双重实时荧光定量PCR法鉴定克柔念珠菌和光滑念珠菌

目的 建立一种快速、灵敏、特异的鉴定克柔念珠菌和光滑念珠菌的双重实时荧光定量PCR方法.方法 以核糖体基因内转录间隔区Ⅱ(ITSⅡ)为靶目标,设计并合成分别针对克柔念珠菌、光滑念珠菌的种特异引物和探针.建立双重实时荧光定量PCR反应体系,并用该体系对呼吸道相关致病菌进行检测.鉴定结果与临床常规鉴定方法对照,评价其敏感度、特异度及重复性.结果 通过对100例样品的检测,结果显示该双重实时荧光定量PCR法检测标本的鉴定结果与常规鉴定方法的结果对照,特异度为100%,敏感度为100%;最小能检测到10个拷贝数的重组质粒;批内重复实验和批间重复实验结果均与常规鉴定方法结果相符.结论 双重荧光定量PCR法鉴定克柔念珠菌和光滑念珠菌,特异度和敏感度高,重复性好,且快速、简便,该方法将有助于念珠菌病的早期诊断和针对性治疗.     

菌毒血症的诊断和治疗

广州呼吸疾病研究所始建于1979年。经过20多年的不懈努力，现已发展成为一所集科研、医疗和人才培养于一体，国内先进、具有一定国际影响力的大型呼吸疾病研究机构，下设英东-广州重症医学监护中心、呼吸内科、胸外科、基础实验部等部门。目前为广东省呼吸疾病重点实验室、临床医学博士后流动站和博士学位授予权单位．其内科学（呼吸病系）是教育部重点学科、广东省重点学科。其学科梯队合理完善，综合实力雄厚，在哮喘、COPD、重症监护、慢性咳嗽等诊疗领域的研究达到国内先进水平，微创胸外科手术、肺移植手术也在国内具有较高地位。目前共有高级职称人员30多位，博士研究生导师7位，硕士研究生导师18位。在读研究生（含博士后）近70位。近5年承担的省部级以上的课题50项。获得国家科技进步二等奖一项，其它省部级的各种科技成果奖多项。[编者按]     

人髓系细胞触发受体-1模拟多肽的筛选和鉴定

目的寻找能特异性与人髓系细胞触发受体-1（TREM-1）蛋白结合并抑制其传导通路的多肽。方法克隆、表达和纯化TREM-1功能区蛋白，并以之为诱饵蛋白，筛选随机噬菌体展示肽库。经过4轮生物淘洗，通过ELISA方法和单核细胞ELISA方法分析噬菌体克隆与TREM-1蛋白的亲和力。化学合成模拟多肽，检测其对盲肠结扎穿刺（CLP）小鼠的治疗效果。结果成功找到5种噬菌体克隆，ELISA法和细胞ELISA均阳性。应用化学方法合成的模拟多肽HYGMTHPNTMsH能降低CLP小鼠的死亡率。结论模拟多肽HYGMTHPNTMSH对脓毒症小鼠有保护作用。     

荧光定量PCR法检测烟曲霉DNA

目的 建立检测烟曲霉DNA的荧光定量PCR方法,评价其在小鼠侵袭性烟曲霉肺部感染诊断中的意义.方法 根据烟曲霉ITSI区域基因组序列,设计合成引物和荧光标记探针,优化荧光定量PCR条件,从特异性、扩增效率、灵敏度及重复性方面进行评价.建立小鼠烟曲霉肺部感染模型,用荧光定量PCR对36只实验小鼠肺组织及支气管肺泡灌洗液(...     

ICU脓毒症革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶的产酶率和耐药性

目的：调查重症监护中心（ICU）脓毒症（Sepsis）患者的革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶的产酶率和耐药性.方法：收集本单位2003年1月至2004年10月重症监护中心113例Sepsis住院患者的下呼吸道分泌物,做细菌培养,采用Vitek32系统鉴定菌种和Kirby-Bauer法进行药敏试验,以及通过超声波裂解法制备酶粗提物和改良三维试验检测产ESBLs菌株.结果：共203株非重复革兰氏阴性杆菌,位于前四位依次是嗜麦芽窄食单胞菌23.6%（48株）、铜绿假单胞菌22.2%（45株）、肺炎克雷伯氏菌15.3%（31株）、鲍曼士不动杆菌12.8%（26株）.ESBLs总检出率51.7%,其中鲍曼氏不动杆菌检出率最高（80.8%）,其它依次为：大肠埃希氏菌（66.7%）、肺炎克雷伯氏菌（64.5%）、嗜麦芽窄食单胞菌（41.7%）和铜绿假单胞菌（33.3%）,其他菌株（50.0%）.产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株对常用8种抗生素的耐药率比不产ESBLs菌株高,呈多重耐药.结论：引起脓毒症重症患者革兰阴性杆菌中,非发酵菌占大多数,非发酵菌的ESBLs产酶率高,产ESBLs菌株对常用抗生素的耐药率比不产ESBLs菌株高,呈多重耐药,应加强产ESBLs菌的监测.     

