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以分子医学实验教学体系为主体创建分子医学技能学习型网络课程,进行课程网页、网络教学课件、实验技能录像、在线自测题库、网络教学资源库、实验室仪器设备网络管理系统等的建设,打造学科数字化实验教学资源平台。并将教学信息和参考资源有机地融入到教师和学生的教与学的整个过程中,形成全方位、立体化的新型实验教学体系。 相似文献
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目的:建立可诱导性沉默hTERT的 RNA干扰系统,并初步探讨端粒酶与细胞增殖调控之间的关系。方法: 构建沉默端粒酶催化亚基hTERT的Tet-on可诱导性RNAi载体psiRNA-hH1/TO-hTERTshRNA,并稳定转染表达TR的TREx-HeLa细胞,用半定量RT-PCR检测hTERT的转录后水平,TRAP法检测端粒酶活性。MTT法检测细胞的增殖,流式细胞仪和Hoechst33342染色法观察细胞凋亡。结果: 构建了可诱导性沉默端粒酶催化亚基hTERT的重组体psiRNA-hH1/TO-hTERTshRNA,并建立了可诱导性沉默hTERT的TREx-HeLa细胞株。短期内的端粒酶活性降低后TREx-HeLa细胞生长增殖有下降趋势,而其凋亡情况则未见明显变化。结论: 本研究建立了可诱导沉默hTERT的RNAi系统,为研究端粒酶活性与细胞增殖和衰老的关系提供了实验基础。 相似文献
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目的对中国汉族人群的apoB VNTR等位基因进行分布频率、序列结构等多态性分析,并通过分子克隆技术制备apoB VNTR等位基因分型标准物。方法通过PCR扩增并结合电泳、测序等方法分析人群apoB VNTR等位基因的多态性,并将该人群中得到的所有类型等位基因片段插入pUC重组质粒,经转染、扩大培养、扩增及再鉴定后,制备出apoB VNTR等位基因分型标准物。结果所检测人群中共检测出16种apoB VNTR等位基因,发现核心序列存在变异体,并成功制备出分型标准物。结论对apoB VNTR的多态性分析应结合等位基因的分布频率与核心序列的结构,所制备的apoB VNTR等位基因分型标准物使apoB VNTR电泳法分型更加准确。 相似文献
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教学实验室、实验技术人员团队,实验教师团队是完成实践型教学的三大基本要素。本研究从分子医学实验平台的综合型网络化管理体系建设;一专多能、点面结合的技术人员团队和实验技术系统建设;因地制宜、灵活多样的组合型教师团队建设,构建一个三者之间既各成体系又有机组合的立体化管理模式,以其形成高质高效运作的实验教学系统,同时为学生探索性实验、学生科研活动以及实验设施的开放使用等提供一个便捷实用、渠道通畅的实验空间,最终目标是使实践学教学的整体水平达到一个新的层次。 相似文献
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目的研究姜黄素(curcumin)对人喉癌细胞Hep-2增殖和端粒酶活性表达水平的影响。方法CCK-8法检测不同浓度姜黄素作用于Hep-2后24h、48h、72h的细胞增殖活性:集落形成试验检测不同浓度姜黄素作用于Hep-2后的细胞增殖抑制率;StretchPCR-银染法检测细胞端粒酶活性变化。RT—PCR分析端粒酶主要组分hTERT的mRNA表达情况。结果①姜黄素对Hep-2细胞的增殖抑制作用具有时间和剂量依赖性。五种浓度(20μmol/L、40μmol/L、60μol/L、80μmol/L、100μol/L)姜黄素作用12、24、48、72小时后,IC50分别为81.17μmol/L、40.90μmol/L、33.26μmol/L、31.63μmol/L;②四种浓度(20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L、80μmol/L)姜黄素作用于Hep-2细胞48h,-周后各组Hep-2细胞集落形成数和细胞增殖抑制率均呈浓度依赖性.其细胞增殖抑制率与对照组相比,分别为36.25%、57.4%、98.48%、100%;③60μmol/L姜黄素作用于Hep-2细胞24、48、72小时后。与对照组相比,端粒酶活性总光密度值(IOD)分别下降23.19%、60.28%和70.15%,各时间组间有显著性差异(P〈0.01);端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达水平IOD值分别下降2.90%、58.69%和88.35%,各时间组间有显著性差异(P〈o.01)。结论姜黄素可抑制体外培养的Hep-2细胞的增殖活性,下调hTERTmR.NA的转录水平并抑制细胞的端粒酶活性,有较好的临床应用前景。 相似文献
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人纤溶酶原K5突变体Ⅰ的构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化 总被引:2,自引:0,他引:2
[目的]构建人纤溶酶原Kringle 5(K5)的突变体Cys461-Cys540(K5 mut1),在大肠杆菌中表达,亲和层析纯化,为探讨K5抗血管增生活性与Kringle结构域的关系提供基础.[方法]以K5全长cDNA为模板用PCR的方法扩增人纤溶酶原K5mutl基因,将其克隆进表达载体pET-22b( )中,并用限制性核酸内切酶酶切和DNA测序鉴定其连接正确;pET-22b( )/K5 mut1转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物用固化Ni2 -His Bind Resin亲和层析方法纯化,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot方法分析鉴定.[结果]PCR扩增获得258 bp的人纤溶酶原K5 mutl基因片段,正确插入pET-22 b( )载体,在大肠杆菌中该基因编码蛋白的表达量占菌体总蛋白13%左右;SDS-PAGE显示其相对分子质量M1≈14.1×103,Western blot证实该表达蛋白为K5 mut1重组蛋白,经亲和层析后K5 mut1重组蛋白纯度大于90%,获得率约为10 mg/L.[结论]成功构建人纤溶酶原K5 mut1,实现在大肠杆菌中高效表达,亲和层析纯化获得较高纯度K5 mut1重组蛋白. 相似文献