.5%,32.2%,32.1%和27.6%(P＜0.01),对内皮素1产生总量的抑制率分别为33.5%,31.5%,25.8%,28.0%和36.8%(P＜0.01).结论 尾加压素Ⅱ能够促进主动脉组织合成和分泌内皮素1,该作用可通过Ca2 通道、蛋白激酶C以及丝裂素活化蛋白激酶途径来实现,并提示尾加压素Ⅱ的缩血管等效应有可能通过促进内皮素1的产生来实现.     

钙化血管平滑肌细胞肾上腺髓质素及其受体系统的基因表达上调

探讨钙化的血管平滑肌细胞肾上腺髓质素生成和肾上腺髓质素受体系统一降钙素受体样受体和受体活性修饰蛋白基因表达的改变及其病理意义。采用β-甘油磷酸盐诱导培养的大鼠血管平滑肌细胞钙化;放射免疫法测定血管平滑肌细胞分泌的肾上腺髓质素含量;半定量逆转录聚合酶链反应测定细胞肾上腺髓质素、降钙素受体样受体和受体活性修饰蛋白的mRNA水平;原子吸收分光光度计测定细胞钙含量;碱性磷酸酶试剂盒测定血管平滑肌细胞碱性磷酸酶活性;β液体闪烁计数仪测定45Ca2+放射活性。结果发现,与非钙化血管平滑肌细胞比较,钙化血管平滑肌细胞内钙含量、45Ca2+摄入及碱性磷酸酶活性分别增加118％、174％和7倍(P<0.01);钙化细胞肾上腺髓质素分泌量增高99％(P<0.01),肾上腺髓质素、降钙素受体样受体、受体活性修饰蛋白2和3的mRNA水平分别增加78％、93.7％、91.8％和109.5％(P均<0.01)。肾上腺髓质素与降钙素受体样受体、受体活性修饰蛋白2和3的mRNA水平呈正相关,其相关系数分别为0.83、0.92和0.93(P均<0.01)。结果提示,血管平滑肌细胞肾上腺髓质素 旁/自分泌功能改变可能参与血管钙化的调节过程。     

Survivin在食管鳞癌中的表达和定位与细胞增殖和凋亡及与预后的关系

目的探讨survivin在食管鳞癌组织中的表达情况与细胞增殖和凋亡的关系,以及survivin在细胞中的定位与预后的关系.方法对2001年11月～2003年1月手术获得的24例食管鳞癌标本以免疫组化方法测定survivin和PCNA(增殖细胞核抗原)的表达,以阳性细胞比例和染色强度的乘积作为积分判定表达情况;以TUNEL法(脱氧核糖核苷酸末端标记法)检测细胞凋亡.对染色情况用SPSS软件进行分析,判断survivin和细胞增殖与凋亡的关系,以及survivin在细胞中的定位与预后的关系.结果24例中survivin总阳性率为62.5%(15/24),积分平均为(1.92±2.32).统计分析显示食管鳞癌中肿瘤分化程度不同,survivin表达差异有显著性(P＜0.05),分化越差,survivin的阳性率越高;而患者年龄、性别、肿瘤部位、大小、侵犯深度、有无淋巴结转移以及TNM分期均与survivin的阳性率无关(P＞0.05).24例中PCNA的表达阳性率为83.3%(20/24),增殖指数(PI)平均(44.82±29.36)%,凋亡指数(PI)平均(3.79±3.30)%.survivin阳性组PI高于阴性组(P＜0.02),而AI低于阴性组(P＜0.05).survivin阳性组生存时间与阴性组差异无显著性,而胞核表达survivin的患者生存时间小于单纯胞浆表达者(P＜0.05).Cox模型多因素生存分析显示survivin积分、肿瘤分化、大小、TNM分期是影响预后的因素.结论食管鳞癌组织中survivin阳性表达者,其细胞增殖活跃,且凋亡受到抑制;胞核表达survivin的患者生存时间少于单纯胞浆表达者,胞核表达survivin预后不佳.     

一氧化氮对热性惊厥大鼠γ-氨基丁酸B受体亚基表达的影响

目的探讨一氧化氮(NO)对热性惊厥大鼠γ-氨基丁酸B受体(GABABR)亚基表达的影响。方法大鼠随机分为对照组,热性惊厥(FS)组,FS 硝普钠(SNP)组,FS NG-单甲基-L-精氨酸(L-NMMA)组。采用热水浴诱导大鼠FS,隔日诱导1次,共10次。采用分光光度计法测定大鼠血浆NO含量;原位杂交方法观察GABABR亚基mRNA和c-fos基因表达情况;采用免疫组织化学方法观察GABABR亚基和Fos蛋白表达情况。结果与FS组比较,FS SNP组血浆NO含量明显升高,而FS L-NMMA组血浆NO含量明显降低;FS L-NMMA组GABABR1和GABABR2表达均高于FS组;FS SNP组GABABR2表达低于FS组,而GABABR1表达与FS组比较无明显改变;SNP的干预使c-fos基因和Fos蛋白表达增强,而L-NMMA的干预使其表达降低。结论NO可通过调节GABABR的功能,在反复FS中发挥作用。     

恶性血液病患者mdr1基因启动子区甲基化状态及其与表达的关系

为了探讨多药耐药 (mdr1)基因启动子区的甲基化状态及其与表达的关系 ,采用甲基化敏感的HpaⅡ酶切结合竞争性定量PCR检测 5 4例急性白血病 (AL)和 9例多发性骨髓瘤 (MM)患者mdr1基因启动子区位于转录起始点上游 - 110和 - 5 0bp处两个CCGG位点 (I区和Ⅱ区 )的甲基化率 ;半定量RT PCR检测mdr1基因的表达水平。结果显示I区、Ⅱ区及总甲基化率均与表达呈负相关 ,I区比Ⅱ区相关密切 (r分别为 - 0 .6 4和 - 0 .4 0 )。低甲基化组(n=36 )mdr1高表达率显著增高 (P <0 .0 0 1)。与化疗敏感组 (n =8)相比 ,耐药组 (n=16 )I区 (P =0 0 5 )、Ⅱ区 (P <0 .0 5 )和总甲基化率 (P <0 .0 5 )均减低。与未化疗组 (n =36 )相比 ,化疗后组 (n =14 )I区和总甲基化率均减低 (P <0 .0 5 ) ,Ⅱ区甲基化率也减低 ,但无统计学意义 (P >0 .0 5 )。化疗后组随甲基化率减低 ,mdr1表达升高 ,但尚无统计学意义 (P =0 .0 6 )。结论 :AL和MM患者骨髓mdr1基因表达水平与基因转录起始点上游 - 110和- 5 0处两个CCGG位点的甲基化程度呈负相关 ,且与 - 110处关系更密切。化疗后及耐药病人mdr1基因甲基化水平相对降低。化疗后mdr1基因表达增高与其甲基化水平降低有关。     

临床常见镰刀菌rDNA ITS序列分析

镰刀菌(Fusarium spp)通常被认为是某些植物的致病菌和污染菌。近年来随着广谱抗生素、类固醇激素的大量应用,器官移植、介入疗法的不断开展,特别是免疫缺陷疾病的增多,镰刀菌引起的人类感染先后有报道[1]。临床上镰刀菌常可引起角膜炎[2],也可见于皮肤感染[3]、关节炎[4]等,常