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1.
[目的]观察葡萄糖酸锌、亚硒酸钠单独及联合作用对二氧化硅致成纤维细胞DNA损伤的影响,寻找两者的最佳剂量组合。[方法]生长良好的中国仓鼠肺成纤维细胞,以5×108个/L的密度接种到25ml培养瓶中,经24h培养后加入终浓度为100mg/L的SiO2,同时分别加入终浓度分别为1.0、1.5、2.25mg/L的葡萄糖酸锌(ZnG)和终浓度分别为0.5、1.0、2.0μmol/L的亚硒酸钠(Na2SeO3)及各浓度的ZnG Na2SeO3交互组合。作用2h后收获细胞,调细胞密度为1×109个/L,通过彗星试验分别观察DNA的损伤情况。同时设阴性对照组(生理盐水)、阳性对照组(终浓度为100mg/L的SiO2)、ZnG对照组(2.25mg/L)、Na2SeO3对照组(2.0μmol/L)。联合作用时,采用L(34)正交设计表进行试验。9[结果]与SiO2组比较,1.0、1.5、2.25mg/L的ZnG及0.5、1.0、2.0μmol/L的Na2SeO3均可以显著减轻SiO2致成纤维细胞DNA链的断裂作用(P<0.05);2.25mg/L的ZnG与0.5μmol/L的Na2SeO3联合作用效果最好。[结论]ZnG、Na2SeO3单独和联合作用在体外可有效减轻SiO2粉尘所致成纤维细胞DNA的损伤作用。 相似文献
2.
目的探讨苯并(a)芘[B(a)P]诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)中p53蛋白、p53磷酸化水平及亚细胞分布和活化蛋白-1(AP-1)活性的改变,以及p53与AP-1的上下游关系。方法转染p53小干扰RNAp53 siRNA质粒(p53-H)、载体CMV的HELF细胞(HELF/CMV)和转染AP-1荧光报告质粒的HELF细胞(AP-H)无血清培养48h后,加入2μmol/L B(a)P作用24h,用Western blot及免疫荧光法检测细胞中p53蛋白及p53磷酸化的改变,利用细胞核、细胞浆分离技术观察其亚细胞定位,用荧光检测法检测AP-1的相对活性。用AP-1的化学抑制剂curcumin抑制其活性,用p53的化学抑制剂pifithrin-α(PFT)抑制其表达,观察了二者的上下游关系。结果2μmol/L B(a)P作用24h后细胞内p53蛋白及p53蛋白20位丝氨酸磷酸化水平增加,并且主要分布在细胞核内;AP-1的活性增加。抑制AP-1活性后,对B(a)P诱导的p53蛋白含量增加没有明显的影响;抑制p53表达后,对B(a)P诱导的AP-1活性的增加没有明显影响。结论B(a)P通过AP-1非依赖的信号通路引起人胚肺成纤维细胞p53蛋白含量的增加。 相似文献
3.
目的 探讨在石英刺激的人胚肺成纤维细胞(human embryo lung fibroblasts,HELF)中转录因子活化蛋白-1(activator protein-1,AP-1)的活性改变,以及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK),AP-1通路在石英诱导的细胞周期改变中的作用.方法 用200 μg/ml石英处理HELF细胞;用免疫荧光法检测细胞外调节蛋白激酶(extracellular signal-regdated protein kinase,ERK)和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)蛋白磷酸化水平及细胞分布;运用AP-1荧光素酶报告基因技术检测AP-1荧光素酶活力;用MAPK显性失活突变体(dominant negative mutant,DN)(DN-ERK2、DN-JNKl和DN-p38)证明通路的上下游关系;用流式细胞术检测细胞周期变化.结果 用200μg/ml石英分别处理转染AP-1报告基因的细胞(HELF-AP-1)6、12、24h,结果显示,AP-1活性随着时间变化而发生变化,6 h活性增强,12 h活性达峰值,24 h活性略有降低;用200 μg/ml石英分别处理细胞1和2 h,结果显示,ERK和JNK在石英刺激1 h后,磷酸化水平升高,主要集中于胞浆,2 h后磷酸化水平进一步升高,并主要集中于胞核;200 μg/ml石英处理细胞24 h,G1期细胞所占比例从(63.80±9.57)%下降到(32.23±7.22)%,S期细胞所占比例从(35.17±10.33)%升高到(66.00±8.07)%;AP-1化学抑制剂姜黄素(20μmol/L)可明显减弱石英引起的G1期细胞比例减少和S期细胞比例增加;DN-ERK和DN-JNK的过表达均可明显降低石英诱导的AP-1活性增强,DN-p38的过表达对石英诱导的AP-1活性增强无明显影响.结论 200 μg/ml石英可诱导AP-1活性增强,并通过ERK、JNK/AP-1通路诱导细胞周期改变. 相似文献
4.
