神经化组织工程骨构建的初步观察

目的评估两种组织工程骨体内神经化重建方法的成骨效果,研究神经化与成骨的相互关系。方法26只新西兰大白兔,其中24只随机分成四组:组织工程骨组(A组),感觉神经束植入组(B组),运动神经束植入组(C组),血管束植入组(D组);另2只为空白对照组。每只动物均制备左侧股骨长1.5cm的段缺性骨与骨膜缺损,钢板固定后骨缺损处分别植入用四种方法制备的组织工程骨。植入的神经分别是隐神经和股神经肌支。术后4、8、12周摄股骨正位X线片,用放射影像学评分和X线阻射影分析比较骨缺损修复情况。结果在组织工程骨中植入感觉神经束后,比单纯组织工程骨和运动神经束植入的修复效果均有明显提高,而在组织工程骨中植入运动神经束与单纯组织工程骨修复骨缺损的效果相比较无明显差异,感觉神经束植入与血管束植入的成骨效果比较无明显差异,血管束植入组的成骨效果优于其它两组。结论利用感觉神经束植入的方法可以提高组织工程骨的成骨作用,而植入运动神经束却无此作用。     

股骨转子间骨折手术方式与术后早期康复干预对患肢功能恢复的影响

目的:探讨股骨转子间骨折的手术方式及术后早期康复干预对患肢功能恢复的作用。方法:对36例股骨转子间骨折病例中的21例行Richard钉板内固定,15例行解剖型钢板内固定,术后进行康复治疗,包括持续被动运动(CPM、主动抗引力运动、关节屈伸运动及关节抗阻力运动。过渡性部)分负重行走,直至完全负重行走。结果:36例患者随访6个月～5年,患髋关节屈伸范围为伸至180°,屈至60°,骨折全部愈合,5例行走轻度跛行,Richard钉板固定组2例股骨头缺血性坏死。结论:股骨转子间骨折内固定术后行早期康复干预,可减轻肌肉萎缩及关节挛缩,有利于患肢关节功能恢复。     

骨质疏松股骨颈经CCPC强化后螺钉固定的生物力学研究

目的　评价不同直径螺钉固定时添加复合磷酸钙骨水泥 (CCPC)对骨质疏松股骨颈生物力学变化的影响。方法　采用 2 4个股骨上段标本 ,随机分为三组 :深螺纹强化组、中等螺纹强化组和浅螺纹强化组。结果　三组均灌注CCPC ,深螺纹组、中螺纹组和浅螺纹组的螺钉初始松动加载力分别为(32 8 9± 34 9)N、(335 7± 2 6 6 )N、(2 84 8± 2 5 9)N ;最大轴向拔出力分别为 (36 9 5± 2 1 9)N、(36 4 0± 17 5 )N、(30 5 6± 2 4 5 )N ,深螺纹组、中螺纹组均和浅螺纹组差异有显著性意义 (P <0 0 5 )。结论　螺钉直径与骨质疏松股骨颈强化后的稳定性有关。     

高温高湿环境犬肢体火器伤细菌学定量观察

目的探讨高温高湿环境下火器伤弹道细菌定量变化及发生感染的时限,为这一特殊环境下火器伤软组织清创时 机、方法及抗生素的应用提供依据。方法将犬随机分为高温高湿（ＨＨＥ）组和常温常湿（ＮＥ）组,于火器伤后０、４、６、 ８、１２、２４ ｈ进行大体观察及细菌学定量变化的检测。结果伤肢肿胀、组织坏死和动物死亡时间,ＨＨＥ组均较ＮＥ组 严重和提前。细菌学定量检测ＨＨＥ组火器伤伤道细菌数在同一时间点比ＮＥ组高,随时间的延长呈显著增长趋势。 ＮＥ组１２ ｈ细菌数目可达引起感染的临界数值,而ＨＨＥ组８ ｈ时细菌数即达临界数值,较ＮＥ组明显提前。结论高 温高湿环境下火器伤后细菌繁殖快,感染时间提前且严重,强调及早、彻底的清创。     

