广东省SARS流行株M基因序列分析

目的：测定广东省不同流行时期13份SARS病毒(SARS CoV)标本的M基因序列，通过分析该基因序列的变异情况，初步了解广东省SARS病毒在流行过程中是否发生了变异。方法：提取病毒RNA，用M基因特异引物进行RT-PCR，将产物纯化后直接测定核苷酸序列。结果：13份标本M基因核苷酸序列同源性很高，为99．7％～100％，M基因核苷酸序列只在2个位点(80和203位)发生变异，1株80位点的变化引起编码的氨基酸从苯丙氨酸(F)变为半胱氨酸(C)，3株203位变化为无义突变。结论：M基因核苷酸序列变异不大，初期和后期M基因核苷酸序列与流行高峰期的毒株相差1个碱基，但氨基酸序列相同；从香港感染病人分离的1株病毒M基因与广东本地感染分离株存在1个氨基酸的差异。     

广东省1990～2000年登革热流行病学分析

目的 明确广东省登革热流行因素。探讨预防控制对策。方法 调查分析1990-2000年登革热病例的分布特征和流行因素，测定登革Ⅰ型病毒地方分离株E/NS1基因片段核苷酸序列。结果 1990-2000年间，广东省共报告登革热病例9747例，死亡3例。年发病率在0/10万-9.75/10万之间，平均为1.27/10万。流行多呈爆发，疫情涉及13个市（占全省21个市的61.9%)。主要集中在广州，潮州，肇庆和佛山市，呈现高度集中而相对分散特点，敏月均有登革热病例报告，其中1-6月份为散发输入病例，7-12月份为流行期，男性：女性为1.04:1，所有年龄组均易感，四个型别的登革病毒均发生过流行，同一地区不同年份可流行不同型别病毒，同一年份不同地区也可流行不同型别病毒，广东省12株登革Ⅰ型病毒地方分离株E/NS1基因片段核苷酸序列，显示广东省登革Ⅰ型代表毒株可分为两个基因亚型。临床表现以典型登革热为主，广东省存在有利于登革热流行的自然因素和社会因素。结论 广东省登革热疫情同国外登革热流行程度相关联。流行呈输入性流行的特征，至今仍无证据表明已成为地方性疾病。     

广东1990～1993年艾滋病检测确认情况分析

广东１９９０～１９９３年艾滋病检测确认情况分析曾常红，温寿如，赵茜茜，林恺生，江立敏，周惠琼，林鹏我们从１９９０年开展艾滋病（ＨＩＶ）抗体检测确认工作，１９９１年８月卫生部正式批准我实验室为ＨＩＶ检测确认实验室。几年来收到本省各ＨＩＶ检测筛选实验室及...     

乙型脑炎病毒膜蛋白B区多肽抗原的表达、纯化及血清学评价

目的在原核表达系统中对乙型脑炎病毒包膜糖蛋白(E蛋白)的B区多肽抗原进行高效表达、纯化及血清学评价。方法利用PCR技术从乙脑减毒活疫苗中扩增编码B区的DNA片段,酶切消化后连接到表达载体pET22b上,用此连接产物转化大肠埃希菌BL21(DE3)并表达B区多肽抗原,表达产物经液相层析纯化;用乙脑病人血清对纯化后的B区多肽抗原进行评价。结果重组质粒pET22b-JEB经双酶切,其插入的外源基因片段为372 bp,与预期DNA片段大小一致。将纯化前与纯化后的蛋白作SDS-PAGE电泳,均可见一条约16kD的外源基因蛋白带,与计算的相对分子质量相符。经WB和ELISA血清学评价,表明重组B区多肽抗原具有较高的灵敏性及特异性。结论成功构建了表达载体pET22b-JEB,在原核系统中表达的B区多肽抗原具有良好的血清学检测价值。     

广东省8例艾滋病病例调查分析

广东省８例艾滋病病例调查分析广东省艾滋病监测检验中心（广州市５１０３００）林鹏江立敏曾常红温寿如赵茜茜林恺生周惠琼我省自１９８６年开展艾滋病监测工作以来，截至１９９４年１２月共检测各类检材３７６６０５份，检出ＨＩＶ抗体阳性者１１７例，其中本省公民５３...     