目的 探讨活化蛋白-1(activated protein-1,AP-1)在苯并(a)芘[benzo(a)pyrene,B(a)P]引起的人胚肺成纤维细胞(HELF)周期改变中的作用以及AP-1与细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)和E2F-1/4的上下游关系.方法 转染AP-1荧光报告质粒的HELF细胞(AP-H)无血清培养48 h后,加入2μmol/L B(a)P作用24 h,用荧光检测法检测AP-1的相对活性.用AP-1的化学抑制剂姜黄素(curcumin)抑制其活性,观察它与cyclin D1/CDK4和E2F-1/4的上下游关系.采用流式细胞仪检测细胞周期的变化,用Western blot检测细胞中cyclin D1、CDK4和E2F-1/4蛋白水平的改变.结果 2 μmol/LB(a)P作用24 h后,G1期细胞比例由(71±2)%减少为(48±3)%,差异有统计学意义(P<0.05);AP-1的活性增加;cyclin D1/E2F-1的蛋白含量增加;CDK4/E2F-4的蛋白水平没有明显改变.抑制AP-1活性后,B(a)P诱导的细胞周期的改变被逆转,B(a)P诱导的cyclin D1/E2F-1蛋白含量的增加被抑制,CDK4/E2F-4蛋白含量没有明显改变.结论 B(a)P通过AP-1引起HELF周期的改变.AP-1是cyclin D1/E2F-1的上游信号分子,但对CDK4/E2F-4的表达不具有调节作用. 相似文献
5.
目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路在调控苯并(a)芘[B(a)P]诱导人胚肺成纤维细胞(HELF)c—Jun活化中的作用。方法2.0μmol/LB(a)P处理HELF0、3、6、12、24h后或加入不同浓度B(a)P(0.0、0.5、1.0、2.0μmol/L)处理12h后,通过免疫印迹法检测B(a)P对细胞c-Jun活性的影响;利用p38、c—Jun氨基末端激酶(JNK)以及细胞外调节蛋白激酶(ERK)的显性失活突变体分别阻断p38、JNK和ERK活性后,观察3种MAPKs信号分子与B(a)P诱导c-Jun活化之间的关系。结果在所观察的B(a)P作用时间和浓度范围内,c—Jun蛋白表达量无明显变化;B(a)P可诱导细胞内磷酸化c—Jun(Ser63/Ser73)水平增高,并随着作用时间的延长,细胞内c—Jun的磷酸化水平也逐渐增强,至12h达到峰值(1.61±0.12,1.82±0.18),c-Jun磷酸化Ser63、Ser73与actin灰度比值分别是对照组的20.1倍、15.2倍,作用24h时细胞内c-Jun磷酸化水平呈现下降趋势,而且随着B(a)P浓度的增加,细胞内c-Jun的磷酸化水平也逐渐升高,呈现剂量-反应关系;使用显性失活突变体分别阻断JNK和ERK活性均可明显抑制B(a)P诱导细胞c—Jun磷酸化水平增加,但是阻断p38活性对B(a)P诱导细胞c—Jun磷酸化水平升高无明显影响。结论JNK和ERK信号通路调控B(a)P诱导的HELF细胞c—Jun活化,B(a)P促进c-Jun磷酸化的过程与p38信号通路无关。 相似文献
