贝莱斯芽孢杆菌Y6杀螺活性及其机制的初步研究

目的　评价芽孢杆菌Y6实验室内杀螺活性,初步探讨其杀螺作用机制。方法　应用形态学、生理生化特性及16S rDNA 基因序列同源性分析,对菌株Y6进行生物学鉴定。配制浓度分别为0.005、0.010、0.015 g/mL的芽孢杆菌Y6悬液,采用浸泡法评价其室内杀螺效果。检测芽孢杆菌Y6悬液浸泡后钉螺软体组织内Y6菌体含量和糖原含量变化,初步探讨其杀螺机制。结果　Y6菌落呈乳白色、不透明,在营养琼脂培养基表面有菌膜形成;革兰氏染色呈阳性,杆状;芽孢位于菌体中间,呈无色透明折光小体,被菌体包裹;卵磷脂酶试验呈阳性,Y6菌体16S rDNA基因序列与多株贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensisis）、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）同源性均为100%,将菌株Y6鉴定为贝莱斯芽孢杆菌。0.005、0.010、0.015 g/mL 芽孢杆菌Y6悬液浸泡24、48、72 h后,钉螺死亡率分别为28.3%、31.7%和81.6%,43.3%、58.3%和93.3%及63.3%、78.3%和98.3%;随着悬液浓度增加、浸泡时间延长,菌株Y6悬液杀螺效果提高。采用染色镜检法和平板菌落计数法观察发现,菌株Y6悬液浸泡后的死螺体内Y6菌体含量最高、活螺体内最低;经芽孢杆菌Y6悬液浸泡后,死螺、濒死螺和活螺软体组织内平均糖原含量分别为（0.68 ± 0.06）、（1.09 ± 0.16） μg/mg和（2.56 ± 0.32） μg/mg（F = 59.519,P < 0.05）,活螺软体组织内平均糖原含量显著高于死螺（t = 14.073,P < 0.05）和濒死螺（t = 10.027,P < 0.05）,而濒死螺软体组织内平均糖原含量显著高于死螺（t = 5.983,P < 0.05）。结论　贝莱斯芽孢杆菌Y6对钉螺具有较好杀灭效果,其杀螺机制可能是菌体侵染致螺体内糖原代谢紊乱而引起钉螺死亡。     

模块式教学法在医学微生物学中的应用

医学微生物是一门重要的医学基础课程,由于传统教学方法的广泛使用,使得医学微生物教学存在理论脱离实际,基础脱离临床,教学方法单一,学生缺乏学习兴趣、学习被动等问题.模块式教学法能有效整合教学资源,改变上述教学中存在的问题,提高授课效率,变学生被动学习为主动,促进学生对基础理论知识的理解和掌握,加强学生分析问题和解决问题等综合能力的培养,为今后临床课程的学习打下坚实的基础.     

低HMGB1含量的肿瘤细胞裂解物增强树突状细胞的抗肺癌作用

目的 探讨低含量高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的肿瘤细胞裂解物（TCL）对树突状细胞抗肺癌作用的影响。方法 反复冻融的方法制备Lewis肺癌细胞TCL。Western blot检测TCL中HMGB1蛋白的表达情况。用30 nmol/L甘草酸（GA）抑制Lewis肺癌细胞中HMGB1的表达,进而制备低含量HMGB1的TCL(LH-TCL)。用未处理的Lewis肺癌细胞制备正常含量HMGB1的TCL(NH-TCL)。分为不同剂量NH-TCL负载DC组、LH-TCL负载DC组及PBS对照组,用流式细胞术检测体外诱导的小鼠树突状细胞（DC）表面CD11b、CD11c、CD86表达或细胞凋亡,用酶联免疫吸附试验检测DC细胞IL-12分泌情况。分为NH-TCL刺激DC活化的脾细胞组、LH-TCL刺激DC活化的脾细胞组及PBS对照组,用流式细胞术检测小鼠脾细胞表面CD69的表达情况,酶联免疫吸附试验检测小鼠脾细胞TNF-β的分泌。分为NH-TCL刺激DC活化的脾细胞组、LH-TCL刺激DC活化的脾细胞组及PBS对照组,并设5∶1、10∶1、20∶1三个效靶比进行体外杀伤实验,采用CCK8法检测小鼠...     

