表皮生长因子受体在小鼠睾丸内的定位

本研究采用生物素—抗生物素蛋白DCS体系(biotin-avidin DCS system)间接免疫荧光新技术检测表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)受体的定位,以确定EGF的靶细胞.EGF可与睾丸酮协同调节精母细胞减数分裂及精子变态过程,在雄性生殖功能调节中起一定作用.     

石棉相关肿瘤p53基因突变的免疫组化及PCR—SSCP研究

为了分析石棉相关肿瘤ｐ５３基因的突变特点，对石蜡包埋的石棉相关肿瘤ｐ５３基因突变体蛋白的表达进行了免疫组化观察，提取染色体ＤＮＡ，对ｐ５３基因的第５、７、８外显子进行ＰＣＲ－ＳＳＣＰ及测序分析。免疫组化观察发现：在分析的１０例病例中有５例阳性。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析发现７例（８处）发生突变，其中４处集中在第８外显子上。５例腺癌中有４例发生ｐ５３基因突变。测序发现热点区突变。提示：石棉相关肿瘤ｐ５３基因突变率高。     

毒理学机制研究与"组学"

毒理学机制研究是环境与职业卫生相关疾病控制领域的重要方面。随着科学技术的进步，毒理学机制研究有了较大发展。近年来，“组学”在毒理学机制研究中的应用引起界内学者的普遍关注。“组学”，如基因组学（Genomics）和蛋白质组学（Pmteomics），是生命科学的前沿，具有以“通量化”的优势，但同时具有局限性，不仅在检测成本、定量、标准化等方面尚需完善，在能否回答基因间精细关系等科学问题方面也存在明显的不足。针对某些情况下“组学”概念及技术被不恰当使用的问题，Pognan曾尖锐地指出：基因组学，蛋白质学，毒理代谢组学，希望不是“时髦组学”。     

我国矽尘防治中对矽尘表面性质重视的必要性

矽尘是我国煤炭、采矿、橡胶、陶瓷、耐火材料、玻璃、冶金、铸造、石雕等多种行业的主要职业病危害因素之一.已报道的与接触矽尘有关的疾病包括矽肺、肺癌、慢性肾病、肺部感染、慢性阻塞性肺病、自身免疫性疾病、肺泡蛋白沉积症和肝细胞癌等.矽尘中游离二氧化硅百分含量的致矽肺作用已为世人公认,但同济医学院近20年来对4类接尘工人的研究发现：（1）54 651名钨矿、锡矿和瓷厂接尘工人中的10 053名矽肺患者,在吸入的粉尘量及其游离二氧化硅百分含量大致相等的情况下,钨矿工人发病率分别为锡矿工人和瓷厂工人的1.87及3.66倍;（2）接触低于国家容许浓度的铁矿尘（游离二氧化硅百分含量未超过10%）,工人的尘肺发病率居高不下,与锡矿工人发病差异不大.这些研究提示除游离二氧化硅百分含量外,势必存在其他对矽尘致病作用有重大影响的因素.近20年来国内外研究较多的是矽尘表面性质对矽尘致病的影响.大量实验室资料表明,矽尘的表面性质可影响其毒性机制中的多个关键环节如自由基的形成,肺泡巨噬细胞的活化及凋亡等.国外一些学者已建议政府应重视矽尘的表面性质对矽尘毒性的影响.这一部分的研究在我国起步较晚,研究资料较少,为了探索矽尘表面性质在我国防治矽尘危害工作中的应用,本文汇总了1996～2005年矽尘表面性质对其毒性的影响以及影响矽尘表面性质的因素,包括实验室资料和流行病学资料,并介绍了矽尘表面性质的检测技术.     

苯并(a)芘通过活化蛋白-1非依赖性通路诱导细胞中p53蛋白过表达及高磷酸化

目的探讨苯并(a)芘[B(a)P]诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)中p53蛋白、p53磷酸化水平及亚细胞分布和活化蛋白-1(AP-1)活性的改变,以及p53与AP-1的上下游关系。方法转染p53小干扰RNAp53 siRNA质粒(p53-H)、载体CMV的HELF细胞(HELF/CMV)和转染AP-1荧光报告质粒的HELF细胞(AP-H)无血清培养48h后,加入2μmol/L B(a)P作用24h,用Western blot及免疫荧光法检测细胞中p53蛋白及p53磷酸化的改变,利用细胞核、细胞浆分离技术观察其亚细胞定位,用荧光检测法检测AP-1的相对活性。用AP-1的化学抑制剂curcumin抑制其活性,用p53的化学抑制剂pifithrin-α(PFT)抑制其表达,观察了二者的上下游关系。结果2μmol/L B(a)P作用24h后细胞内p53蛋白及p53蛋白20位丝氨酸磷酸化水平增加,并且主要分布在细胞核内;AP-1的活性增加。抑制AP-1活性后,对B(a)P诱导的p53蛋白含量增加没有明显的影响;抑制p53表达后,对B(a)P诱导的AP-1活性的增加没有明显影响。结论B(a)P通过AP-1非依赖的信号通路引起人胚肺成纤维细胞p53蛋白含量的增加。     

