NO-1886对高糖高脂饲料喂养新西兰兔糖代谢的影响

合成药NO-1886是脂蛋白脂肪酶(LPL)的激动剂，能降低血浆甘油三酯(TG)并升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)水平。我们曾发现NO-1886还具有降低血糖的作用。本研究主要观察NO-1886对糖尿病兔胰岛素抵抗及β-细胞功能方面的影响。用高糖高脂饲料诱导，使新西兰兔血浆葡萄糖升高，发生胰岛素抵抗。在高糖高脂饲料中添加1％NO-1886进行治疗。结果：发现NO-1886可抑制血清葡萄糖升高，经糖耐量和胰岛素敏感性试验检测，NO-1886可保护胰岛素的急性相分泌，增强胰岛素对葡萄糖的清除能力。研究结果提示NO-1886具有改善胰岛素抵抗、降低血糖的作用。     

下斜方肌肌皮瓣的临床应用

上斜方肌肌皮瓣在修复颈及口底缺损已有不少报道,我们应用下斜方肌肌皮瓣修复枕部、肩背部和侧颈部缺损取得较好效果。 本文介绍3病例。例1为枕后癌肿,因头皮为烧伤疤痕,无法应用局部头皮瓣,而采用下斜方肌皮瓣修复;例2为肩背部癌肿切除后应用对侧下斜方肌肌皮瓣修复;例3为右     

脂肪分化相关蛋白反义寡核苷酸降低乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶活性

目的：已经发现随着细胞内胆固醇酯的积聚，脂肪分化相关蛋白的表达明显增加。本文进一步探讨脂肪分化相关蛋白干预细胞内胆固醇代谢的作用位点。 方法： Ox-LDL组为80 mg/L 氧化低密度脂蛋白与C57BL/6J小鼠腹腔巨噬细胞共同孵育，Ox-LDL+antisense组另加1 mmol/L脂肪分化相关蛋白反义寡核苷酸，在不同的时点取样，共观察4 d。使用荧光分光光度计观察细胞内胆固醇酯的改变；使用脂肪分化相关蛋白抗体间标法结合流式细胞术，观察脂肪分化相关蛋白表达量的变化；使用Ox-r［CL-3H］LDL和液体闪烁计数器观察细胞对氧化低密度脂蛋白摄入量的变化，并同时测定乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶的活性。 结果： 72 h后，Ox-LDL+antisense组细胞内胆固醇酯（19.9±1.9）mg/g protein显著低于Ox-LDL组（46.6±3.4）mg/g protein。4 d观察期间，脂肪分化相关蛋白蛋白的表达量两组细胞都增加，从12 h时点开始，Ox-LDL组大于Ox-LDL+antisense组，在4 d时点，Ox-LDL组明显高于Ox-LDL+antisense组。两组细胞摄入Ox-r［CL-3H］LDL的量逐渐增加，但是，Ox-LDL+antisense组摄入量从1 d后明显低于Ox-LDL组，在2 d和4 d时点，两组差别仍有显著性。乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶相对活性从6 h到2 d表现为增加，在2 d时点，两组比较差别显著，Ox-LDL+antisense组的活性明显低于Ox-LDL组。但从2 d到4 d，乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶相对活性稳定。ACAT的活性与脂肪分化相关蛋白蛋白的表达量相关分析表明，Ox-LDL组R2＝0.6176 （P＜0.05），Ox-LDL+antisense组R2＝0.8212（P＜0.05）。 结论： 抑制脂肪分化相关蛋白表达能引起细胞摄入外源性脂蛋白减少和乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶的活性降低，提示脂肪分化相关蛋白与脂滴的代谢功能密切相关，且乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶有可能是其潜在的位点。     

脂肪分化相关蛋白反义寡核苷酸抑制细胞内胆固醇积聚及其在动脉粥样硬化中的改变

目的：研究ADRP与As发生和发展的关系。方法： 使用80 mg/L Ox-LDL和/或1 mmol/L反义ADRP寡核苷酸与小鼠腹腔巨噬细胞共孵育72 h。测定细胞内胆固醇酯；油红O染色显示细胞内中性脂质；RT-PCR和Western blotting观察反义寡核苷酸对ADRP表达的影响。高胆固醇饲料喂养新西兰白兔12周，复制As模型。测定血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯及动脉壁胆固醇；苏丹Ⅳ染色显示主动脉病变面积；HE染色观察主动脉及肝脏的病变；免疫组织化学方法显示ADRP在主动脉病变区及肝脏中的表达。 结果： 反义ADRP寡核苷酸使细胞内胆固醇酯由（46.6±3.4）mg/g protein下降到（19.9±1.9）mg/g protein，细胞内中性脂质明显减少，ADRP基因和蛋白的表达显著下降。喂高胆固醇饲料的动物血清TC、LDL-C、TG及动脉壁胆固醇显著升高，主动脉病变面积为（40.1±7.3）%，ADRP在主动脉病变区免疫组织化学染色强阳性，在肝脏中染色阴性。结论： 反义ADRP寡核苷酸能够明显抑制由氧化低密度脂蛋白引起的小鼠腹腔巨噬细胞中胆固醇酯的聚集。ADRP在兔As病变中表达明显增高。提示高表达ADRP促使As发生和发展。     

