电针对胰岛素抵抗肥胖大鼠肠道菌群的影响

[目的]观察电针对高脂饮食诱导的胰岛素抵抗肥胖大鼠肠道菌群结构和功能以及体重、进食量、胰岛素敏感性的影响,探讨电针改善胰岛素抵抗肥胖的机制。[方法]48只健康Wistar雄性大鼠,随机挑选8只喂以普通饲料作为正常组,其余40只喂以高脂饲料建立胰岛素抵抗肥胖模型。8周后,造模成功的大鼠随机分为模型组、电针组和假电针组,每组8只。电针组取穴:"丰隆""中脘""关元""足(后)三里"。假电针组给予穴旁5 mm处浅针刺,夹持电极,不通电。每次10 min,隔日一次,共治疗8周。分别在治疗前及治疗2、4、6、8周后测量所有大鼠的体重和24 h进食量;治疗结束后以高胰岛素-正葡萄糖钳夹术测定所有大鼠的胰岛素敏感性[用葡萄糖输注速率(GIR)表示];用ELISA法测定血清胰岛素水平;用宏基因组学检测技术检测肠道菌群的分布和特定菌群、代谢功能。[结果]治疗后,与正常组相比,模型组大鼠的24 h进食量、体重和血清胰岛素均显著升高(P<0.01),而GIR显著降低(P<0.01),模型组大鼠肠道拟杆菌门丰度明显减少、厚壁菌门丰度明显升高;且模型组大鼠的肠道菌群在一般功能预测、碳水化合物的转运与代谢、氨基酸的转运与代谢、能量的产生与转化、脂质的转运与代谢COG蛋白功能聚类均降低;与模型组和假电针组相比,电针组大鼠的24 h进食量、体重和血清胰岛素均显著降低(P<0.01),而GIR显著升高(P<0.01),拟杆菌门丰度有升高趋势,厚壁菌门丰度有降低趋势;电针组以上功能COG蛋白功能聚类均有上升趋势。属水平heatmap显示肠道菌群结构和丰度比较,电针组与正常组肠道菌群有相似性,模型组和假电针组肠道菌群也有相似性,但与电针组与正常组之间差异有统计学意义。COG聚类heatmap比较,电针组和正常组有相似性,模型组和假电针组也有相似性,但与电针组与正常组之间差异有统计学意义。[结论]电针可以有效调控胰岛素抵抗肥胖大鼠肠道菌群的结构和功能,可能是电针改善胰岛素抵抗肥胖的机制之一。     

乌梅丸对溃疡性结肠炎大鼠组织细胞因子的干预效应

目的：观察中草药乌梅丸对溃疡性结肠炎大鼠组织促炎细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素6，8和抗炎细胞因子白细胞介素10的影响，并比较乌梅丸与柳氮磺胺吡啶治疗效果。方法：实验于2002—10／2003—03在湖北中医学院中心实验室完成。①选用健康SD大鼠56只，雌雄各半。按雌雄随机分4组：正常组、乌梅丸组、柳氮磺胺吡啶组、模型组，每组14只（雌雄各半）。应用2，4-二硝基氯苯免疫加储酸局部灌肠法建立溃疡性结肠炎大鼠模型，除正常组外，其余组均造模。②乌梅丸组：给予配制的乌梅丸液（中草药乌梅丸为本院自制，成分：乌梅16g．细辛6g．干姜10g．黄连16g，当归4g，附子6g，蜀椒4g，桂枝6g，生晒参6g，黄檗6g。按传统方法配制成含生药浓度分别为515g/L的水煎剂）3mL灌胃，1次／d；柳氮磺胺吡啶组：给予柳氮磺胺吡啶混悬液3mL在造模后灌胃，1次／d；模型组和正常组：均以蒸馏水3mL灌胃，1次／d。各组均给药15d。（固然后于第16天，采用酶联免疫吸附法检测结肠组织白细胞介素6，8，10，肿瘤坏死因子α含量。④计量结果差异比较采用t检验、方差分析（q检验）。结果：由于每组大鼠在灌胃前随机抽取2只进行病理检查以及部分标本采集不合格，正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶组、乌梅丸组分别脱失2，4，5，3只，最终进入结果分析以上各组大鼠分别为12，10，9，11只。①大鼠结肠组织白细胞介素6，8，肿瘤坏死因子“含量：模型组均明显高于正常组（P〈0．01），柳氮磺胺吡啶组和乌梅丸组明显低于模型组（P〈0．01），乌梅丸组明显低于柳氮磺胺吡啶组（P〈0．01）。②大鼠结肠组织白细胞介素10含量：模型组明显低于正常组（P〈0．01），柳氮磺胺吡啶组和乌梅丸组明显高于模型组（P〈0．01），乌梅丸组明显高于柳氮磺胺吡啶组（P〈0．05）。结论：乌梅丸有上调抗炎细胞因子白细胞介索10。下调促炎细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素6，8的作用，使溃疡性结肠炎大鼠免疫功能恢复正常，达到治疗的目的；乌梅丸对溃疡性结肠炎干预效果优于柳氮磺胺吡啶。     

