双波长等吸收紫外分光法测定玻璃体内苏拉明浓度

[目的]设计并论证检测玻璃体内苏拉明质量浓度的双波长等吸收紫外分光法.[方法]25只白兔摘除眼球冷冻后获取玻璃体,经过匀浆、沉淀、稀释等系列预处理后首先检验正常兔眼玻璃体个体差异性及紫外分光法测定玻璃体内苏拉明浓度的方法学特异性.接着建立标准曲线方程,考察检测方法的精密度和准确度,确立最低检测定量限,最后检测苏拉明在玻璃体内的样品稳定性.[结果]选取261 nm和269 nm两波长,全部6个个体及混合玻璃体的吸光值差△A(A261-A269)介于±0.002之间;外加高、低浓度苏拉明的曲线以及实际注药的高、低浓度苏拉明曲线与空白玻璃体的曲线走势一致且位于其上,各曲线的波峰波谷位置未见偏移;标准曲线方程为y=4 234 x 2,r=0.999 1;次低、中浓度、次高标准浓度点的日内相对标准差(RSD)分别为13.16%、9\67%、10.35%,日间RSD分别为17.59%、10.09%、11.11%,相对回收率分别为:(95.89±0.08)%、(96.69±0.07)%、(97.43±0.01)%;设计标准曲线的最低质量浓度45μg/mL;其日内、日间相对标准差分别为14.14%、15.94%,检验回收率为(94.92±0.01)%;常温组样品,8 h及以内稳定性尚好,之后不稳定.低温组及3次冻融组稳定性良好.[结论]在给定条件下,白兔玻璃体的个体差异可以忽略,双波长等吸收紫外分光法检测玻璃体内苏拉明浓度的方法学特异性好,精确度、准确度、灵敏度和样品稳定性符合规定要求,因此用该方法测定的玻璃体内药物浓度结果可靠.     

环缩酚肽抑制视网膜表达VEGF及PECAM基因和血管增生

[目的]观察两种环缩酚肽衍生物(Hep-A和Hep-B)对氧诱导的小鼠视网膜表达血管内皮生长因子(VEGF)和细胞黏附分子(PECAM;ICAM-1;VCAM-1)基因的影响及血管增生的变化.[方法]建立氧诱导的血管增殖性视网膜病变模型,12 d开始给小鼠皮下注安慰剂(第1组,n=7)、Hep-A 10 mg/kg(第2组,n=6)或者Hep-B 10 mg/kg(第3组,n=6),每天两次.5 d后取出左侧眼,分离视网膜并抽提RNA,用荧光定量PCR测出上述基因含量,并分别求出每个靶基因与标准基因S16含量的比率;右眼经心脏荧光素灌注后取眼球做视网膜平铺片,用图像分析软件定量计算视网膜新生血管的面积.[结果]视网膜中VEGF/S16的mRNA比率为:第1组(0.554±0.050),第2组(0.355±0.037),第3组(0.287±0.051);PECAM/S16为:第1组(2.050±0.249),第2组(1.228±0.153),第3组(1.027±0.210).经ANOVA分析,第2组和第3组分别与第1组比较,视网膜中VEGF基因表达分别减少36%和48.2%(P=0.001);PECAM基因表达分别减少40.1%(P＜0.05)和49.9%(P＜0.01);而VCAM-1和ICAM-1表达无明显差异.视网膜平片检测视网膜新生血管面积:第1组为(1.06±0.03)mm2/眼,第2组为(0.17±0.01)mm2/眼,第3组为(0.11±0.01)mm2/眼;经ANOVA分析,第2组和第3组分别与第1组比较,视网膜新生血管的面积明显减少(P＜0.001).[结论]两种环缩酚肽衍生物均抑制氧诱导的小鼠视网膜表达VEGF和PECAM基因,并抑制其形成视网膜新生血管.     