ICU多药耐药鲍氏不动杆菌连续流行的同源性分析

目的对某医院中心重症监护病房(ICU)2007年1月-2009年7月3次疑似多药耐药鲍氏不动杆菌(MDRAB)医院流行时间段内的MDRAB进行同源性分析。方法收集ICU住院患者标本中分离的28株MDRAB,以及从该病房环境中分离的7株ABA;运用脉冲场凝胶电泳分析菌株的同源性。结果脉冲场凝胶电泳结果表明,36株菌有4个克隆,其中克隆A包括临床分离株648,3个环境分离株B8、J4、C9;B型、C型全为临床分离株,分别包括1196、1201、1103、1205、1150和3325、3693、3334、3893、4006、4128、4358、3605;D型包括3次临床分离株433、438、458及一个环境分离株(B15)。结论 3次医院流行分别由克隆D、B、C引起,患者间MDRAB的交叉传播是医院流行的主要传播方式,环境样品分离鉴定及同源性分析结果提示,ICU的通风系统是MDRAB流行的源头;严格的消毒、隔离措施,强调手卫生,能有效控制MDRAB的医院流行。     

细菌细胞壁人髓系细胞触发受体-1天然配体的研究

Objective To look for the natural ligand(s) of human triggering receptor expressed on myeloid cell-1 (TREM-1), in order to provide the theoretical basis for elucidation of the pathogenesis of sepsis.Methods Neutrophils and monocytes isolated from human peripheral blood were treated with heat-inactivated Staphylococcus aureus , Pseudomonas aeruginosa , Mycobacterium tuberculosis, Staphylococcus aureus L-form or Pseudomonas aeruginosa L-form respectively for 24 hours.The cell wall was extracted from Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa and Mycobacterium tuberculosis by ultrasound.Neutrophils and monocytes were isolated and treated with the cell wall respectively for 24 hours.Neutrophils and monocytes were isolated and treated with three main components from bacterial cell wall (polysaccharides,lipids and proteins) respectively for 24 hours.The level of TREM-1 mRNA was measured with fluorescent quantitative polymerase chain reaction (PCR), and the concentrations of tumor necrosis factor-α (TNF-α)and interleukin-1β (IL-1β) were measured with enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).Results The TREM-1 mRNA level and the concentrations of TNF-α and IL-1β in cell supernatant of neutrophils and monocytes were upgraded when treated with cell, cell wall and cell wall polysaccharides of Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa.Compared with the blank control group, the TREM-1 mRNA level of neutrophils and monocytes was upgraded to (3.86± 0.20)-fold and (5.15±0.56)-fold respectively when treated with cell wall polysaccharides of Staphylococcus aureus (both P＜0.05);the TREM-1 mRNA level of neutrophils and monocytes was upgraded to (4.03±0.15)-fold and (7.22±0.73)-fold respectively when treated with cell wall polysaccharides of Pseudomonas aeruginosa (both P＜0.05).The effect could be attenuated by the addition of LP17 which could bind TREM-1 ligand.This attenuating effect was not found when the cells were treated with cell, cell wall or cell wall polysaccharides of Mycobacterium tuberculosis.Conclusion The study provides the evidence that TREM-1 natural ligand (s) is present on cell wall of bacteria including Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa, and it might be polysaccharides.     

铜绿假单胞菌相关性肺损伤的蛋白质差异表达研究

目的 利用蛋白质组学方法筛选铜绿假单胞菌急性肺损伤特异相关蛋白质,为鉴别诊断感染与非感染因素引起的急性肺损伤提供理论依据.方法 建立感染(铜绿假单胞菌急性肺损伤)与非感染(包括机械通气急性肺损伤、油酸急性肺损伤)大鼠模型,应用双向凝胶电泳技术分离总蛋白,Image Master双向凝胶电泳软件分析差异表达蛋白质点后,应...     

老年人呼吸衰竭

老龄化问题是全球人口特点之一，这种特点影响到重症监护病房（ICU）重症患者的人口统计学特征。在西方国家的ICU病患者中〉65岁的患者占了48％，并且在未来几十年内将呈持续上升的趋势。目前中国已经进入老龄化社会，≥60岁老年人口达1．44亿，占总人口的11．03％。在未来30年人口老龄化问题更加明显，在ICU50％以上为老年患者。呼吸衰竭是老年患者入住ICU的最主要原因，[第一段]     

重症监护病房铜绿假单胞菌医院获得性感染暴发的流行病学调查

目的对重症监护病房(ICU)铜绿假单胞菌医院获得性感染的暴发进行流行病学调查,并对其同源性进行分析。方法收集微生物和临床资料,评估铜绿假单胞菌感染率的变化。收集ICU环境和ICU医护人员的标本,监测可能的环境传染源。用K-B法对分离的细菌进行耐药性监测,用脉冲场凝胶电泳(PFGE)联合限制性内切酶法,对铜绿假单胞菌进行同源性分析。结果ICU患者的铜绿假单胞菌感染率由非暴发期的18·0%上升到暴发期(2004年5月~7月)的40·0%(P=0·000;OR值3·037;95%可信区间1·672,5·516)。随机选取从不同ICU患者分离的20株铜绿假单胞菌进行PFGE分型,共获得6种PFGE分型,12株为A型,同源性完全相同,其中11株分离自暴发期,该克隆株对青霉素类、头孢菌素类和碳青霉烯类等抗菌药物耐药。采取防治措施后,2004年8月ICU铜绿假单胞菌的感染率降至基线水平(15·4%)。结论铜绿假单胞菌可发生克隆株在ICU患者的交叉感染,引起医院获得性感染的暴发流行,呈多药耐药,应控制该菌在医院内的传播。