SELEX实验中两种富集方法的比较

比较指数富集系统进化配体 (SELEX)实验中 ,液相筛选与固 液相筛选方法的差异对筛选富集库亲和力的影响。液相筛选、膜截留结合核酸的技术路线与固 液相筛选、固相中直接获取结合核酸的途径相比较 ,前一种方法更容易富集到与靶目标结合的目的序列。     

Inhibition of T cells by direct contact with macrophages after murine amputation injury

Objective To determine whether mac-rophages post trauma have inhibitory effect onnormal T cells via direct cell to cell contact. Methods A murine amputation injurymodel was used,macrophages were harvest-ed from abdominal cavity and treated with mi-tomycin-C to abrogate the secretion of cyto-kines.Separation of T cells from splenocytesin normal mice was performed using nylon     

GST Pull-down实验鉴定NF-κB相互作用多肽

目的 体外鉴定NF-κB相互作用多肽与p50和p65间的相互作用。方法 首先构建GST-作用多肽融合蛋白的原核表达载体pET-42a/polypeptide及NF-κB p50和p65亚基保守结构域的原核表达载体pET22b／p50和pET22b／p65，并在大肠杆菌E．coli BL-21中诱导表达，后进行GST pull-down实验验证多肽与NF-κB p50和p65的结合效应。结果 经诱导表达获得了可溶性的GST-多肽融合蛋白和具有DNA结合活性的p50、p65蛋白，GST pull-down实验证实3条多肽与p50发生特异地相互作用。结论 证实3条多肽在体外能与p50发生物理性的相互作用，这为获得靶向NF-κB的功能拮抗多肽工作奠定了基础。     

创面感染防治应注意的几个问题

感染是创伤后的常见并发症,创面/伤道则是伤口外源性与内源性感染的主要入侵途径。本文从七个方面对创面感染防治进行探讨:环境中微生物与伤口感染病原体并非呈一致性关系;污染伤口清创术前或术后进行常规微生物鉴定或培养没有必要;对批量伤员创面感染的处置应遵循"分级救治"与"时效救治"原则;针对创面的新型抗感染策略的临床转化需要加强;对批量伤员的创伤感染预防措施应制定统一的流程;在遵循"早期清创、延期缝合"原则时,需强调"动态监测"与"综合防治";需高度警惕并切实预防创伤后脓毒症发生。     

胰岛素强化治疗对急性重型颅脑损伤患者脑脊液乳酸代谢的影响

目的评价强化治疗和血糖控制对改善合并应激性高血糖的重型颅脑损伤患者脑组织代谢和神经系统预后的意义.方法46例发生应激性高血糖(血糖超过9 mmol/L)的重型颅脑损伤患者配对后随机分为胰岛素强化治疗组和对照组,血糖分别控制在4～6 mmol/L和＜11 mmol/L.硬膜外置管动态监测颅内压(ICP)变化,于入院后1周内每日检测脑脊液乳酸浓度和pH值,并行哥拉斯格(GCS)评分评价中枢神经系统功能恢复情况.结果强化治疗显著降低了恢复期脑脊液乳酸浓度和水肿高峰期颅内压峰值,治疗组GCS评分高于对照组,胰岛素治疗并缩短了ICU监护天数和总住院时间.结论胰岛素强化治疗可改善脑外伤后脑脊液乳酸代谢,降低水肿高峰期颅内压,为神经组织细胞恢复提供稳定微环境.     

p65结合肽与p65的亲和力检测及其对NF-κB DNA结合活性抑制作用的鉴定

目的检测NF-κB p65亚基结合肽与p65间相互作用的亲和常数,以及其对NF-κB DNA结合活性的抑制效应.方法借助于生物传感器技术分析NF-κBp65亚基结合肽与p65相互作用的动力学,同时应用竞争性ELISA鉴定结合多肽对NF-κB DNA结合活性的抑制效应.结果生物传感器技术分析结果表明5条p65结合肽均能与p65发生相互作用,相互作用的亲和常数分别为GST-BPT1:2.67×10-7mol/L、GST-BPT2:9.02×10-6mol/L、GST-BPT3:1.07×10-6mol/L、GST-BPT4:8.03×10-6mol/L、GST-BPT5:9.83×10-7mol/L.竞争性ELISA检测结果表明5条p65结合肽均能在一定程度上抑制NF-κB与其顺式作用元件κB基序的结合,且这种抑制效应随多肽浓度的增加而增强.结论酵母双杂交筛选获得的5条p65结合多肽与p65间确实存在相互作用,且5条结合肽对NF-κBDNA结合活性均有一定的抑制效应,由此提示以这些多肽为先导物设计和开发靶向NF-κB的抗炎多肽药物将成为可能.     

创伤患者外周血单核细胞自噬变化的研究

目的 研究创伤患者外周血单核细胞的自噬变化.方法 ①根据损伤严重度评分(injury severity score,ISS)或简明损伤定级标准(abbreviated injury scale,AIS)将创伤患者分为轻度创伤组、中度创伤组、严重创伤组,同时设立健康对照组,分别于创伤后24 h,3、5、10 d采集外周血,采用密度梯度离心结合贴壁分离法分离创伤患者外周血单核细胞,应用激光共聚焦显微镜和透射电镜观察细胞自噬现象.②将分离得到的单核细胞进行MDC染色并裂解,应用荧光分光光度计(激发光波长380 nm、发射光波长525 nm)测定荧光强度进行定量分析.③于创伤后24 h、3、5 d检测患者血糖水平,分析创伤后自噬与血糖的相关性.结果 与健康对照组相比,创伤患者外周血单核细胞自噬水平明显升高(P＜0.01),创伤后外周血单核细胞自噬水平与创伤程度成正比,与创伤后血糖呈正相关(轻度创伤组:r=0.962,中度创伤组:r=0.928,重度创伤组:r=0.973,P＜0.05).结论 创伤后通过调节单核细胞自噬水平,使机体免疫功能得到恢复,从而改善预后.     

黄芪多糖调节创伤小鼠白介素2及白介素2受体基因表达的实验研究

研究了黄芪多糖对创伤小鼠白介素２ｍＲＮＡ及ＩＬ－２受体ｍＲＮＡ的调节作用。结果显示，ＡＰＳ体内应用可明显升高创伤小鼠脾淋巴细胞ＩＬ－２ｍＲＮＡ及ＩＬ－２ＲｍＲＮＡ水平，促进ＩＬ－２的生成及ＩＬ－２Ｒ的表达，降低创伤小鼠血清，巨噬细胞、Ｔｓ细胞对ＩＬ－２ｍＮＲＡ，ＩＬ－２ＲｍＲＮＡ的抑制活性。