SARS病毒S1蛋白重组C端片段免疫效果的实验研究

为获得纯化的重组SARS病毒S1蛋白C端 ,研究其刺激机体产生针对SARS病毒免疫应答的规律和机制 ,将编码SARS病毒S1蛋白C端 311个氨基酸残基的基因克隆 ,并在原核表达系统中表达 ,纯化获得了的重组蛋白。利用SARS患者恢复期的血清 ,对纯化的重组S1蛋白进行血清学分析。结果表明 ,本研究中克隆表达的重组蛋白序列与公布的SARS病毒S1蛋白C端的序列相同 ,其编码的重组蛋白相对分子质量约为 5 90 0 0Mr。SARS患者恢复期的血清均与重组蛋白反应 ,在5 9 0 0 0Mr处形成特异性的反应条带 ,而来自SARS流行前的正常人对照血清则不能与重组蛋白反应。在本研究中获得的重组蛋白可以为研究SARS病毒识别宿主细胞受体的过程及其机制提供条件。     

GM-CSF重组腺病毒诱导人外周见树突状细胞

将GM—CSF腺病毒颗粒转入人外周血单核细胞（PBMC）,从而找到了一种诱导、扩增DC的新途径。进一步的同种混合淋巴细胞反应提示,这种DC比常规培养的人外周血DC有更强的激发T细胞的能力。     

IL-11及可溶性gp130在自体外周血动员过程中的变化及其意义

目的探讨IL-11及sgp130在自体造血干细胞移植的动员过程中的变化及其意义。方法采用生物学活性检测和ELISA检测方法分别对造血动员患者的血清IL～11及sgp130含量进行动态观测。同时通过流式细胞仪及细胞计数观察患者外周血CD34^ 细胞、白细胞和血小板数量变化，对整个动员过程中的上述指标进行动态观察。结果在动员过程中。患者外周血CD34^ 造血细胞、白细胞及血小板计数与血清中IL-11水平呈平行性升高。而血清中sgp130的含量在动员过程中呈下降趋势。结论自体干细胞移植造血过程中，血清IL-11和sgp130的含量与患者CD34^ 细胞数、白细胞和血小板计数有一定的相关性，是监控造血动员过程的重要参数。     

IL-11及可溶性gp130在自体外周血动员过程中的变化及其意义

目的　探讨IL - 11及sgp130在自体造血干细胞移植的动员过程中的变化及其意义。 方法　采用生物学活性检测和ELISA检测方法分别对造血动员患者的血清IL - 11及sgp130含量进行动态观测 ,同时通过流式细胞仪及细胞计数观察患者外周血CD34 细胞、白细胞和血小板数量变化 ,对整个动员过程中的上述指标进行动态观察。结果　在动员过程中 ,患者外周血CD34 造血细胞、白细胞及血小板计数与血清中IL - 11水平呈平行性升高 ,而血清中sgp130的含量在动员过程中呈下降趋势。 结论　自体干细胞移植造血过程中 ,血清IL - 11和sgp130的含量与患者CD34 细胞数、白细胞和血小板计数有一定的相关性 ,是监控造血动员过程的重要参数     

CXCR4在人多发性骨髓瘤细胞的表达及对肿瘤细胞生物学行为的影响

目的　探讨CXCR4在多发性骨髓瘤 (MM)细胞上的表达和CXCR4 SDF 1α相互作用对MM肿瘤细胞生物行为及ICAM 1表达的影响。方法　采用免疫荧光标记和流式细胞仪表型检测分析MM细胞上CXCR4和粘附分子的表达 ;采用体外微孔隔离室实验进行SDF 1诱导的MM细胞迁移实验 ;ELISA方法测定血浆中sICAM 1的水平。结果　①新鲜MM细胞及MM细胞株不同程度地表达功能性CXCR4 [(5 0 .4± 2 7.3) % ],其表达水平与体外对SDF 1α诱导的迁移能力 [(2 3.6± 17.2 ) % ]密切相关 (P <0 .0 1) ;②SDF 1α可上调MM细胞表达粘附分子ICAM 1,ICAM 1的表达和可溶性ICAM 1的产生与CXCR4表达有一定相关性。结论　SDF 1α CXCR4对介导粘附分子的调节效应在MM细胞的生物行为中起重要的作用。     

