量子点对口腔鳞癌Tca8113活细胞中bcl-2、bax的荧光标记观察

目的:探讨量子点对口腔鳞癌(OSCC)活细胞bcl-2、bax蛋白进行观察研究。方法:量子点QD605,QD545通过间接免疫荧光法,在激光共聚焦显微镜下观测人舌癌Tca8113活细胞内bcl-2、bax蛋白与量子点孵育0.5 h、1.0h、1.5 h和2.0 h的荧光成像。结果:量子点对OSCC活细胞中的bcl-2、bax蛋白的观察研究显示:在0.5 h～2.0 h时,QD605和QD545与bcl-2、bax蛋白结合,荧光从分布于胞浆边缘逐渐至胞浆。结论:量子点能对活细胞内蛋白进行观察。     

应用蛋白质芯片技术筛选人舌鳞癌细胞株差异性炎症因子的初步研究

目的研究应用蛋白质芯片(抗体芯片)技术筛选、分析人舌鳞状细胞癌细胞株中差异性炎症因子的效果,为进一步探讨口腔癌与炎症的关系奠定基础。方法体外培养人舌鳞癌细胞株UM-1、CAL-27、Tca-8113和人正常口腔黏膜上皮细胞,消化后分别提取胞内、胞外蛋白,上芯片孵育,封闭,清洗。采用激光扫描仪扫描芯片,Axon GenePix Pro6.0软件提取芯片数据,对获得的80种炎症因子表达数据采用AAH-CYT-G5软件分析,上调因子信号值以大于200、比值大于2.0为纳入标准;下调因子信号值以大于200、比值小于0.66为纳入标准,分别对3种人舌鳞癌细胞株(UM-1、CAL-27、Tca-8113)与人正常口腔黏膜上皮细胞,以及高侵袭性细胞株(UM-1、CAL-27)与低侵袭性细胞株(Tca-8113)进行两两比较,筛选出差异性炎症因子。挑选3种显著差异性炎症因子,用酶联免疫吸附法再次检测其蛋白表达,所得结果用单因素方差分析进行统计学分析,进一步验证芯片法所获得的结果。结果根据纳入标准,从检测的80种因子中筛选出有表达的炎症因子9个,包括干扰素诱导蛋白10(inter-feron inducible protein10,IP-10)、巨噬细胞炎症蛋白-1β(macrophage inflammatory protein1β,MIP-1β)、巨噬细胞炎症蛋白-3α(macrophage inflammatory protein-3α,MIP-3α)、骨保护素蛋白(osteoprotegerin,OPG)、调节活化蛋白(regulated upon activation normal T-cell expressed and secreted,RANTES)、白细胞介素1β(interleukin1β,IL-1β)6种舌鳞癌细胞株中高表达的细胞因子,及单核细胞趋化因子4(monocyte chemoattractant protein4,MCP-4)、胰岛素样生长因子结合蛋白4(insulin-like growth factor binding protein-4,IGFBP-4)、转化生长因子-β3(transforminggrowth factor-β3,TGF-β3)3种舌鳞癌细胞株中低表达的细胞因子。鳞状细胞癌细胞和正常口腔鳞状上皮细胞之间比较,胞内IL-1β呈高表达,MCP-4呈低表达,胞外OPG呈高表达;高、低侵袭性细胞株之间比较,胞内RANTES呈高表达,IGFBP-4、TGF-β3呈低表达,胞外IP-10、MIP-1β、MIP-3α呈高表达。酶联免疫吸附法检测发现UM-1和CAL-27胞外IP-10、MIP-1β、MIP-3α的表达量和Tca-8113相比呈高表达,差异有统计学意义(P<0.05)。其结果与芯片筛选结果一致。结论蛋白质芯片技术能够较为准确地筛选出不同舌鳞癌细胞株之间差异性炎症因子,这些差异性炎症因子可能与肿瘤细胞的生物学行为有一定的联系。     

量子点对口腔鳞癌细胞活性的影响

目的 探讨量子点对口腔鳞癌活细胞的影响。 方法 通过MTT法检测不同浓度量子点对口腔鳞癌细胞活性的影响。 结果 在4 、8h时各实验组与空白对照组无统计学意义（P＞0.05）;在12 、16h及20h时,除量子点终浓度为20nmol/L组与空白对照组无统计学意义（P＞0.05）,其它各组与空白对照组有统计学意义（P＜0.05）。 结论 量子点浓度低于20nmol/L时,对细胞活性无明显的影响。     

量子点荧光技术标记口腔鳞癌细胞中bax的应用研究

目的利用量子点(QD)优良的光学性质对人舌癌Tca8113细胞内bax进行特异性荧光标记。方法利用QD545nm通过间接免疫荧光法,在激光共聚焦显微镜下观测人舌癌Tca8113细胞内bax的表达,并激光连续照射1 h,用激光共聚焦显微镜自带软件Leica Confocal Software测量量子点QD545nm的荧光信号强度。结果激光共聚焦显微镜下可见人舌癌Tca8113细胞内bax明显表达,且激光连续照射1 h,QD545nm标记的荧光未见明显衰减,而FITC标记的荧光1 h内已基本淬灭。结论量子点荧光标记技术能对细胞内bax进行标记。     