ERK和JNK/AP-1通路参与石英诱导的细胞周期改变

目的 探讨在石英刺激的人胚肺成纤维细胞(human embryo lung fibroblasts,HELF)中转录因子活化蛋白-1(activator protein-1,AP-1)的活性改变,以及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK),AP-1通路在石英诱导的细胞周期改变中的作用.方法 用200 μg/ml石英处理HELF细胞;用免疫荧光法检测细胞外调节蛋白激酶(extracellular signal-regdated protein kinase,ERK)和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)蛋白磷酸化水平及细胞分布;运用AP-1荧光素酶报告基因技术检测AP-1荧光素酶活力;用MAPK显性失活突变体(dominant negative mutant,DN)(DN-ERK2、DN-JNKl和DN-p38)证明通路的上下游关系;用流式细胞术检测细胞周期变化.结果 用200μg/ml石英分别处理转染AP-1报告基因的细胞(HELF-AP-1)6、12、24h,结果显示,AP-1活性随着时间变化而发生变化,6 h活性增强,12 h活性达峰值,24 h活性略有降低;用200 μg/ml石英分别处理细胞1和2 h,结果显示,ERK和JNK在石英刺激1 h后,磷酸化水平升高,主要集中于胞浆,2 h后磷酸化水平进一步升高,并主要集中于胞核;200 μg/ml石英处理细胞24 h,G1期细胞所占比例从(63.80±9.57)%下降到(32.23±7.22)%,S期细胞所占比例从(35.17±10.33)%升高到(66.00±8.07)%;AP-1化学抑制剂姜黄素(20μmol/L)可明显减弱石英引起的G1期细胞比例减少和S期细胞比例增加;DN-ERK和DN-JNK的过表达均可明显降低石英诱导的AP-1活性增强,DN-p38的过表达对石英诱导的AP-1活性增强无明显影响.结论 200 μg/ml石英可诱导AP-1活性增强,并通过ERK、JNK/AP-1通路诱导细胞周期改变.     

苯并(a)芘通过活化蛋白-1-细胞周期蛋白D1/E2F-1信号通路引起细胞周期的改变

目的 探讨活化蛋白-1(activated protein-1,AP-1)在苯并(a)芘[benzo(a)pyrene,B(a)P]引起的人胚肺成纤维细胞(HELF)周期改变中的作用以及AP-1与细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)和E2F-1/4的上下游关系.方法 转染AP-1荧光报告质粒的HELF细胞(AP-H)无血清培养48 h后,加入2μmol/L B(a)P作用24 h,用荧光检测法检测AP-1的相对活性.用AP-1的化学抑制剂姜黄素(curcumin)抑制其活性,观察它与cyclin D1/CDK4和E2F-1/4的上下游关系.采用流式细胞仪检测细胞周期的变化,用Western blot检测细胞中cyclin D1、CDK4和E2F-1/4蛋白水平的改变.结果 2 μmol/LB(a)P作用24 h后,G1期细胞比例由(71±2)%减少为(48±3)%,差异有统计学意义(P＜0.05);AP-1的活性增加;cyclin D1/E2F-1的蛋白含量增加;CDK4/E2F-4的蛋白水平没有明显改变.抑制AP-1活性后,B(a)P诱导的细胞周期的改变被逆转,B(a)P诱导的cyclin D1/E2F-1蛋白含量的增加被抑制,CDK4/E2F-4蛋白含量没有明显改变.结论 B(a)P通过AP-1引起HELF周期的改变.AP-1是cyclin D1/E2F-1的上游信号分子,但对CDK4/E2F-4的表达不具有调节作用.     

c-Jun氨基末端激酶和细胞外调节蛋白激酶信号通路对苯并(a)芘诱导人胚肺成纤维细胞c-Jun活化的调控

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）信号通路在调控苯并（a）芘[B（a）P]诱导人胚肺成纤维细胞（HELF）c—Jun活化中的作用。方法2．0μmol/LB（a）P处理HELF0、3、6、12、24h后或加入不同浓度B（a）P（0．0、0．5、1．0、2．0μmol/L）处理12h后，通过免疫印迹法检测B（a）P对细胞c-Jun活性的影响；利用p38、c—Jun氨基末端激酶（JNK）以及细胞外调节蛋白激酶（ERK）的显性失活突变体分别阻断p38、JNK和ERK活性后，观察3种MAPKs信号分子与B（a）P诱导c-Jun活化之间的关系。结果在所观察的B（a）P作用时间和浓度范围内，c—Jun蛋白表达量无明显变化；B（a）P可诱导细胞内磷酸化c—Jun（Ser63／Ser73）水平增高，并随着作用时间的延长，细胞内c—Jun的磷酸化水平也逐渐增强，至12h达到峰值（1．61±0．12，1．82±0．18），c-Jun磷酸化Ser63、Ser73与actin灰度比值分别是对照组的20．1倍、15．2倍，作用24h时细胞内c-Jun磷酸化水平呈现下降趋势，而且随着B（a）P浓度的增加，细胞内c-Jun的磷酸化水平也逐渐升高，呈现剂量-反应关系；使用显性失活突变体分别阻断JNK和ERK活性均可明显抑制B（a）P诱导细胞c—Jun磷酸化水平增加，但是阻断p38活性对B（a）P诱导细胞c—Jun磷酸化水平升高无明显影响。结论JNK和ERK信号通路调控B（a）P诱导的HELF细胞c—Jun活化，B（a）P促进c-Jun磷酸化的过程与p38信号通路无关。     

粉尘致病机制研究动向

生产性粉尘是我国危害最为严重的职业因素.截止2007年底,我国尘肺累计发病人数已达62.7万人.建国以来,我国政府对尘肺的防治一直十分重视,对粉尘致病机制的研究不断由浅入深,在许多方面处于世界前列.为此,我国老一辈专家做出了杰出贡献.     

石英和石棉的致癌、致纤维化及其机制研究

石英和石棉是两种危害严重的粉尘，均可导致肺纤维化，又均具有致癌性。石棉是国际癌症研究机构（ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＡｇｅｎｃｙｆｏｒＲｅｓｅａｒｃｈｏｎＣａｎｃｅｒ，ＩＡＲＣ）早已确定的人类致癌物。石英近年被ＩＡＲＣ宣布由动物致癌物升级为人类致癌物...