抗血小板膜糖蛋白Ibα胞内段多肽多克隆抗体的制备及初步应用

目的 制备兔抗人血小板膜糖蛋白(GP)Ibα C端557～561氨基酸序列多肽的多克隆抗体,并初步用于人血小板GPIbα C端559位丝氨酸磷酸化状态的检测.方法 应用化学方法合成C-R-G-S-L-P(559位丝氨酸非磷酸化,Ser559)和C-R-G-s(p)-L-P(559位丝氨酸磷酸化,pSer559)多肽.将2种多肽分别与钥孔蜮血蓝蛋白交联后,以皮下注射法分别免疫新西兰大白兔,分离获得2种抗血清(抗Ser559多抗和抗pSer559多抗).应用斑点印迹和酶联免疫吸附试验(ELISA)方法 对抗血清进行鉴定并检测效价.从人血小板裂解液中分离纯化血小板GPIbα,利用抗Ser559多抗和抗pSer559多抗、采用ELISA方法检测人血小板GPIbαC端559位丝氨酸磷酸化状况.结果 所制备的2种多抗分别特异性识别各自抗原,效价分别为1:32 000和1:64 000.2种多抗均可与纯化的人血小板GPIbα特异结合,表明人血小板GPIbα 559位点丝氨酸存在磷酸化与非磷酸化两种状态.结论 应用人工合成多肽成功制备出2种可特异性识别丝氨酸磷酸化状态的兔抗人血小板GPIbα胞内段多肽多抗,并证明人血小板GPIbαC端559位丝氨酸存在磷酸化状态.     

胚肝细胞中树突状细胞的分离、培养和表型鉴定

本实验主要以胚肝细胞作为细胞来源，通过贴壁处理，分离DCs的前体细胞，在含细胞因子的培养体系中培养，诱导其分化为树突状细胞。比较不同处理和不同来源细胞所得到的树突状细胞生长状况、细胞表型和异同、细胞功能，以寻找一种体外大量扩增人树突状细胞的新方法．     

2，4-二硝基氯苯诱导的特应性皮炎样小鼠模型的皮肤菌群特征研究

【摘要】 目的 探讨不同浓度2,4-二硝基氯苯（DNCB）诱导的特应性皮炎（AD）样小鼠模型特点及皮肤菌群改变。方法 将30只雄性、无特定病原级BALB/c小鼠按随机数字表法等分为3组：阴性对照组小鼠背部涂抹200 μl丙酮和橄榄油（体积比为3∶1）每周2次,连续6周;高、低浓度DNCB组小鼠于第1周的第1、3天均涂抹1% DNCB 200 μl,第2周起分别涂抹0.5%、0.1% DNCB 200 μl,每周2次,连续5周。末次给药24 h后评估皮损严重程度,测量经表皮水分丢失和角质层含水量。实验结束后处死小鼠,切取背部皮肤行组织病理学检查。每组取3只小鼠背部全层皮肤组织样本,通过Illumina Miseq PE300型高通量测序仪检测小鼠背部皮肤菌群16S rRNA基因V3-V4可变区,并分析皮肤菌群的组成结构及不同菌属相对丰度变化。采用单因素方差分析比较3组间各指标的差异,Games-Howell法进行两两多重比较。结果 高、低浓度DNCB组小鼠皮损严重程度评分分别为（9.83 ± 2.45）分、（2.71 ± 0.56）分,均显著高于阴性对照组［（0.51 ± 0.12）分］,t值分别为-7.19、-2.85,均P < 0.05。高、低浓度DNCB组经表皮水分丢失值均显著高于阴性对照组（t值分别为-7.72,-2.68,均P < 0.05）,而角质层含水量显著低于阴性对照组（t值分别为6.77、5.99,均P < 0.05）;高浓度DNCB组经表皮水分丢失值显著高于低浓度DNCB组（t = 2.76,P < 0.05）,而高、低浓度DNCB组间角质层含水量差异无统计学意义（P > 0.05）。3组间棒状杆菌属相对丰度差异有统计学意义（F = 249.85,P < 0.001）,高浓度DNCB组棒状杆菌属丰度显著升高。3组小鼠皮肤样本observed species和Chao1指数差异均无统计学意义（均P > 0.05）,而高浓度DNCB组Shannon指数显著低于阴性对照组和低浓度DNCB组（t值分别为6.96、-6.37,均P < 0.05）。结论 DNCB可诱导小鼠皮肤形成AD样皮炎,其皮损严重程度、屏障功能受损程度与DNCB浓度相关;高浓度DNCB组小鼠皮肤菌群物种多样性明显下降,高浓度DNCB造模对研究AD的微生物学变化更具优势。     

SARS病毒表面蛋白抗原决定簇的免疫信息学分析

SARS病毒是一种新近发现的冠状病毒,其表面蛋白可与细胞上的相应受体结合,导致人类发生严重急性呼吸道综合征(SARS)等疾病.通过免疫信息学的方法,我们对该病毒的表面蛋白进行了分析.结果显示,SARS病毒与常见的人类冠状病毒相比,其编码的表面蛋白中可以被人类免疫系统识别的抗原决定簇明显改变和减少.由此表明,SARS病毒引起人类发生严重疾病的原因可能与该病毒逃避机体免疫识别有关.因此,利用免疫信息学分析SARS病毒特有的或免疫应答比较强的决定簇,从中找到抗原肽疫苗的候选位点,可以为研制针对SARS病毒的有效疫苗提供重要的理论依据.