肺癌细胞裂解物对树突状细胞的免疫抑制作用

目的:研究Lewis肺癌细胞裂解物对小鼠树突状细胞(DC)的免疫抑制作用。方法:反复冻融法制备Lewis肺癌细胞裂解物,骨髓冲洗提取C57/BL6小鼠DC,GM-CSF、IL-4体外诱导培养DC,ELISA检测肿瘤细胞裂解物(TCL)中透明质酸(HA)含量,ELISA检测DC培养上清液中IL-12和IL-10水平。结果:经检测,Lewis肺癌细胞TCL中含有HA,其含量为42 mg/ml。将这种TCL作用于C57/BL6小鼠DC,同对照组相比,DC的IL-12分泌水平显著下降(P<0.01),而IL-10的分泌水平显著提高(P<0.01),这符合免疫耐受DC细胞因子分泌特点。在用Pep-1抗体封闭DC表面的HA受体CD44后,DC的IL-12、IL-10分泌水平则恢复至同对照组相同的水平(P>0.05)。结论:Lewis肺癌细胞裂解物中含有HA。通过这种物质,肺癌细胞裂解物可以诱生鼠源免疫耐受性DC,从而抑制DC的免疫活性。     

硫化氢缺血后处理对家兔心肌缺血/再灌注损伤的影响

目的研究硫化氢（hydrogen sulfide,H2S）缺血后处理能否减轻家兔心肌缺血/再灌注损伤。方法将24只家免随机分为缺血/再灌注（IP）组、缺血后处理（IPO）组和硫氢化钠（H2S供体）后处理（NPO）三组,每组8只。观察各组家兔的心率（HR）、左室发展压（LVDP）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和心肌梗死面积变化。结果缺血180min后,NPO组心率较IP组、IPO组明显下降（P分别〈0.05）;与IP组相比,IPO组及NPO组LVDP显著升高（P分别〈0.05,〈0.01）,且NPO组LVDP升高较IPO组明显,差异有统计学意义（P〈0.05）。②与IP组比较,IPO组及NPO组血清中MDA含量显著下降（P分别〈0.05,〈0.01）,同时SOD活性显著上升,差异有统计学意义（P分别〈0.05,〈0.01）;NPO组MDA含量较IPO组降低,差异有统计学意义（P〈0.05）,而SOD活性增高,差异有统计学意义（P〈0.05）。③与IP组心肌坏死面积（45.2±4.3）%比较,IPO（34.3±6.2）%和NPO（23.4±4.6）%显著减少再灌注家免心肌坏死面积（P分别〈0.05）,且NPO组比IPO组心肌坏死面积减小更明显,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 H2S后处理能减轻家兔心肌缺血/再灌注损伤,对心肌有保护作用。     

乙肝病毒表面抗原冲击的树突状细胞诱导记忆T细胞的形成及增殖研究

目的 探索在体外用乙肝病毒表面抗原(HBsAg)冲击的树突状细胞(DC)诱导记忆T细胞(Tm)的形成及增殖.方法 选择健康志愿者,分低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组各6例,且分相应的低剂量自身对照组、中剂量自身对照组、高剂量自身对照组各6例.低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组分别以10 ng/ml、20 ...     