缝匠肌阔筋膜张肌骨瓣移植治疗青壮年股骨颈骨折

目的观察缝匠肌阔筋膜张肌骨瓣移植治疗青壮年股骨颈骨折的疗效。方法20例(男15例,女5例)患者,骨折切开复位空心加压螺钉或可折螺钉内因定后,取缝匠肌阔筋膜张肌骨瓣植入股骨颈槽内。结果20例骨折全部获得愈合,末见股骨头缺血性坏死。结论青壮年股骨颈骨折采用切开复位内固定,缝匠肌阔筋膜张肌骨瓣移植,可以促进骨折早期愈合,防止股骨头坏死。     

绿色荧光蛋白标记骨髓基质干细胞在恒河猴体内构建组织工程骨的示踪作用

目的 用绿色荧光蛋白(GFP)标记恒河猴骨髓基质干细胞(rBMSC),以示踪其在体内参与组织工程骨形成的情况.方法 用OBI-293A细胞对腺病毒Ad5.CMV-GFP进行扩增,用Ad5.CMV-GFP转染rBMSc,将转染成功的第三代BMSc在转染后48 h消化制成细胞悬液,接种至块状可吸收HA上,体外培养3 d后,将其植入恒河猴(同体移植)背阔肌的肌袋内,以未转染GFP的BMSC用同样的方法接种块状可吸收HA上,作为对照,术后6周取材,4%的中性多聚甲醛固定,塑料包埋,制作骨磨片PI染色在激光共聚焦显微镜下进行观测.结果 转染GFP后,rBMSc仍贴壁生长,呈梭形或多角形,仍分裂增殖,但增殖速度有所降低.48 h可见细胞发出强烈的荧光,呈全细胞分布,计数转染率达80%.在激光共聚焦显微镜下观察骨磨片,可见材料内有发出较强荧光的细胞结构,能同时被PI染液着色.结论 绿色荧光蛋白能有效示踪组织工程骨种子细胞,种人体内的BMSC是组织工程骨骨组织形成的主要细胞来源.     

hBMP7基因转染对兔骨髓间充质干细胞增殖及胶原合成的影响

使用含hBMP7基因的重组逆转录病毒液感染兔骨髓间充质干细胞（BMSc）,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期,^3H脯氨酸掺故法检测I型胶原合成和表达情况。结果显示,经hBMP7基因转染的BMSc与空载体转染及未转染的BMSc在细胞增殖、细胞周期表现方面无显著性差异,经转染的BMSc合成胶原显著高于空载体转染和未转染者。提示采用逆转录病毒介导转染BMSc后能促进细胞的胶原合成,对BMSc增殖和细胞周期无显著影响,有利于进一步 应用于构建组织工程化骨组织。     

肌瓣复合骨形态发生蛋白修复骨缺损中骨骼肌的转归

目的 探讨带血供肌瓣作为骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein，BMP)载体修复骨缺损成骨过程中骨骼肌的转归，方法 制作兔桡骨下段15mm骨缺损，将指深屈肌肌瓣去神经后，转位至缺损区，作为BMP载体来修复骨缺损。通过大体观察、组织学、原位末端标记(TUNEL)及电镜等方法观察骨骼肌的转归。结果 骨骼肌逐渐发生萎缩，8周时肌纤维几乎完全消失，新生骨组织呈条索状桥接两断端；组织学显示骨骼肌萎缩的同时，部分细胞核出现崩解，并有凋亡小体出现；TUNEL染色呈阳性；电镜观察显示骨骼肌肌丝随时间延长逐渐消失，细胞核出现染色质边集、固缩、碎裂，呈典型的凋亡改变。结论 带血供肌瓣复合BMP修复骨缺损成骨过程中，肌纤维逐渐发生萎缩、凋亡，最终被骨组织所替代。     