白细胞对早期糖尿病视网膜病变作用的研究

目的探讨白细胞在早期糖尿病大鼠视网膜毛细血管中粘附、堆积及其与视网膜微血管形态学变化的关系。方法健康成年雄性Wistar大鼠90只，随机分成正常对照组和链脲佐菌素（streptozotocin, STZ）诱导的糖尿病组各45只（3、7、14 d组各5只，30、90、180 d组各10只）。取大鼠右眼制备视网膜消化铺片，进行形态学观察及白细胞共有抗原（leukocyte common antigen, CD45）单克隆抗体免疫组织化学研究。结果正常对照组视网膜毛细血管中有少许CD45阳性细胞；糖尿病发生3 d后，CD45的表达明显增加，病程第14 d达高峰，以后基本稳定。病程90 d时，视网膜毛细血管已出现节段性膨大、囊样扩张及闭锁等形态学改变；病程180 d时，上述病变进一步加重。结论白细胞粘附发生在糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy, DR）的早期阶段，是DR在微血管水平病理变化的开端。白细胞粘附可能作为视网膜微血管形态学改变的基础，在DR的发生发展中起着重要作用。(中华眼底病杂志,2003,19:344-347)     

人三维体外血管模型的构建

目的 利用HUVEC建立人体外三维血管模型。方法原代培养HUVEC，利用Ⅰ型胶原蛋白建立三维系统，在上面培养HUVEC，随着胶原蛋白的降解，人体外三维血管模型逐渐形成，HE染色三维血管样结构。结果HUVEC成功培养，人体外三维血管模型顺利构建。结论利用Ⅰ型胶原蛋白建立的三维系统，能成功构建人体外三维血管模型。     

急进性后极部早产儿视网膜病变的临床进程及疗效观察

目的 描述急进性后极部早产儿视网膜病变(AP-ROP)的临床进程及特征,评价视网膜光凝及冷凝对急进性后极部早产儿视网膜病变的治疗效果.方法 前瞻性、非对比性、连续性病例.2006年1月至2008年6月经检查确诊为急进性后极部ROP的患儿8例16只眼.确诊后24h内行间接眼底镜下行视网膜光凝治疗联合或不联合直视下冷凝治疗.结果 急进性后极部早产儿视网膜病变以病变大部分位于后极部1区,所有象限视网膜血管扩张迂曲,病程进展快,若不及时治疗,迅速发生视网膜漏斗状全脱离为临床特征.本组8例16只眼视网膜光凝和(或)冷凝治疗后,9只眼病变完全退化或控制,占56.2%.7只眼病情未能控制,最终发展为4b至5期视网膜病变.结论 AP-ROP进展快,预后不良,部分患儿虽经严密观察和治疗,病情仍进展.视网膜光凝和(或)冷凝治疗能控制大部分AP-ROP患儿视网膜病变的发展,挽救患儿视功能.临床上需要加强观察和随访,早发现、早诊断、早治疗是减低该病致盲率的惟一方法.     

黄斑裂孔的游标高敏视力特征

目的　探讨游标高敏视力检测黄斑裂孔眼视功能的临床应用价值。方法　采用自行研究设计的游标高敏视力检查系统软件 ,对 2 7例 (2 7只眼 )黄斑裂孔患者进行游标高敏视力检查 (其中 16例 16只眼经手术前后对比 ) ,受检者按要求判断计算机显示屏上活动光标与固定光标的相对位置关系 ,并通过移动轨迹球调整光标 ,计算机自动分析活动光标和固定光标位置之偏差 ,得出平均阈值及其变异度。结果　黄斑裂孔组的游标高敏视力阈值与同龄正常组比较明显升高 ,阈值变异度增大 ,与正常眼比较差异均有非常显著性 (P<0 .0 1)。手术治疗组术前术后游标高敏视力比较 ,阈值的差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ,阈值变异度差异有显著性 (P<0 .0 5 )。黄斑裂孔视力与游标视力阈值的相关系数为 - 0 .79,与游标视力阈值变异度的相关系数为 - 0 .85。结论　游标高敏视力的阈值及其变异度的高低是反映黄斑裂孔病变轻重的一个功能指标 ,对于辅助早期诊断、分类具有一定的临床应用价值。     