不同底物对HUVEC在血管内支架上粘附生长的影响

目的研究不同底物对人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）在支架上粘附及生长的影响。方法：分别用Ｆｉｂｒｉｎｅｃｔｉｎ、ｐｏｌｙＬｌｙｓｉｎｅ处理血管内支架后将其置入ＨＵＶＥＣ悬液,定时旋转血管内支架,使内皮细胞在支架上充分粘附。比较ＨＵＶＥＣ在底物处理的支架与裸支架上粘附率及生长状况的差异。结果：ＨＵＶＥＣ在裸支架、ｐｏｌｙＬｌｙｓｉｎｅ及Ｆｉｂｒｉｎｅｃｔｉｎ处理血管内支架上的粘附率分别为１９．９２％、３９．８２％、６４．９％,３者比较有统计学上的差异;ＨＵＶＥＣ在Ｆｉｂｒｉｎｅｃｔｉｎ处理的支架上的生长状况也优于其它两种情况。结论：底物Ｆｉｂｒｉｎｅｃｔｉｎ和ｐｏｌｙＬｌｙｓｉｎｅ处理能提高内皮细胞在支架上的粘附率。     

脂肪分化相关蛋白通过抑制中性胆固醇酯水解酶表达促进RAW264.7细胞内脂质积蓄

目的探讨RAW264.7巨噬细胞中脂肪分化相关蛋白(adipophilin)调控中性胆固醇酯水解酶(nCEH)表达进而介导脂质积蓄的作用机制。方法用已成功构建的沉默与高表达Adipophilin的逆转录病毒质粒载体转染包装细胞PA317,继而收集病毒液感染RAW264.7巨噬细胞,筛选出Adipophilin沉默细胞株和高表达细胞株。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹分析技术(Western blot)分别检测nCEH的mRNA和蛋白表达水平,液体闪烁计数仪、高效液相色谱法检测细胞内胆固醇流出及胆固醇酯含量。结果 (1)高表达Adipophilin的细胞组胆固醇、胆固醇酯含量明显高于空白对照组(P0.01),而沉默Adipophilin表达的细胞组则显著低于空白对照组(P0.01),Adipophilin可抑制nCEH mRNA和蛋白的表达。(2)用100 nmol/L蛋白激酶Cδ(PKCδ)激动剂佛波酯(PMA)孵育高表达Adipophilin的RAW264.7细胞30 min后,nCEH的mRNA与蛋白表达水平明显降低(P0.05),而用100 nmol/L PKCδ抑制剂卡马拉素(Rottlerin)同样孵育30 min后,nCEH的表达水平较对照组增高(P0.05)。结论 Adipophilin促进巨噬细胞内脂质积蓄可能通过抑制nCEH表达来实现,在这一调控机制中PKCδ发挥了重要作用。     

中性胆固醇酯水解酶与动脉粥样硬化

目的巨噬细胞来源的负荷有胆固醇酯的泡沫细胞是动脉粥样硬化的标志,并且细胞内胆固醇酯的水解反应是泡沫细胞形成的关键步骤,该反应由中性胆固醇酯水解酶催化。此外,中性胆固醇酯水解酶还调节胆固醇逆向转运,从而参与体内胆固醇的最终清除。为进一步明确动脉粥样硬化的形成,本文针对中性胆固醇酯水解酶的功能及其在动脉粥样硬化发生中的作用进行综述。     

氧化低密度脂蛋白对THP-1巨噬细胞脂质蓄积、亲脂素与过氧化物酶体增殖物激活受体γ表达及蛋白激酶Cα活性的影响

目的:以THP-1巨噬细胞为研究对象,观察氧化低密度脂蛋白(oxLDL)对细胞内脂质蓄积、亲脂素(adipophilin)与过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达以及蛋白激酶Cα(PKCα)活性的影响.方法:用0、10、20、40、80 mg/L oxLDL与THP-1巨噬细胞共孵育24 h,油红O染色和高效液相色谱检测细胞内脂质蓄积情况;半定量RT-PCR和Western blot检测adipophilin、PPARγ和PKCα表达的变化情况;PepTag非放射性蛋白激酶检测法对荷脂细胞胞膜PKCα活性进行定量检测.结果:随着oxLDL浓度的增加,THP-1巨噬细胞内脂滴增加变大,胆固醇酯/总胆固醇比值升高,adipophilin、PPARγ和PKCα表达增强(与0 mg/L oxLDL处理组比较,P均<0.05),胞膜PKCα活性由(0.07±0.01)kU/L增至(0.14±0.02)kU/L(P<0.05).结论:oxLDL可增强巨噬细胞PKCα活性,上调PKCα、PPARγ和adipophilin的表达,促进THP-1巨噬细胞中脂质的蓄积;oxLDL、PKCα、PPARγ和adipophilin之间可能存在着某种调控机制.     

尼群地平对猪主动脉平滑肌细胞泡沫化的影响

为了探讨尼群地平抗动脉粥样硬化的机制，本实验观察了不同剂量的尼群地平对培养的猪主动脉平滑肌细胞泡沫化过程的影响。结果表明，剂量为２．５μｇ／ｍｌ的尼群地平能有效地抑制猪主动脉平滑肌细胞泡沫化     

Adipophilin真核表达载体的构建与表达分析

目的 构建能在真核细胞中表达的adipophilin表达质粒pcDNA3.1-HA-adi.方法 从培养的C57BL/6J小鼠血管平滑肌细胞提取总RNA,在PCR引物中加入HA序列,用RT-PCR及TOPO克隆技术得到HA-adi克隆栽体,测序后,把HA-adi定向插入pcDNATM3.1/myc-His(-)-C的多克隆住点.阳离子聚合物介导转染人THP-1巨噬细胞,用R.T-PCR及Western blot的方法检测目的 蛋白在细胞中的表达.结果 限制性内切酶酶切和DNA测序分析证实成功获得HA-adi基因片段,HA-adi准确克隆入pcDNATM3.1/myc-His(-)-C的多克隆位点.转染THP-1巨噬细胞后,检测到目的 蛋白的表达.结论 成功构建pcDNA3.1-HA-adi,并在THP-1巨噬细胞中得到表达.