从细胞外信号调节激酶-1mRNA在肝纤维化大鼠肝组织中的表达来探讨姜黄素的治疗作用

目的:探讨ERK-1mRNA在CCl4致实验性肝纤维化大鼠肝组织中的表达及姜黄素(curcumin)对它们的影响。方法:建立CCl4诱导的大鼠实验性肝纤维化的模型,用免疫组化法比较正常组、模型组以及姜黄素组大鼠的α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle action,α-SMA)的表达,用RT-PCR法比较各组大鼠肝组织胞外信号调节激酶-1(Extracellular-regulated kinase-1,ERK-1)的表达。结果:模型组大鼠α-SMA以及ERK-1mRNA的表达增高明显,而姜黄素组则较模型组低。结论:姜黄素可能通过抑制α-SMA的表达,抑制ERK-1的促肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)的增殖作用,从而产生抗四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的作用。     

护理程序在晨交班中的应用

从 1999年 3月开始 ,我科改变了传统的叙述式交班模式 ,尝试了运用护理程序进行晨交班 ,收到了较好的效果。1　交班的对象凡当天收治的新病人、重危抢救病人、特殊观察的病人均为交班的对象。2　交班的方法2 1　先由交班护士按以下程序对需交班的病人逐一交班 :(1)先报告病人的评估资料。 (2 )根据评估资料提出目前病人存在的或潜在的主要护理诊断 /问题。 (3)针对提出的主要护理诊断 /问题制定的护理措施。 (4 )各项措施落实情况。(5 )病人的效果 :哪些护理诊断 /问题已经解决或不存在 ,哪些护理诊断 /问题仍然存在或潜在 ,哪些措施需继续…     

阿胶强骨口服液对去卵巢骨质疏松大鼠骨密度、生物力学、25-(OH)D3和1,25-(OH)2D3的影响

目的：研究阿胶强骨口服液对去卵巢骨质疏松大鼠骨密度（BMD）、生物力学、25-（OH）D3和1，25-（OH）2D3，的影响，探讨阿胶强骨口服液治疗原发性骨质疏松症的疗效机制。方法：4月龄健康雌性SD大鼠36只，随机分为3组，每组12只，分别为模型组，假手术组，阿胶强骨口服液治疗组。除假手术组外所有大鼠手术摘除双侧卵巢后导致雌激素缺失从而诱导骨质疏松症模型，分别在实验的第4、8、12周采用DEXA法分析股骨头及粗隆部的骨密度，生物力学技术分析股骨头生物力学参数，酶联免疫吸附方法检测25-（OH）D3和1,25-（OH）2D3的含量。结果：阿胶强骨口服液治疗组与模型组比较，股骨头及粗隆部骨密度明显提高（P〈0．05）；最大载荷（ML）及最大压应变（MS）等指标明显增强（P〈0．05）；血液、肝脏和肾脏组织中25-（OH）D3和1，25-（OH）2D3的含量明显提高，且组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。阿胶强骨口服液治疗组与假手术组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：阿胶强骨口服液在雌激素缺失早期即可在蛋白水平上调节25-（OH）D3和1，25-（OH）2D3的表达，激活骨代谢，提高骨密度，增强骨质量，起到预防骨质疏松的作用。     