温度胁迫对湖北钉螺部分呼吸酶的影响

目的 探索温度胁迫(高温和低温)情况下湖北钉螺体内细胞色素氧化酶和琥珀酸脱氢酶两种酶的含量变化情况。 方法 将钉螺随机分成对照组、低温组和高温组,分别放置于 20 ℃ 、4 ℃和 37 ℃环境中,24 h 后取钉螺软体组织,测定各组钉螺细胞色素氧化酶和琥珀酸脱氢酶的含量。 结果 对照组、低温组和高温组三组钉螺软体组织中细胞色素氧化酶含量分别为(27. 11±2. 31) U / L、(21. 90±0. 32)U / L 和(21. 42±1. 84)U / L,三组间不全相同,且差异有统计学意义( F= 10. 145,P<0. 05);琥珀酸脱氢酶含量分别为(1. 30±0. 002) U / L、(1. 24±0. 05) U / L 和(1. 12±0. 02)U / L,三组间不全相同,且差异有统计学意义( F= 124. 624,P<0. 05)。 结论 湖北钉螺在温度胁迫状态下,其软体组织中细胞色素氧化酶和琥珀酸脱氢酶的含量均降低。     

MHSP65-TCL抗黑色素瘤疫苗对免疫细胞活性的影响

目的研究B16黑色素瘤来源的MHSP65-TCL疫苗对黑色素瘤的治疗作用,以及该疫苗在疾病治疗过程中对免疫细胞活
性的影响。方法利用反复冻融的方法裂解B16黑色素瘤细胞制备肿瘤细胞裂解物（TCL）,将TCL同结核分支杆菌热休克蛋白
65（MHSP65）联用制备MHSP65-TCL。于不同时间点,给B16黑色素瘤荷瘤小鼠免疫MHSP65-TCL疫苗,观察该疫苗抑制黑
色素细细胞瘤的情况。与此同时,为了验证MHSP65-TCL中的TCL对免疫细胞活性的影响,我们将TCL于体外作用于小鼠脾
细胞,然后流式检测脾细胞CD69表达、脾细胞凋亡以及细胞培养上清液中IL-10和IFN-γ的表达情况。结果通过小鼠体内抑
瘤实验发现,B16黑色素瘤来源的MHSP65-TCL疫苗在小鼠体内产生了抑制黑色素细胞瘤的作用。通过体外细胞实验发现,
MHSP65-TCL中的TCL可以显著刺激体外培养的小鼠脾细胞的活化。除此之外,与这种细胞活化作用相反的,发现TCL还可
以诱导一部分体外培养的小鼠脾细胞发生凋亡,并促进脾细胞分泌IL-10,同时抑制IFN-γ的分泌。结论B16黑色素瘤来源的
MHSP65-TCL疫苗对黑色素瘤具有抑制作用。这种抑制作用主要是通过活化免疫细胞产生的。MHSP65-TCL的主要成分
TCL对免疫细胞还有抑制作用。这可能同TCL中存在的一些免疫细胞抑制物质有关。这些物质的明确以及去除将有助于提
高MHSP65-TCL疫苗的抗肿瘤效力。
     

大蒜素对烟曲霉菌感染小鼠的细胞免疫功能的影响

目的:探讨大蒜素对烟曲霉菌感染的免疫抑制小鼠细胞免疫功能的影响。方法:将30只昆明种(KM)小鼠随机分为对照组、预防组、治疗组,每组10只。实验前均给予腹腔内注射环磷酰胺(CY)200 mg/kg,制备免疫功能抑制模型鼠。实验时,预防组灌服大蒜素溶液14 d,治疗组灌服大蒜素溶液7 d(第8~14天),对照组灌服等量生理盐水14 d,并于实验第8天时给各组小鼠麻醉后鼻腔滴入烟曲霉菌孢子悬液。采用MTT法检测各小鼠T细胞活性;采用ELISA法检测各小鼠脾细胞培养上清液中IL-12、IFN-γ的表达水平。结果:预防组T淋巴细胞增殖活性、IFN-γ、IL-12水平与对照组比较,差异有显著性(P<0.01);治疗组与对照组比较,两者间有显著性差异(P<0.01);预防组和治疗组比较,两组间也有差异(P<0.05)。结论:治疗组和预防组脾脏T淋巴细胞增殖活性、IL-12和IFN-γ的水平均有提高,提示大蒜素可提高小鼠细胞免疫功能,增强机体抵抗烟曲霉菌感染能力。