自体富血小板血浆替代动物血清体外诱导培养人骨髓基质干细胞的实验

目的:用一种新的人骨髓基质干细胞培养方法,以满足细胞培养过程应中对各类细胞因子的需求,同时尽量减少细胞培养过程中动物源性抗原物质的引入,达到组织工程骨临床应用中细胞的数量与生物学特性要求。方法:实验于2004-03/2005-03在南方医科大学组织工程实验室完成。①自体富血小板血浆的获取:将抽取的自体200mL,加抗凝剂混匀,两次离心。第1次在20℃,3000r/min离心10min。取上清及分界面下3mm部分置另一离心管中,第2次在20℃,以3600r/min离心15min。弃上层3/4余部分在旋涡振荡器上轻震荡使混匀,即为富血小板血浆。,剩将富血小板血浆与催化剂溶液(100g/L氯化钙、400IU/mL凝血酶)含以体积比9∶1混合,混匀后以0.22μm滤膜过滤即为富血小板血浆复合因子萃取液。②人骨髓基质干细胞的获取和培养:10名成年健康志愿者(排除其他系统疾病),男7名,女3名;15～35岁,平均年龄27.3岁。抽取骨髓5mL。将获得的有核细胞以2×10接种于10cm培养瓶(100mL/L72富血小板血浆配比低糖DMEM)培养。传代细胞用含100mL/L富血小板血浆,50mg/L抗坏血酸,1×10-8mol/L地塞米松,1×10-3mol/Lβ-甘油磷酸钠诱导培养,快速扩增后,采用倒置相差显微镜、扫描电镜观察各细胞形态及细胞增值情况,碱性磷酸酶染色与钙结节染色等方法对细胞进行生物学特性检测。结果:①人骨髓基质干细胞形态学观察结果:人骨髓基质干细胞接种后2～4h开始贴壁,24h后细胞完全贴壁,呈多角型、梭型。6～8d后,细胞可长满瓶底并呈现单层细胞融合。传代培养后细胞生长迅速,传代诱导后,接种细胞一两天可长满瓶底。细胞为长梭型或不规则多边形,并有伪足伸出,胞核位于细胞一端。细胞生长至第8代生长明显变缓,10代以后细胞内开始出现颗粒样沉积物,并有细胞脱落飘浮于液体中。扫描电镜观察,黏附细胞为梭型或多角型表现,并有多个突起呈不规则形状。②钙结节茜素红染色结果:第3代细胞培养融合后,继续培养至形成密集的细胞团簇,中心出现细胞基质的沉积,茜素红染色可以清晰的显示钙结节。③碱性磷酸酶染色:细胞诱导培养第3代后可见胞质内有大量灰黑色颗粒或块状沉淀,呈现碱性磷酸酶染色阳性。结论:①以自体富血小板血浆替代动物血清体外诱导培养人骨髓基质干细胞,碱性磷酸酶染色与钙结节染色结果显示细胞具有良好的成骨细胞生物学特性。②其所培养的细胞数量及生物学特性能快速达到临床应用的需求,是一种良好的培养方法。     

免陈旧性关节软骨缺损模型的制备

背景：临床所见的骨性关节炎的软骨缺损大多为不规则的、深至软骨下的陈旧性骨缺损，但目前关节软骨缺损动物模型多为新鲜骨缺损。目的：观察制动时间和缺损大小对兔关节软骨陈旧性缺损的影响。设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2004-04／2006-05在南方医科大学创伤骨科组织工程实验室完成。材料：6周龄新西兰大白兔6只，随机分为6，12周观测组两组，每组3只6侧膝关节。干预：无菌操作下显碌露两侧股骨髁关节面，用牙科钻打圆形孔，每孔直径4mm，深度约3mm，达软骨下骨，术毕下肢固定，笼中自由喂养，后膝伸直位制动12周复制的膝关节陈旧性软骨缺损模型。主要观察指标：制动6，12周模型取出关节软骨缺损区标本进行大体观察和组织学切片观察。结果：6只兔均进入结果分析。兔关节软骨及周围组织情况：12周时炎症反应较6周轻，纤维瘢痕化较6周明显：12周时出现增生性改变，尤其是关节周围的肌腱、关节囊、韧带、滑囊等结缔组织较6周时更易形成瘢痕、粘连、纤维化等陈旧性损伤组织学改变。12周后可见自行修复不完全，缺损明显。结论：构建的兔后膝股骨髁关节面软骨缺损直径4mm，深度约3mm，达软骨下骨，符合实验要求，适用于骨性关节炎的基础实验。