不同抗原性甲3 (H3N2) 亚型流感病毒的鉴定及分子生物学研究

目的：对不能用当年标准血清进行鉴定的甲3（H3N2）亚型流感病毒进行抗原性分析及分子生物学研究。方法：用交互血凝抑制试验对毒株进行抗原性分析,提取病毒RNA,用一步法逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）扩增HA1（血凝素重链区）基因片段,产物纯化后测序并分析结果。结果：发现两株从鸡胚分离到的甲3（H3N2）亚型“D”相毒株与2株从MDCK细胞分离到的“0”相毒株抗原性已明显不同;其中1999年分离的“D”相与“0”相2毒株的抗原比大于256,氨基酸序列同源性为93％,抗原决定簇A区和B区氨基酸位点相差分别为50％及35％;受体结合部位（RBS）有6个氨基酸位点发生变异（左侧壁1个、前壁3个、右壁2个）。结论：人群中存在没有发生“0”相变异的甲（H3N2）亚型“D”相毒株,其抗原性与当前流行的“O”相变异株已明显不同,提示今后在鉴定甲3（H3N2）亚型毒株时,需根据毒株的来源和相特性选择适合的标准血清进行鉴定。     

一名HIV/TB双重感染者的HIV分离和鉴定

1996年8月,我们采用改良的正常人PBMCs与病人PBMCs共培养法,从一名HIV/TB双重感染者的PBMCs中分离出1株HIV—1病毒,命名为GD—3.该毒株毒力强,在正常人PBMCs中培养能引起明显的细胞病变,其HIV—1p24抗原滴度超过阈值,但对H_9细胞不敏感.该毒株经基因序列分析为HIV-1E亚型,与广东省其它经性途径感染HIV人群中的HIV-1亚型相同.     

采用异源双链泳动法进行HIV-1亚型分析的研究

目的 探索一种简单、敏感、特异和成本低的HIV-1亚型亚型测定方法。方法 采用改良的异源双链泳动法(HMA)与DNA序列分析法对14份HIV-1抗体阳性者样本进行亚型测定、分析和比较。结果 用HMA改良法明确测定了14份样本中的13份样本的亚型。在14份样本中对13份样本进行DNA序列分析有12份的结果与HMA的相符,符合率达92.3％。结论 改良的HMA测序法是一种简单、敏感、特异和经济的HIV-1亚型测定方法,可在广大的基层单位推广应用。     

HIV-1核心抗原p24基因的表达、纯化及抗原性分析

目的在原核系统中表达全长HIV-1 p24抗原,并对其抗原性进行鉴定。方法利用PCR技术从HIV-1全基因质粒(BH-10)中扩增p24抗原基因,通过酶切消化后连接到表达载体pET22b上,用此连接产物转化大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导,表达p24抗原。运用双酶切技术、SDS-PAGE电泳检测插入基因片段的正确性,并用W estern B lot(WB)及ELISA法对表达产物的抗原性进行检测。结果PCR产物和构建的重组质粒pET22b-p24经双酶切插入的外源基因片段均为690 bp,与预期p24抗原全基因片段大小一致。纯化蛋白SDS-PAGE电泳,可见1条相对分子量约26×103的外源表达蛋白带,与预期大小一致,未见杂蛋白带。WB结果显示重组蛋白与HIV-1阳性血清呈特异性反应,与健康人血清没有反应。ELISA检测p24抗原灵敏度为93.94%(62/66),特异性为93.33%(28/30)。结论构建了HIV-1 p24表达载体pET22b-p24,并在原核细胞中高效表达,其表达产物具有良好的抗原性,为研制HIV抗体确认试剂奠定了良好的基础。     

登革重组抗原与登革IgG抗体反应的敏感性和特异性分析

目的对登革重组包膜蛋白(E蛋白)抗原与登革病毒IgG抗体反应的敏感性和特异性进行评估和分析。方法将登革1-4型重组E蛋白抗原包被ELISA反应板,用间接法ELISA检测登革病人及其它血清样本登革病毒IgG抗体。结果重组抗原能检测出登革病人体内IgG抗体水平和变化情况,对2004年中山登革热疫情病人恢复期血清IgG抗体检出率达100%,无一漏检;在曾流行过登革热的疫区,能检出登革病毒IgG抗体阳性血清;重组抗原与乙脑病人血清没有交叉反应;评估结果显示“登革病毒IgG抗体检测试剂”的灵敏度为95·93%,特异度为96·86%。结论登革1-4型重组E蛋白抗原对登革病毒IgG抗体具较高的敏感性和特异性,可作为“登革病毒IgG抗体酶联免疫诊断试剂盒”开发的原材料。