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目的 探讨p53蛋白在苯并(a)芘[benzo(a)pyrene,B(a)P]诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞周期改变中的作用及其与p21、E2F-1的关系.方法 转染p53 siRNA质粒(p53-H)和载体CMV的HELF细胞(HELF/CMV)无血清培养48 h后,加入2 μmol/L B(a)P作用24 h.用流式细胞仪检测细胞周期的变化.用Western blotting检测细胞中p53、p21蛋白含量的改变,利用细胞核、细胞浆分离技术观察其亚细胞定位.用免疫荧光法观察E2F-1蛋白含量及细胞核、细胞浆分布.利用p53 siRNA质粒和化学抑制剂pifithrin-α(PFT)抑制其表达,观察p53与p21、E2F-1的上下游关系以及其在B(a)P引起的细胞周期改变中的作用.结果 2 μmol/L B(a)P作用24 h后,G1期细胞比例由(71±5)%减少为(39±4)%;p53、p21以及E2F-1蛋白含量增加,并且主要分布在细胞核内.用p53 siRNA质粒和PFT抑制p53表达后,B(a)P诱导的p21高表达被抑制,细胞核内的含量明显减少;B(a)P诱导的E2F-1蛋白含量增加以及细胞周期的改变没有明显变化.结论 B(a)P通过p53非依赖的信号通路引起HELF细胞周期的改变;p53对p21的表达具有调节作用,而对E2F-1的表达不具有调节作用. 相似文献
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目的探讨甘利欣联合阿托莫兰治疗肾移植术后肝损害的疗效。方法选择肾移植术后肝损害患者70例,随机分为2组,治疗组39例,其中男27例,女12例;对照组31例,其中男20例,女11例。术前肝功能检查各项指标均正常。治疗组给予甘利欣注射液30ml加入10%葡萄糖250ml静脉滴注,1次/d,连用14d;阿托莫兰1.2g加入10%葡萄糖250ml静脉滴注,1次/d,连用14d为1个疗程。对照组选用维生素C2.0g+肝泰乐针1.0g加入5%葡萄糖250ml静脉滴注,1次/d,连用14d。结果治疗组39例中显效30例,有效7例,总有效率为94.9%;对照组31例中显效17例,有效率7例,总有效率为77.4%,治疗前后2组患者临床症状及肝功能各项指标均有不同程度改善,治疗组与对照组比较总有效率差异有统计学意义(P〈0.01),而其肾功能指标血清肌酐无明显变化(P〉0.05)。结论甘利欣联合阿托莫兰治疗肾移植术后肝损害,疗效好、安全可靠。并不需停用抗排斥药物,对移植肾功能无影响,值得临床推广应用。 相似文献
10.
[目的]探讨二氯甲烷(DCM)对DNA的损伤作用。[方法]应用吸收光谱移动法观察不同浓度的DCM(2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0μg/μl)与小牛胸腺DNA的加合作用;应用溴乙锭荧光法对不同浓度的DCM(每30μgDNA分别为200、300、400、500、600、700μg)引起的DNA交联作用。[结果]加入2.0~7.0μg/μl的DCM后,DNA的紫外最大吸收峰普遍发生长移(与阴性对照组比较,P<0.05),而且存在剂量-反应关系;每30μg小牛胸腺DNA用200~700μg的DCM直接染毒,DNA交联率由5.53%上升至17.63%,并且具有一定的剂量-反应关系(r=0.979,P<0.05)。[结论]表明DCM能够与小牛胸腺DNA发生加合作用和交联生成作用。 相似文献