β2AR、β-arrestin2、NF-κB p65在溃疡性结肠炎大鼠中的表达及乌梅丸的干预作用

目的:检测溃疡性结肠炎大鼠在药物治疗前后β2AR、β-arrestin2、NF-κB p65的表达水平.方法:SD大鼠随机分为4组:空白组、模型组、美沙拉秦西药组和乌梅丸中药组.模型成功建立后空白组和模型组以生理盐水3 mL灌胃,美沙拉秦组用50 g/L的美沙拉秦混悬液50mg/100 g灌胃,乌梅丸组给予0.515g/mL的乌梅丸液3 mL灌胃,各组均连续给药15 d后,取脾脏和结肠组织分别用Western blot法和免疫组织化学法检测β2AR、β-arrestin2、NF-κBp65的表达.结果:在正常组织中β2AR、β-arrestin2的表达较多(15.28%±1.71%,15.28%±1.58%),模型组二者的表达明显下降(12.54%±1.28%,12.67%±1.42%),经治疗后,乌梅丸组和美沙拉秦组中二者的表达显著增加(16.27%±1.40%,16.18%±1.12%;17.05%±1.48%,16.77%±1.40%),免疫组织化学法检测显示表达率有统计学意义.而NF-κB p65在正常组织中表达较少,模型组NF-κB p65的表达明显增加(17.79%±1.24%),经药物治疗后其在乌梅丸组和美沙拉秦组中表达明显下降(16.61%±1.42%,15.39%±1.21%),免疫组织化学法检测显示表达率有统计学意义.结论:对于溃疡性结肠炎的治疗,乌梅丸和美沙拉秦均有明显疗效.     

小鼠肝细胞SMAC基因特异干扰载体的构建及慢病毒包装

目的构建并鉴定小鼠SMAC特异干扰载体,并进行慢病毒包装。方法针对小鼠SMAC基因设计并合成3对干扰序列siRNA1、siRNA2、siRNA3及一对阴性对照序列siRNAn,脂质体法转染小鼠肝细胞,Real time PCR法筛选出最佳干扰序列。依据该最佳干扰序列合成DNA oligo,连接GV115载体,获得重组干扰质粒,PCR鉴定阳性克隆并测序鉴定构建的正确性。将该重组干扰质粒与辅助质粒pHelper1.0和pHelper2.0共转染293T细胞,进行慢病毒包装,收集细胞上清并浓缩,梯度稀释法测定病毒滴度。多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验。结果 3条siRNA对肝细胞SMAC mRNA均有不同程度的抑制作用,其中siRNA1的抑制效应最强,抑制效率达到70.3%。依siRNA1片段合成DNA oligo,并与慢病毒载体连接,测序显示其构建正确,梯度稀释法测定慢病毒滴度为6×108TU/ml。结论成功构建了小鼠SMAC基因特异干扰性的慢病毒,为研究SMAC基因在肝衰竭中的作用奠定基础。     

电针对胰岛素抵抗肥胖大鼠炎性反应状态和胰岛素敏感性的影响

目的:观察电针对胰岛素抵抗肥胖(OIR)大鼠机体炎性反应状态和胰岛素敏感性的影响,探讨电针干预胰岛素抵抗的机制。方法:Wistar雄性大鼠随机选取13只作为正常组,给予普通饲料喂养,其余给予高脂饲料喂养。8周后符合肥胖标准的大鼠随机分为模型组、电针组、假电针组,每组13只。电针组取"足三里""中脘""关元""丰隆"穴,连接电针仪治疗,每周3次,每次15 min,共治疗8周;假电针组于电针组腧穴旁开约5 mm处浅刺并夹持电极但不通电,其余同电针组。造模8周后测定各组大鼠的葡萄糖输注速率(GIR);于干预第6周检测腹腔糖耐量(IPGTT)和腹腔胰岛素耐量(IPITT);治疗结束后取心尖血用酶联免疫吸附法检测血清中胰岛素(INS)和C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;Western blot法和实时荧光定量PCR法检测脂肪组织中IL-6、TNF-α、IL-10、IL-1β、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)蛋白和mRNA表达水平;免疫组织化学法检测脂肪组织中CD68的表达。结果:与正常组比较,模型组GIR水平显著下降,IPGTT和IPITT中血糖值及血清INS、CRP、IL-6、TNF-α水平均显著升高,脂肪组织中IL-6、TNF-α、IL-1β、MCP-1蛋白和mRNA表达显著增高,IL-10蛋白和mRNA表达显著下降,CD68的表达明显增高(P<0. 01,P<0. 05)。与模型组比较,电针组GIR水平显著升高,IPGTT和IPITT中血糖值及血清INS、CRP、IL-6、TNF-α水平显著下降,脂肪组织中IL-6、TNF-α、IL-1β、MCP-1蛋白和mRNA表达显著降低,IL-10蛋白和mRNA表达显著升高,CD68的表达明显减少(P<0. 01,P<0. 05);干预后假电针组与模型组比较,各指标差异无统计学意义(P>0. 05)。结论:电针可以降低OIR大鼠机体炎性反应状态,提高机体胰岛素敏感性。