HESR1基因在血管新生中作用的初步研究

目的研究转录因子HESR1在血管新生中的作用。方法检测内皮细胞激活状态HESR1表达的影响,克隆HESR1基因,转染到HUVEC,绿色荧光和PCR观察HESR1在内皮细胞的表达,流式细胞仪检测它对血管内皮细胞增殖,boyden小室检测对细胞迁移的影响,建体外二维血管模型,观察HESR1对血管形成的影响。结果内皮细胞激活状态HESR1的表达下降,HESR1基因能抑制内皮细胞的增殖和迁移,减少血管新生。结论HESR1基因通过抑制内皮细胞的增殖和迁移,使内皮细胞从激活状态转入安静状态,减少血管的形成,维持血管的稳定状态。     

激活素受体样激酶1促进人脐静脉内皮细胞增殖和迁徙

目的： 研究激活素受体样激酶1（ALK1）对人脐静脉内皮细胞的作用。 方法： 体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs），RT-PCR分析ALK1和ALK5在HUVEC激活状态下表达的变化。脂质体转染pcDNA3.1+ALK1到HUVECs，流式细胞仪检测HUVECs增殖的改变，boyden小室检测ALK1对HUVECs迁徙的影响。 结果： ALK1在HUVEC安静状态高表达，ALK1能促进HUVECs的增殖和迁徙。 结论： ALK1通过促进内皮细胞的增殖和迁徙在血管重塑中发挥作用。     

Norrin基因对人视网膜微血管内皮细胞增殖和周期的影响

目的：体外培养并鉴定人视网膜微血管内皮细胞（HRCECs），并探讨Norrin基因高表达对HRCECs增殖和周期的影响。方法： 体外分离、培养并鉴定人视网膜微血管内皮细胞，抗第Ⅷ因子相关抗原抗体鉴定细胞。利用脂质体lipofectamine 2000将AP-3myc-hNorrin/pRK5质粒转染HRCECs，RT-PCR、免疫组化和Western blotting方法检测Norrin/myc的表达确定转染效率。采用MTT法测定转染后细胞的增殖能力，流式细胞术分析其细胞周期变化。结果： 所培养的细胞第Ⅷ因子相关抗原免疫组化为强阳性。AP-3myc-hNorrin/pRK5质粒转染后 24 h，RT-PCR显示实验组Norrin表达水平明显高于阴性对照组(P<0.01)。转染后48h免疫组化及Western blotting均显示实验组细胞Myc表达强于阴性对照组。MTT法显示细胞增殖高于对照组，细胞周期检测示实验组G2期细胞高于阴性对照组，P<0.01。结论：脂质体能成功转染AP-3myc-hNorrin/pRK5进入HRCECs。Norrin高表达能促进HRCECs的增殖，并促进细胞DNA合成，提示Norrin在视网膜血管生成过程中可能具有重要作用。     

人视网膜中神经干细胞样细胞的分离和体外培养

目的 分离培养发育基本成熟的人视网膜中神经干细胞样细胞。方法 取0～3岁猝死婴幼儿视网膜细胞，在干细胞选择性培养基中培养，观察原代和传代细胞的形态和增殖情况，并对其诱导分化。通过免疫细胞化学方法检测Nestin、MAP-2和GFAP的表达。结果 原代细胞可形成悬浮生长的致密球状细胞团，传代后能形成新的细胞球。部分细胞球表达Nestin，传代后阳性率增加。分化后细胞形态多样，每一团细胞相对一致，部分细胞表达MAP-2或GFAP。结论 0～3岁人视网膜中存在一种表现出神经干细胞特性的细胞。