血管化游离组织瓣移植在口腔颌面部缺损修复中的应用

目的:探讨血管化游离组织瓣移植在口腔颌面部缺损修复中的应用价值。方法:自2005年10月至2011年3月,应用119块血管化游离组织瓣修复118例口腔颌面部缺损患者,分析选择游离组织瓣的类型、受区血管和组织瓣成活情况,并探讨影响血管化游离组织瓣成功率的相关因素。结果:119块血管化游离组织瓣为游离前臂皮瓣58块,游离腓骨肌皮瓣50块,游离股前外侧皮瓣10块,游离背阔肌皮瓣1块;口腔颌面部缺损部位为舌缺损49例,颊及口咽缺损10例,口底缺损7例,下颌骨缺损38例,上颌骨缺损12例,下颌骨和口咽复合型缺损1例,偏侧颜面萎缩1例。117块游离组织瓣成活,1块游离腓骨肌皮瓣和1块游离股前外侧皮瓣坏死,游离组织瓣临床成功率为98.3%;术后血管危象发生率为4.2%(5/118),抢救成功率60%。结论:合理地应用血管化游离组织瓣移植修复口腔颌面部缺损,能较好地恢复患者的面部外形和口腔功能,且较为安全可靠,值得临床推广应用。     

京尼平交联丝素蛋白—壳聚糖缓释微球的制备与表征

目的 研究不同浓度京尼平和不同丝素蛋白( silk fibroin, SF)与壳聚糖( chitosan, CS)比例制备的SF-CS复合微球包载和缓释牛血清白蛋白( bull serum albumin,BSA)的效能. 方法 无机乳化交联法制备SF-CS微球,取其中SF:CS=1:1比例的微球包载BSA,并与单纯的CS微球进行对比,考察微球的包载效能和缓释效能. 扫描电镜观察微球表面形态,激光粒度分析仪测定微球直径,X射线衍射、傅里叶红外光谱及热重分析对微球表征进行分析,BCA法测定微球的包封率、载药率和累积缓释率. 结果 以m(CS):m(SF)为1:0. 5和京尼平0. 1 g或0. 5 g、m(CS):m(SF)为1:1和京尼平0. 05 g或1 g、m(CS):m(SF)为1:2和京尼平0. 5 g,制备的微球形态较为规则、圆滑,粒径分布在70~150μm. 以m(CS):m(SF)为1:1和京尼平0. 05 g,按投药量10 mg、20 mg或50 mg的BSA制备微球,包封率分别为(50. 16 ± 4. 32)%、(56. 58 ± 3. 58)%和(42. 19 ± 7. 47)%,傅里叶红外光谱、X射线衍射和热重分析的结果证明SF和CS发生交联, BSA、CS和SF间没有发生任何化学反应. 投药量10 mg、20 mg和50 mg组微球缓释结果显示,第1 天分别爆释总量的(30. 79 ± 3. 43)%、(34. 41 ± 4. 46)%和(41. 75 ± 0. 96)%,21 d累积释放(75. 20 ± 2. 52)%、(79. 16 ± 4. 31)%和(89. 04 ± 4. 68)%,以同样方法制备的BSA投入量为10 mg纯CS微球,第1天爆释总量的(39. 53 ± 1. 76)%,21 d爆释(83. 57 ± 2. 33)%. 结论 SF-CS复合微球比单纯的CS微球有更佳的缓释效能,可能是一种有效的药物转运系统.     

量子点联合Cy5双重荧光标记人舌鳞状细胞癌细胞蛋白质的应用研究

目的 比较以量子点(quantum dots,QDs)与Cy5荧光染料对人舌鳞癌细胞株Tca8113细胞中热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)和survivin蛋白质进行双重免疫荧光标记时蛋白质的分布及荧光的稳定性.方法 以QDs和Cy5荧光染料对Tca8113细胞内HSP70和survivin蛋白质进行双重免疫荧光标记,在激光共聚焦显微镜下同时观察Tca8113细胞内的HSP70和survivin蛋白质表达及分布.激光连续照射2 420 391 ms,用激光共聚焦显微镜自带软件Leica Confocal Software测量QDs和Cy5的荧光信号强度变化.结果 激光共聚焦显微镜下可见Tca8113细胞内HSP70和survivin蛋白质均有明显表达,分别表现为绿色和红色荧光,其中两种蛋白质重叠处呈黄色荧光.激光连续照射2 420 391 ms,QDs标记的绿色荧光未见明显衰减,而Cy5荧光染料标记的红色荧光基本淬灭,随着Cy5荧光的淬灭,绿红黄三色通道下所见的红绿黄3种颜色的荧光也逐渐消退直至变成单色的绿色荧光.结论 QDs对光漂白的抵抗能力强,比Cy5荧光染料具有更高的光稳定性,更加适用于细胞内蛋白质的长时间动态监测的研究.     

两种粒径量子点在人舌鳞癌细胞中双色荧光成像的应用研究

目的 研究粒径655 nm和525nm的两种量子点(quantum dots,QDs)对人舌癌Tca8113细胞内2种热休克蛋白( heat shock protein,HSP)进行特异性荧光标记的成像效果和稳定性,为今后的连续动态观察提供实验依据.方法利用QD655nm和QD525nm,对人舌癌Tca8113细胞内HSP90蛋白和HSP70蛋白进行特异性双重荧光标记,激光连续照射2420391 ms,在共聚焦显微镜下同时观测人舌癌Tca8113细胞内的HSP90蛋白和HSP70蛋白表达及分布,用软件Leica Confocal Software测量量子点QD655nm和QD525nm的荧光信号强度变化.结果 激光共聚焦显微镜下可见人舌癌Tca8113细胞内HSP90蛋白和HSP70蛋白均有明显表达,分别表现为红色和绿色荧光,两种蛋白重叠处呈黄色荧光,在激光连续照射中,两种荧光有所衰减,其中QD655nm的荧光强度值下降相对较快、幅度相对较大.结论 量子点荧光标记技术能同时对人舌鳞癌细胞中HSP90蛋白和HSP70蛋白进行双重标记,而且QD655nm与QD525nm都具有较强的光稳定性,均可用于蛋白的长时间动态监测,其中QD525nm的稳定性更好.